载氨甲环酸靶向微球及其制备方法与应用技术

本发明专利技术提供了一种载氨甲环酸靶向微球及其制备方法与应用。本发明专利技术采用双乳化法制备载氨甲环酸靶向微球，光镜下本发明专利技术的载氨甲环酸靶向微球粒径均匀，分散性好，无团聚现象；平均粒径为1811±369.4nm；平均电位为‑24.7±4.4mV；流式细胞仪检测载药微球连接RGD连接率为92.88％；包封率为18.5±2.4％，载药量为3.7±0.5％。3h时超声辐照组的释药率达到27.3±1.1％，非超声辐照组的释药率达到20.0±1.6％。本发明专利技术的载氨甲环酸靶向微球具备靶向及载药双重功能，可作为止血剂静脉注射用于脏器创伤后的渗血治疗。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及超声造影
，具体地，涉及载氨甲环酸靶向微球及其制备方法与在脏器渗血治疗中的应用。
技术介绍
在过去三十余年的时间里，可生物降解聚合物在药学和生物医学领域的应用越来越广泛。聚乳酸[poly(lacticacid),PLA]、聚羟基乙酸[poly(glycolicacid),PGA]及它们的共聚合物聚乳酸-羟基乙酸[poly(lactic-co-glycolicacid),PLGA]等共聚物，这些高分子材料具有良好的生物降解性、组织相容性、高机械性能、良好可塑性及修饰性能等特点，已被广泛应用生物医学领域。其中，PLGA已广泛应用于组织工程及药物递送系统，其可构成微球作为药物递送载体进行释药，最终在体内代谢为二氧化碳和水，对人体无害(乳糖缺陷者除外)。在美国，PLGA已通过食品和药品管理局(FoodandDrugAdministration,FDA)认证，被正式作为药用辅料收录在美国药典中。与磷脂材料相似，PLGA亦可以进行表面修饰，使其表面具备可以连接靶向物质的功能基团。PLGA在生物医学领域应用广泛，其生物兼容性好，无毒，体内可降解为二氧化碳和水，国内外许多科学研究均将该复合材料应用于药物递送系统、组织工程、医学等领域，目前PLGA已通过美国FDA认证，被正式作为药用辅料收录在美国药典中，作为注射型药物制剂的高分子聚合材料。除此之外，本部分实验中所涉及材料：PEG，RGD均已被美国FDA批准用于其他材料上。已有研究证实，在正常血凝块形成过程中，PEG化的微球/微粒并不会影响凝血机制。PEG的亲水性使得PEG如同微球表面壳的保护伞，可减少血浆蛋白与磷脂对微球的吸收破坏，从而增强其体内的循环时间，使之可以在损伤部位聚集。根据所载药物的特性，主要是疏水性与亲水性之分，PLGA可将药物携载于微球壳层内或包裹于其壳核心内，在体内随着PLGA的降解而达到药物释放的目的，该药物递送方式优点有四：一是避免或减少药物直接进入体内后所引发的过敏反应；二是增加药物的体内的循环时间；三是结合PLGA靶向性能，可起到靶向释药作用，增强局部药物浓度，减少药物用量；四是避免多次给药，减轻患者痛苦。PLGA作为药物递送系统主要是递送疫苗、基因、药物和其他生物分子，其中药物主要是抗肿瘤药物，目前尚未见PLGA载止血药物的相关报道。因PLGA的给药途径为静脉注射给药，故止血药物首要的满足条件即可静脉注射。目前临床所用止血药物几乎均为水溶性药物，而PLGA载水溶性物质的能力较脂溶性物质差。RGD肽是一类含精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp)序列的短肽，广泛存在于人体内，是整合素与其配体蛋白作用的识别位点，此结构作为受体广泛存在于细胞外基质成份中，如纤维蛋白原、玻璃体结合蛋白、骨桥蛋白等，在血管再生、血栓、炎症、肿瘤等机体病理活动中发挥了重要作用，因此，该多肽及其衍生物成为肿瘤及血栓靶向治疗等疾病关注与研究的热点。在机体出血启动凝血反应的过程中，血小板发挥了重要作用。静止的血小板膜表面存在着许多糖蛋白(GP)，其中GPIIb/IIIa复合物，即αIIbβ3整合素，是血小板含量最多的糖蛋白，30％的GPIIb/IIIa复合物是以隐蔽状态分布于开放管道系统和α颗粒上。当血小板活化时，处于隐蔽状态的GPIIb/IIIa复合物全部表达在膜表面并发生空间构型的改变，精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(Arg-Gly-Asp，RGD)序列是血小板GPIIb/IIIa受体特异性的识别、结合位点，纤维蛋白原便是通过该识别序列与血小板结合。包含RGD序列的多肽对于GPIIb/IIIa有很强的粘附性，其中环状RGD多肽[Cyclic(c)RGD，cRGD]较之于线性RGD多肽有更强的粘附性，前者是后者的30倍，在体内高速血流条件下Cyclic(c)RGD更具有粘附活化血小板的优势。与血栓形成相似，在创伤出血时，机体凝血瀑布样反应即刻启动，血小板受到损伤血管等因素的刺激后活化、聚集，成为血小板凝块，起到初期止血作用，活化血小板表面暴露的GpⅡb/Ⅲa可以特异性地与RGD肽结合。RGD多肽作为活化血小板GPIIb/IIIa受体的特异性识别序列，目前多用于动脉粥样硬化不稳定斑块显影及靶向治疗的基础研究中。氨甲环酸(tranexamicacid,TXA)为临床常用止血药，其为合成的赖氨酸类似物，极易溶于水，具有抗纤维蛋白溶解酶的作用，常用于急性或慢性、局限性或全身性原发性纤维蛋白溶解亢进所导致的各种出血。临床研究证实，TXA可减少失血量并可减少术中30～40％的输血量，TXA在创伤中的作用也通过大规模随机对照研究得到了临床证实，提倡早期应用减少出血，降低出血所致死亡率。目前尚未见RGD靶向且包载药物的PLGA微球对于创伤出血/渗血治疗的相关研究。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种载氨甲环酸靶向微球及其制备方法。本专利技术的另一目的在于提供载氨甲环酸靶向微球在体内脏器渗血的靶向治疗中的应用。本专利技术首先提供一种载药靶向微球，通过以下方法制备得到：包括以下步骤：(1)将聚乳酸-羟基乙酸微球(PLGA)充分溶解于CH2Cl2中，避免CH2Cl2挥发；(2)向步骤(1)溶液中加入待吸附的药物，振荡成乳白色乳化液，得到W/O微球，即水/油相微球；(3)向步骤(2)溶液中加入聚乙烯醇(PVA)，均质，形成W/O/W微球，即水/油/水相微球；(4)搅拌使CH2Cl2完全挥发；(5)向上述溶液中加入RGD溶液，振荡反应；(6)再经多次双蒸水洗涤、离心、收集，即可得到载药靶向微球。进一步地，步骤(1)中聚乳酸-羟基乙酸微球与CH2Cl2的质量体积比为10-40mg:1ml。优选地，步骤(1)中聚乳酸-羟基乙酸微球与CH2Cl2的质量体积比为25mg:1ml。优选地，步骤(2)所述的药物为氨甲环酸TXA。更进一步地，步骤(2)中加入的氨甲环酸TXA与PLGA的质量比为1:3-10。优选地，步骤(2)中加入的氨甲环酸TXA与PLGA的质量比为1:5。步骤(2)的振荡方法为声振仪100W声振30s(脉冲式，10son，5soff)。步骤(3)加入的PVA浓度为3-8wt％，加入的量按与CH2Cl2的体积比为10-3:1。优选地，步骤(3)加入的PVA浓度为5wt％，加入的量按与CH2Cl2的体积比为5:1。步骤(3)采用高速均质分散机进行均质，10000-15000rpm，均质1-3min。进一步优选13000rpm，2min。步骤(5)加入的RGD溶液中，其溶质RGD与PLGA的质量比为1:200-400。步骤(5)的振荡反应条件为室温80-200rpm振荡反应1.5-3h。含有上述载药靶向微球的药物属于本专利技术的保护范围。含有上述载氨甲环酸的靶向微球(PLGA-TXA-RGD)属于本专利技术的保护范围。本专利技术提供了上述载氨甲环酸靶向微球在制备机体内渗血的靶向治疗药物中的应用。本专利技术提供了一种载氨甲环酸靶向微球的制备方法，包括以下步骤：(1)将聚乳酸-羟基乙酸微球PLGA充分溶解于CH2Cl2中，避免CH2Cl2挥发；(2)向步骤(1)溶液中加入氨甲环酸TXA，振荡成乳白色乳化液，得到W/O微球，即水/油相微球；(3)向步骤(2)溶本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种载氨甲环酸靶向微球，其特征在于，通过以下方法制备得到：包括以下步骤：(1)将聚乳酸‑羟基乙酸微球PLGA充分溶解于CH2Cl2中，避免CH2Cl2挥发；(2)向步骤(1)溶液中加入氨甲环酸TXA，振荡成乳白色乳化液，得到W/O微球，即水/油相微球；(3)向步骤(2)溶液中加入聚乙烯醇PVA，均质，形成W/O/W微球，即水/油/水相微球；(4)搅拌使CH2Cl2完全挥发；(5)向上述溶液中加入RGD溶液，振荡反应；(6)再经多次双蒸水洗涤、离心、收集，即可得到载氨甲环酸靶向微球PLGA‑TXA‑RGD。

