LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种用于LAMP技术鉴别鱼翅真伪的试剂盒，其特征在于包括：LAMP反应液缓冲液0.6mL；引物250μL；荧光染料50μL；酶溶液50μL；阳性对照50μL；去离子水1000Μl。本发明专利技术的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的试剂盒；采用本发明专利技术试剂盒检测鉴别鱼翅真伪方法具有快速、检测灵敏度高、操作简单、结果直接可以判读等特点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的试剂盒，属于生物

技术介绍
鱼翅作为我国传统的海产珍品，被誉为“海味八珍”之一，属于高级滋补品，常与燕窝、鲍鱼、海参等相提并论，它是鱼翅是鲨、鳐、鲛的鳍或尾端部分，经过一系列复杂的加工过程精制而成，主要产于日本、墨西哥、巴西、非洲、中东、印度、南美洲及澳洲，我国的东海、南海也有出产，但是我国是主要的进口国，每年进口约3500吨各种形式的鱼翅。鲨鱼隶属于软骨鱼纲Chondrichthyes、板鳃亚纲Elasmobranchii、鲨目Selachoidei、星鲨属Mustelus，是海洋生物链中最高层的重要鱼类，全世界共有鲨鱼约370种，可是用来割取鱼翅的约20来种，由于其珍贵且稀有，加上市场对它的需求持续的增长，导致各类仿鱼翅、参假鱼翅等泛滥流行，极大地扰乱了我国市场次序，极大地侵害了消费者的权益，甚至危害了消费者的身体健康。急需研究灵敏度高且操作方便适合基层实验室检测的方法来打击假冒伪劣鱼翅产品，以保护消费者的合法权益。目前国内外已有人报道用PCR和FINS方法来鉴定鱼翅的种类，但存在PCR扩增片段过大难以扩增出来，还有设计的引物范围不宽，存在漏检的可能，而且PCR方法需要昂贵仪器设备，操作复杂。目前制备鱼翅的主要鲨鱼种类包括有犁头沙KJ170949.1：Sphyrnalewini；JX827259.1，Sphyrnalewini；HM239662.1Sphyrnalewini、平滑锤头鲨KM489157.1Sphyrnazygaena、公牛鲨KF646785.1Carcharhinusleucas、灰色真鲨KC470543.1Carcharhinusobscurus、黑翼鲨KJ720818.1Carcharhinusmelanopterus、白斑星鲨AB015962.1Mustelusmanazo、欧氏尖吻鲨EU528659.1Mitsukurinaowstoni、海洋白鳍鲨AY820736.1Carcharhinuslongimanus、褐星鲨EU099503.1Mustelushenlei、KJ010763.1Mustelushenlei、沙虎鲨KF569943.1Carchariastaurus、大青鲨GU324148.1Prionaceglauca、鼬鲨KF111728.1Galeocerdocuvier、姥鲨KF597303.1Cetorhinusmaximus、灰星鲨KF889325.1Mustelusgriseus等鲨鱼。目前已有的检测方法，其检测步骤繁琐，采用仪器昂贵，不能快速、方便的实现鉴别鱼翅真伪。故此，现有鉴别鱼翅真伪的检测方法有待进一步完善。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪用的试剂盒；采用本专利技术试剂盒检测鉴别鱼翅真伪方法具有快速、检测灵敏度高、操作简单、结果直接可以判读等特点。为了达到上述目的，本专利技术采用以下方案：一种用于LAMP技术鉴别鱼翅真伪的试剂盒，其特征在于包括：如上所述的一种用于LAMP技术鉴别鱼翅真伪的试剂盒，其特征在于所述的引物包括：正向外引物F3：5’-CAGGATTTCCTGATCAATG-3’；反向外引物B3：5’-GTGTGAACTCAGATCACGT-3’；正向内引物FIP：5’-AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC-AACCAAGTTACCCTAGGGATA-3’；其中所述正向内引物FIP包含F1c和F2序列：F1c：AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC；F2：AACCAAGTTACCCTAGGGATA反向内引物BIP：5’-TACGGCCTCGATGTTGGATC-AGGACTGTTAATCGTTGAACAA-3’所述反向内引物BIP包括含B1c和B2序列：B1c：TACGGCCTCGATGTTGGATC；B2：AGGACTGTTAATCGTTGAACAA。