一种乳酸菌制剂及其在胃溃疡治疗中的应用制造技术

本发明专利技术涉及微生物筛选与应用技术领域，具体提供了一种新型乳酸菌制剂。所述乳酸菌制剂可广泛应用于胃溃疡的治疗，能显著提高疗效，溃疡治愈率高达90%，幽门螺旋杆菌根除率高达84%，且治疗耐受性好，适合在临床上进行应用推广。所述乳酸菌制剂中选用的发酵乳杆菌对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用，尤其对幽门螺旋杆菌的抑制作用最强，抑菌圈直径高达23mm。所述发酵乳杆菌对胃酸和胆汁盐的耐受性强，且能在胃酸环境下实现有效增殖。所述发酵乳杆菌KDB‑8对胆固醇的去除率达到93.2%；在1.2 mmol/L H2O2中仍能保持98.5％的存活率；其发酵上清液和无细胞提取物对羟基自由基的清除率分别高达95.1%和90.4%，取得了意料不到的技术效果。

Lactic acid bacteria preparation and its application in treatment of gastric ulcer

The invention relates to the technical field of microbial screening and application, in particular to a novel lactic acid bacteria preparation. The lactic acid bacteria can be widely used in the treatment of gastric ulcer, ulcer can significantly improve the curative effect, high cure rate up to 90%, Helicobacter pylori eradication rate as high as 84%, and the treatment is well tolerated and is suitable for application in clinical practice. The selection of Lactobacillus Fermentation of Lactobacillus in the inhibition effects on Escherichia coli, Salmonella and Staphylococcus aureus were obvious, especially the strongest inhibitory effects on Helicobacter pylori, the antibacterial circle diameter of up to 23mm. The Lactobacillus acidophilus has strong tolerance to gastric acid and bile salt, and can effectively proliferate in the gastric acid environment. The fermentation of Lactobacillus KDB 8 cholesterol removal rate reached 93.2%; the survival rate can still keep 98.5% of the 1.2 mmol/L in H2O2; the fermentation supernatant and cell extracts on hydroxyl radical scavenging rate as high as 95.1% and 90.4%, achieved unexpected effect.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物筛选
，具体提供了一种乳酸菌制剂及其在胃溃疡治疗中的应用。
技术介绍
益生菌的概念源于希腊语“对生命有益的细菌”，益生菌通常是定植于动物肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效的活性有益微生物(细菌或者酵母)的总称。FAO/WHO《食品益生菌评价指南》明确规定，食品用益生菌是指“服用一定数量后对人体健康有益的活的微生物”，益生菌的有效性与活菌数量和菌种本身的性能密切相关。在我国，益生菌又称微生态调节剂、益生素等，益生菌类保健食品明确规定“益生菌菌种必须是人体正常菌群的成员,可利用其活菌、死菌及其代谢产物”。目前,益生菌仍然以乳酸菌为主,在很多情况下益生菌就是指乳酸菌。乳酸菌是指能发酵糖，主要产生乳酸的一类细菌的总称。绝大多数乳酸菌为革兰氏阳性菌，不运动、无芽孢，不具有过氧化氢酶，兼性厌氧或专性厌氧，可以将各种糖分解成乳酸。乳酸菌不仅可以提高食品的营养价值、改善食品风味、提高食品保藏性和附加值，而且，近年来乳酸菌的特殊生理活性和营养功能正日益引起人们的重视。大量研究表明，乳酸菌对人体具有多方面的保健作用，如调节机体胃肠道正常菌群、保持体内微生态平衡、提高食物消化率和生物价、改善便秘、降低胆固醇水平、改善肝功能、缓解乳糖不耐症、控制内毒素、抑制肠道内腐败菌生长繁殖和腐败产物的产生、制造营养物质、刺激组织发育，从而对机体的营养状态、生理功能、细胞感染、药物效应、毒性反应、免疫反应、肿瘤发生、衰老过程和突然的应急反应等产生作用。由此可见，乳酸菌的生理功能与机体的生命活动息息相关，如果乳酸菌停止生长，人类就很难健康生存。筛选开发优良乳酸菌必须具备的几个标准：(1)必须有好的宿主来源，能刺激宿主本身固有益生菌的生长，本身及其代谢产物能够为宿主提供有益于健康的功能。(2)要有一定的生活力和足够的浓度。在使用和贮备期间，能够继续稳定地维持其活性。(3)必须具有黏附或生长在胃肠黏膜上的能力，能够在胃肠道内微生态环境中定植。(4)必须在宿主内主动争夺营养。(5)要有比较高的蛋白水解酶和β-半乳糖苷酶的活性。乳酸菌是自古以来就被人类所认识的一大类菌，随着人们对其特殊生理功能和保健功能的进一步认识，乳酸菌日益得到人们的重视。目前对乳酸菌的研究已从过去的食品奶酪和发酵乳制品转移到与人体的关系上来，随着人们对乳酸菌生长规律、作用机理的深入了解及分子生物技术的飞速发展，筛选开发出更多优良的乳酸菌菌种意义重大。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种新型乳酸菌制剂，所述乳酸菌制剂选用的发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)筛选自自然发酵的酸菜汁，耐酸性强，抗菌作用明显，应用前景广阔。