本发明专利技术公开了一种海参磷脂及其在提高机体运动协调能力制品中的应用。所述海参磷脂的主要组分为EPA（二十碳五烯酸）磷脂，含量高达50‑65%。本发明专利技术改进现有的海参磷脂提取方法，显著提高了海参磷脂纯度和其中EPA磷脂的含量。本发明专利技术设计相应的动物实验，在正常饲料中仅添加0.5%的海参磷脂，就明显提高了小鼠在转棒实验中的潜伏期，以及纠正了小鼠在旷场试验中的不正常行为活动；本发明专利技术显著改善MPTP诱导的类似于帕金森小鼠的运动障碍，对改善小鼠的运动协调能力具有明显的效果，本发明专利技术能够应用于改善机体运动协调能力的制品。
Sea cucumber phospholipid and its application in improving the ability of body movement coordination
The present invention discloses one kind of sea cucumber phospholipid and its application in improving the ability of body movement and coordination. The main group of the sea cucumber phospholipid divided into EPA (twenty carbon five acid) phospholipid content of up to 50 65%. The invention improves the existing method for extracting the sea cucumber phospholipid, and improves the purity and the content of EPA phospholipid in the sea cucumber. The invention designs corresponding animal experiments, in the normal feed add only 0.5% sea cucumber phospholipids, significantly increased the latency in the rotarod test in mice, and the mice in the open field test to correct the abnormal behavior; movement disorders similar to Parkinson in the invention significantly improved MPTP induced, has obvious the effect of movement coordination ability to improve mice, products of the invention can be applied to improve the body movement coordination ability.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于活性物质筛选
，尤其涉及一种海参磷脂提取物及制备方法，以及其在预防、改善或治疗机体运动失调制品中的应用。
技术介绍
运动失调，目前包括协调性运动障碍和运动失衡，有多种疾病可造成运动失调，包括：帕金森疾病、痉挛症、心肌梗死疾病、脊髓小脑变性病等。临床上在研制新的改善运动失调的药物或治疗手段时，因帕金森病发病率高、对人类尤其是老年人的生命健康和生活质量影响极大、运动失调等运动损伤表现明显，而成为研究者的焦点。随着人们饮食结构和生活习惯的改变以及环境污染等，运动失调现象越来越普遍，并且越来越趋于年轻化，已成为严重威胁人类生命健康和生活质量的主要疾病之一。因此，运动失调已然成为被中国乃至全世界高度关注的一个重要社会问题及科学问题，所以关于研发有效控制患者症状，进而改善运动失调患者生存质量的抗运动失调药物或食品成为目前关注的焦点。尽管针对运动失调的药物在一定程度上可以缓解患者症状，但是由于个体差异大等原因，依然存在效果差或不同程度的副作用等多种问题。人们倾向于选择服用具有预防、减缓或治疗运动失调作用的功能成分或功能食品来达到减缓运动失调的目的，因此开发安全有效的具有预防、减缓或治疗运动失调作用的功能成分成为迫切要求。海参属棘皮动物门(Echinodermata)海参纲(Holothurioider)楯手目(Aspidochirota)，自古以来被视为一种名贵的滋补食品和药材。海参中的磷脂是海参中活性物质之一，近年来研究发现，海参中的磷脂具有降血脂、降血压、降血糖、提高免疫力、预防阿尔兹海默症等功效，但到目前为止，对于其提高机体运动协调能力，则没有相关的研究报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种海参磷脂及其制备方法，并研究其在改善机体的运动协调能力方面的应用，以弥补现有技术的不足。为达到上述目的，本专利技术提供了一种海参磷脂，其主要组分为EPA（二十碳五烯酸）磷脂，含量高达50-65%。本专利技术还提供了一种海参磷脂的制备方法，包括以下步骤：1）海参制成干粉；2）取海参干粉，在氯仿：甲醇混合溶液中抽提过夜，过滤后，盐溶液抽提，静置分层，收集氯仿层，再经减压浓缩得到海参脂质粗提物；3）将硅胶经活化装柱后，用氯仿平衡硅胶柱；再将步骤2）得到的海参磷脂粗提物用氯仿溶解后，缓慢倒入硅胶柱中，依次用氯仿、氯仿-甲醇混合液、丙酮和甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，得到海参磷脂粗提物；4）纯化：将得到的甲醇洗脱液浓缩后，缓慢的倒入活化后的硅胶柱中，并用氯仿-甲醇-水混合液进行洗脱，洗脱液再进行实时薄层硅胶板层析，集中收集层析后硅胶板上部显色的洗脱液，洗脱液经浓缩干燥即为海参磷脂。进一步的，上述步骤1）中海参制粉，过筛目数至少为200目。