【技术特征摘要】
1.一种载氨甲环酸靶向微球，其特征在于，通过以下方法制备得到：包括以下步骤：(1)将聚乳酸-羟基乙酸微球PLGA充分溶解于CH2Cl2中，避免CH2Cl2挥发；(2)向步骤(1)溶液中加入氨甲环酸TXA，振荡成乳白色乳化液，得到W/O微球，即水/油相微球；(3)向步骤(2)溶液中加入聚乙烯醇PVA，均质，形成W/O/W微球，即水/油/水相微球；(4)搅拌使CH2Cl2完全挥发；(5)向上述溶液中加入RGD溶液，振荡反应；(6)再经多次双蒸水洗涤、离心、收集，即可得到载氨甲环酸靶向微球PLGA-TXA-RGD。2.如权利要求1所述的载氨甲环酸靶向微球，其特征在于，步骤(1)中聚乳酸-羟基乙酸微球与CH2Cl2的质量体积比为10-40mg:1ml。3.如权利要求1所述的载氨甲环酸靶向微球，其特征在于，步骤(2)加入的氨甲环酸TXA与PLGA的质量比为1:3-10。4.如权利要求1所述的载氨甲环酸靶向微球，其特征在于，步骤(3)加入的PVA浓度为3-8wt％，加入的量按与CH2Cl2的体积比为10-3:1。5.如权利要求1所述的载氨甲环酸靶向微球，其特征在于，步骤(3)采用高速均质分散机...

【专利技术属性】
技术研发人员：黎檀实，吕发勤，周璇，冯聪，陈力，
申请(专利权)人：中国人民解放军总医院，
类型：发明
国别省市：北京;11