本专利技术一方面提供了一种乳酸菌制剂，包含发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)。所述发酵乳杆菌优选发酵乳杆菌KDB-8(LactobacillusfermentumKDB-8)，已经于2016年8月29日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2016430。所述的发酵乳杆菌为发酵乳杆菌冻干粉。所述发酵乳杆菌的冻干粉的制备方法，具体步骤包括：(1)配制液体发酵培养基，灭菌；(2)按发酵量的3-5％将发酵乳杆菌接种至液体发酵培养基中；(3)发酵温度35～40℃，发酵时间为10～20小时；(4)将发酵液进行离心，真空冷冻干燥至含水量小于3％，得发酵乳杆菌冻干粉。所述的液体发酵培养基中各组分及其质量体积比分别为：红糖6.5％、葡萄糖5％、乳清粉0.07％、土豆泥0.06％、K2HPO40.03％、KH2PO40.02％、MgSO40.03％。所述的液体培养基的初始pH值为5.5-6.0。进一步优选的，所述的发酵温度为37.5℃。所述乳酸菌制剂还包括麦芽糊精、低聚果糖或风味剂。所述乳酸菌制剂为胶囊剂，片剂或粉剂。所述乳酸菌制剂在胃溃疡治疗中的应用。有益效果本专利技术提供的乳酸菌制剂可广泛应用于胃溃疡的治疗，能显著提高疗效，溃疡治愈率高达90％，幽门螺旋杆菌根除率高达84％，且治疗耐受性好，适合在临床上进行应用推广。所述乳酸菌制剂中选用的发酵乳杆菌KDB-8对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用，尤其对幽门螺旋杆菌的抑制作用最强，抑菌圈直径高达23mm。所述发酵乳杆菌对胃酸和胆汁盐的耐受性强，且能在胃酸环境下实现有效增殖。所述发酵乳杆菌KDB-8对胆固醇的去除率达到93.2％；在1.2mmol/LH2O2中仍能保持98.5％的存活率；其发酵上清液和无细胞提取物对羟基自由基的清除率分别高达95.1％和90.4％，取得了意料不到的技术效果。具体实施例实施例1发酵乳杆菌KDB-8分离筛选及鉴定：1、筛选样品从沈阳苏家屯农村收集自然发酵的酸菜汁作为分离样品，所述酸菜汁外观无污染、味道纯正，发酵时间超过1年，过滤后备用。2、乳酸菌初筛取过滤后的酸菜汁5mL加入45mL无菌水，混匀，涂布于加0.5％碳酸钙的MRS平板上，37℃培养48h，分离培养有透明圈的菌株，获得42株乳酸菌。3、抑菌型乳酸菌筛选1)乳酸菌液制备：将初筛得到的32株乳酸菌分别接种于100mLMRS液体培养基中，37℃静置培养48h；2)致病菌菌液制备：大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和幽门螺旋杆菌(四种致病菌均由山东大学赠送)，将菌种接种于营养肉汤，37℃摇床培养过夜；3)抑菌实验—双层平板，牛津杯法：每5mL灭菌营养琼脂培养基(50℃左右)加100μL致病菌菌液(菌量106数量级)，混匀后倾倒至营养琼脂平板做成双层平板，凝固后在培养基上放置牛津杯，向牛津杯中添加200μL培养好的乳酸菌菌液，待菌液扩散后放入37℃培养箱中培养20h，观察抑菌圈直径。结果显示，初筛获得的乳酸菌中对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和幽门螺旋杆菌的抑菌圈直径均超过15mm的菌株共8株。进一步对其进行抗生素耐受筛选。经过两次删选，最终申请人从上述8株菌中筛选得到对幽门螺旋杆菌的生长抑制作用最强的乳酸菌，命名为KDB-8。表1乳酸菌KDB-8对致病菌的抑制作用致病菌大肠杆菌沙门氏菌金黄色葡萄球菌幽门螺旋杆菌抑菌圈直径21mm20mm20mm23mm由上表可以看出，本专利技术筛选出的乳酸菌KDB-8对大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌均有明显的抑制作用，尤其对幽门螺旋杆菌的抑制作用最强，抑菌圈直径达到23mm。3、菌株鉴定利用试剂盒提取上述乳酸菌KDB-8的基因组DNA，利用PCR技术扩增16SrRNA序列。将测序结果在GenBank核酸数据库中进行blast比对发现，乳酸菌KDB-8的16SrRNA序列与发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)的序列相似度高于99％。因此，确认其为发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)，命名为发酵乳杆菌KDB-8(LactobacillusfermentumKDB-8)，并于2016年8月29日保藏于中国武汉武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCCNO:M2016430。实施例2发酵乳杆菌KDB-8耐酸、耐胆盐实验1、耐胃酸性能检测方法：取活化后的发酵乳杆菌KDB-8菌悬液40ml加入50ml离心管中，离心(5000g、5min)收本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种乳酸菌制剂，其特征在于，所述的乳酸菌制剂包含发酵乳杆菌(Lactobacillus fermentum)。

【技术特征摘要】
1.一种乳酸菌制剂，其特征在于，所述的乳酸菌制剂包含发酵乳杆菌(Lactobacillusfermentum)。2.如权利要求1所述的乳酸菌制剂，其特征在于，所述的发酵乳杆菌保藏编号为CCTCCNO:M2016430。3.如权利要求1或2所述的乳酸菌制剂，其特征在于，所述的乳酸菌制剂为发酵乳杆菌冻干粉。4.权利要求1或2所述的乳酸菌制剂还包括麦芽糊精、低聚果糖和/或风味剂。5.权利要求1或2所述的乳酸菌制剂为胶囊剂，片剂或粉剂。6.权利要求1或2所述的乳酸菌制剂在胃溃疡治疗中的应用。7.权利要求1或2所述的乳酸菌制剂的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括：(1)配制液体发酵培...

【专利技术属性】
技术研发人员：尤升波，郭学建，刘凤彩，张静，孙玉亮，张娟，
申请(专利权)人：济南康多宝生物技术有限公司，山东省农业科学院生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：山东;37