进一步的，上述步骤2）中盐溶液优选为0.88%的氯化钾溶液。进一步的，上述步骤2）中氯仿-甲醇混合液的加入量为海参干粉质量的10-20倍（ml/g）。进一步的，上述步骤3）中的氯仿-甲醇混合液中，氯仿和甲醇的体积比为9:1。进一步的，上述步骤3）中使用的硅胶柱的长度与直径为15cm*16cm，步骤4）中使用的硅胶柱的长度与直径为60cm*8cm。进一步的，上述步骤4）中氯仿：甲醇：水混合液的体积比为65:25:4。进一步的，上述步骤4）中薄层硅胶板层析所用展开剂为氯仿：甲醇：水(80:15:1，v/v)。进一步的，上述步骤4）薄层硅胶板层析所用显色剂为碘和Dittmer试剂。上述的海参磷脂提取物在提高机体运动协调能力制品中的应用。进一步的，所述制品为改善机体运动协调能力的组合物；其包括功能性食品或是药品，及相关制品，如饲料等。本专利技术有益的技术效果：本专利技术制得的海参磷脂纯度高，EPA磷脂丰富，在后期的动物实验中，在正常饲料中仅添加0.5%的海参磷脂，就明显提高了小鼠在转棒实验中的潜伏期，以及纠正了小鼠在旷场试验中的不正常行为活动；本专利技术显著改善MPTP诱导的类似于帕金森小鼠的运动障碍，对改善小鼠的运动协调能力具有明显的效果，即能够应用于改善机体运动协调能力的制品。本专利技术提供的海参磷脂提取物的制备方法成本低，步骤简单，使用的有机溶剂量少，对环境产生的有机溶剂污染小，所得的海参磷脂提取物经动物实验证实显著的提高患病小鼠的运动协调能力，可用于开发安全有效的用于预防、改善或治疗运动失调的功能性食品或是药品。附图说明图1为本专利技术实施例2中海参磷脂对小鼠运动协调能力的结果图。图2为本专利技术实施例2中海参磷脂对小鼠自主运动能力的结果图。图3为本专利技术实施例2中小鼠在旷场实验中的运动轨迹图。具体实施方式以下采用实施例并结合附图来详细说明本专利技术。实施例1：海参磷脂提取物的制备第一步，将市售的北大西洋瓜参经真空冷冻干燥粉碎后，磨成粉末（过200目筛）。第二步，取海参干粉10kg，加入100L氯仿/甲醇(2:1，v/v)，搅拌，过滤，用0.88%的氯化钾溶液抽提，静置分层，收集氯仿层，浸提3次，合并浓缩液，经减压浓缩得到海参磷脂粗提取物；第三步，称取硅胶200g，加入5％的水，120℃下活化4h，室温冷却。采用湿法装柱（10*15cm），静置待硅胶沉降完全后，用2倍柱体积氯仿进行压柱，使柱中的硅胶更加密实。取50g的海参粗提取物样品用尽量少氯仿溶解后，用滴管转移该溶液，沿着层析柱内壁均匀加入。先用氯仿适当洗5个柱体积后，用氯仿-甲醇9:1的混合液洗2个柱体积，再用丙酮1个柱体积，最后用甲醇洗脱，收集甲醇洗脱液。第四步，纯化：将上述的洗脱液浓缩到500ml后，缓慢的倒入活化了的60*8cm的硅胶柱（同第三步）中，并用氯仿-甲醇-水（65:25:4）的混合液洗脱，洗脱液进行薄层硅胶板层析(TLC)，展开剂为氯仿/甲醇/水(80:15:1，v/v)，并用碘和Dittmer试剂显色，收集层析后硅胶板上部显色的洗脱液，确认后减压浓缩去除残留有机溶剂即得到海参磷脂提取物。样品鉴定采用TLC法，将硅胶板置于110℃烘箱中活化20min，点样后以氯仿/甲醇/水(80:15:1，v/v)为展开剂展开，展开完毕后，吹干，将显色剂(10％硫酸-乙醇溶液)均匀喷洒于已干燥的薄层板上，并置于110℃烘箱5min，直至TLC板上呈现出紫色斑点。制得海参磷脂得率为50%；纯度为95%；在得率和纯度方面较之于现有技术提供的方法均明显提高了，说明本专利技术提供的制备方法得到了明显的改进。实施例2：海参磷脂提取物对以帕金森病为代表的运动失调能力的改善实验一．材料和方法（1）动物喂养实验动物采用C57/BL6小鼠，雄性，体重22±0.5g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司。将小鼠按体重随机分为3组：正常对照组、模型对照组、实施例1制备的海参磷脂提取物，每组8只，分别喂食相应的饲料。饲料参照AIN-93G啮齿动物饲料配方并加以改良（配方见表1），实验组添加0.5％的海参磷脂提取物，连续喂养3周后腹腔注射1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶（MPTP），每天注射一次，连续注射7天，造成了类似于帕金森的运动障碍症状，具体表现为运动失调，在最后一次注射后，断头处死小鼠。饲养条件：动物单笼单只喂养，自由摄食和饮水，室温23±2℃，相对湿度50-60％，12:12h明暗交替。表1动物实验饲料的成分成分（g/Kg）正常组本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种海参磷脂，其特征在于，该海参磷脂中二十碳五烯酸磷脂的含量为50‑65%。
【技术特征摘要】
1.一种海参磷脂，其特征在于，该海参磷脂中二十碳五烯酸磷脂的含量为50-65%。2.权利要求1所述的海参磷脂在提高机体运动协调能力制品中的应用。3.权利要求1所述的海参磷脂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：1）海参制成干粉；2）取海参干粉，在氯仿：甲醇混合溶液中抽提过夜，过滤后，盐溶液抽提，静置分层，收集氯仿层，再经减压浓缩得到海参脂质粗提物；3）将硅胶经活化装柱后，用氯仿平衡硅胶柱；再将步骤2）得到的海参磷脂粗提物用氯仿溶解后，缓慢倒入硅胶柱中，依次用氯仿、氯仿-甲醇混合液、丙酮和甲醇进行洗脱，收集甲醇洗脱液，得到海参磷脂粗提物；4）纯化：将得到的甲醇洗脱液浓缩后，缓慢的倒入活化后的硅胶柱中，并用氯仿-甲醇-水混合液进行洗脱，洗脱液再进行实时薄层硅胶板层析，集中收集层析后硅胶板上部显色的洗脱液，洗脱液经浓缩干燥即为海参磷脂。4.如权利要求3所述的海参磷脂的制备方...
【专利技术属性】
技术研发人员：王玉明，王丹，徐杰，薛勇，薛长湖，李兆杰，王静凤，常耀光，唐庆娟，
申请(专利权)人：中国海洋大学，
类型：发明
国别省市：山东;37
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