如上所述的一种用于LAMP技术鉴别鱼翅真伪的试剂盒，其特征在于该试剂盒产品规格：45次。一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪的方法，其特征在于包括以下步骤：A、鱼翅DNA的提取采用纳米磁珠提取鱼翅DNA；B、建立LAMP反应体系25μL的LAMP反应体系包括20μL预反应溶液和5μLDNA模板，其中20μL预反应溶液，由以下组分组成：所述引物的序列包括：正向外引物F3：5’-CAGGATTTCCTGATCAATG-3’；反向外引物B3：5’-GTGTGAACTCAGATCACGT-3’；正向内引物FIP：5’-AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC-AACCAAGTTACCCTAGGGATA-3’；其中所述正向内引物FIP包含F1c和F2序列：F1c：AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC；F2：AACCAAGTTACCCTAGGGATA反向内引物BIP：5’-TACGGCCTCGATGTTGGATC-AGGACTGTTAATCGTTGAACAA-3’所述反向内引物BIP包括含B1c和B2序列：B1c：TACGGCCTCGATGTTGGATC；B2：AGGACTGTTAATCGTTGAACAA。C、向Loopamp反应试管中分别加入上述预反应溶液各20μL；D、在预反应溶液中加入待检测的待检测样品DNA5μL，使总量达到25μL；E、对照反应中，阴性对照反应使用普通鲤鱼DNA5μL，空白对照反应使用去离子水5μL，阳性对照使用鱼翅本身提取的DNA5μL；F、用移液器吸排液法混合，或者合上盖子轻击使溶液充分混合后瞬时离心；G、将混合物置于LAMP浊度仪的反应孔中，于60-70℃恒温反应90min，最后60-80℃下保温5min以结束反应；H、采用LAMP浊度仪方法或荧光目测的方法检测检验结果。如上所述的一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪的方法，其特征在于所述(正向外引物F3+反向外引物B3)：(正向内引物FIP+反向内引物BIP)的浓度比为1∶2-1∶10。如上所述的一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪的方法，其特征在于所述的FIP和BIP各1.6μM，各40pmol；F3和B3各0.2μM，各5pmol。如上所述的一种LAMP技术鉴别鱼翅真伪的方法，其特征在于步骤A中所述的纳米磁珠提取鱼翅DNA具体步骤：1)制样：将不同鱼翅样品用锉刀磨碎，取磨碎样品0.1-0.5g的鱼翅组织加入1mL抽提缓冲液进行研磨制成样本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于LAMP技术鉴别鱼翅真伪的试剂盒，其特征在于包括：

【技术特征摘要】
1.一种用于LAMP技术鉴别鱼翅真伪的试剂盒，其特征在于包括：
2.根据权利要求1所述的一种用于LAMP技术鉴别鱼翅真伪的试剂盒，其特征在于所述
的引物包括：
正向外引物F3：5'-CAGGATTTCCTGATCAATG-3’；
反向外引物B3：5'-GTGTGAACTCAGATCACGT-3’；
正向内引物FIP：
5'-AACCCTTTCTTCGATAGGGACTC-AACCAAGTTACCCTAGGGATA-3’；
其中所述正向内引物FIP包含F1c和F2序列：
F1c：...

【专利技术属性】
技术研发人员：陈定虎，陈祖华，王振华，刘恭源，熊仁广，周敏，刘晓媚，张静，冯雪雅，管维，吴颖儿，
申请(专利权)人：陈定虎，
类型：发明
国别省市：广东;44