一种玛卡高效脱毒组织培养的方法技术

本发明专利技术公开一种玛卡高效脱毒组织培养的方法，包括如下步骤：a将玛卡种子消毒，洗去残留；b将玛卡种子放置在培养基上在组培室培养；c待种子萌芽后，继续培养20天；d茎尖移入培养基上诱导愈伤组织；e诱导玛卡丛芽的生成；f组培室扩繁玛卡丛芽；g组培室诱导根系生成；h待组培苗长成后，可调节光照强度的培养室中培养幼苗，是光照强度每两天增加500±100lux的强度下培育10d后，洗净幼苗根系培养基，将幼苗移栽到玻璃温室，光照强4000-5000lux，温度25-28℃，移栽到温室第一周湿度保持在80-90％，以后湿度保持在70-80％继续培养成商品苗。为获得玛卡脱毒苗，本发明专利技术提出了一种新的脱毒方法，具有高效脱毒的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种组织培养的方法，具体涉及一种玛卡高效脱毒组织培养的方法。
技术介绍
玛卡是一种十字花科、独行菜属的一种植物。其原产地位于秘鲁中部，生长在海拔4000m以上的安第斯山区。我国引进的玛卡主要分布在云南、新疆等地的高山上。其他地方由于气候条件的原因，很难形成其特有品质和药效组分。玛卡含有丰富的营养成分和活性成分，其含有14％的蛋白质，碳水化合物59％；纤维8.5％，含有锌、钙、铁、钛、铷、钾、钠、铜、锰、镁、锶、磷、碘等多种微量元素，还含有维生素C、B1、B2、B6、A、E、B12、B5等多种维生素。其天然活性成份包括玛卡酰胺(macamides)、玛卡烯、生物碱、芥子油苷及其分解产物异硫氰酸苄酯、甾醇、多酚类物质。其活性成分无任何毒副作用，有“秘鲁人参”和“南美人参”的美誉。在自然界中，植物很容易受到病毒侵染而引起病毒病。植物一旦被病毒感染后，它的生活力将明显降低，产量和品质也会下降。为了防治病毒病，多年来植物学家们从各方面寻求解决的方法。人们发现对植物进行脱毒，不但可以减轻病毒危害，增加产量而且尽可能小的伤害植物。热处理是一种有效的植物脱毒方法。因为病毒和寄主植物对高温的忍耐性存在差异，使植物的生长速度超过病毒的扩散速度，而得到一小部分不含病毒的植物分生组织，再进行无毒个体培育。在组培过程中用到的有效的脱毒方法化学脱毒法，其中三氮唑核苷(鸟嘌呤类似物)是用到的植物病毒脱毒剂。愈伤组织诱导是另外一种有效的的植物脱毒方法，植物病毒在植物体内的生长速度赶不上愈伤细胞的分裂速度，因此实现了植物的脱毒。但是现有技术中的脱毒方法效率都不高。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题在于提供一种玛卡高效脱毒组织培养的方法，解决现有技术中存在的脱毒效率不高的技术问题。解决上述技术问题所采用的技术方案是一种玛卡高效脱毒组织培养的方法，包括如下步骤：a将玛卡种子用70-75％酒精消毒30-60s，再用0.1％升汞消毒10-20min，倒掉升汞溶液，然后用无菌水清洗种子6-10次洗去残留的升汞和酒精；b将玛卡种子放置在培养基上在组培室培养5天，光照强度1000-2000lux；c待种子萌芽后，在超净工作台上转接到培养基上；继续培养20天，光照强度1500-2500lux；d在超净工作台上取玛卡2-3mm嫩茎，茎尖移入培养基上诱导愈伤组织；e在超净工作台上取玛卡愈伤组织放在分化培养基中培养，室温25±3℃，光照强度1500-2500lux组培室诱导玛卡丛芽的生成；f在超净工作台上将玛卡丛芽接种到继代培养基培养，在室温25±3℃，光照强度1500-2500lux组培室扩繁玛卡丛芽；g在超净工作台上将玛卡丛芽转移到生根培养基上，在室温25±3℃，光照强度1000-1500lux组培室诱导根系生成；h待组培苗长成后，可调节光照强度的培养室中培养幼苗，是光照强度每两天增加500±100lux的强度下培育10d后，洗净幼苗根系培养基，将幼苗移栽到玻璃温室，光照强度4000-5000lux，温度25-28℃，移栽到温室第一周湿度保持在80-90％，以后湿度保持在70-80％继续培养成商品苗。为获得玛卡脱毒苗，本专利技术提出了一种新的脱毒方法，具有高效脱毒的作用。附图说明图1是2,4-D和6-BA激素配方对愈伤组织平均诱导率的影响图；图2是IBA浓度对无根苗平均生根率的影响图。具体实施方式下面结合实施例对本专利技术进一步详细说明，但本专利技术不限于这些实施例。本专利技术公开一种玛卡高效脱毒组织培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：a将玛卡种子用70-75％酒精消毒30-60s，再用0.1％升汞消毒10-20min，倒掉升汞溶液，然后用无菌水清洗种子6-10次洗去残留的升汞和酒精；b将玛卡种子放置在培养基上在组培室培养5天，光照强度1000-2000lux；c待种子萌芽后，在超净工作台上转接到培养基上；继续培养20天，光照强度1500-2500lux；d在超净工作台上取玛卡2-3mm嫩茎，茎尖移入培养基上诱导愈伤组织；e在超净工作台上取玛卡愈伤组织放在分化培养基中培养，室温25±3℃，光照强度1500-2500lux组培室诱导玛卡丛芽的生成；f在超净工作台上将玛卡丛芽接种到继代培养基培养，在室温25±3℃，光照强度1500-2500lux组培室扩繁玛卡丛芽；g在超净工作台上将玛卡丛芽转移到生根培养基上，在室温25±3℃，光照强度1000-1500lux组培室诱导根系生成；h待组培苗长成后，可调节光照强度的培养室中培养幼苗，是光照强度每两天增加500±100lux的强度下培育10d后，洗净幼苗根系培养基，将幼苗移栽到玻璃温室，光照强度4000-5000lux，温度25-28℃，移栽到温室第一周湿度保持在80-90％，以后湿度保持在70-80％继续培养成商品苗。所述步骤b中的培养基由MS基本培养基+0.8％琼脂培养基组成。所述步骤c中的培养基由MS基本培养基+0.8％琼脂培养基+20-30mg/L三氮唑核苷组成。步骤d中培养基由MS基本培养基+绵白糖+0.1-0.4mg/L2,4-D+0.5-1mg/L6-BA组成。步骤e中培养基由MS基本培养基+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.4-0.6mg/LIBA+2-3mg/L6-BA组成。步骤f中培养基由MS基本培养基+3％蔗糖+0.8％琼脂+0.1-0.5mg/LIBA+0.2-0.3mg/L6-BA组成。步骤g中培养基由1/2MS基本培养基+2％蔗糖+0.6％琼脂+3-8mg/LIBA组成。实施例11.精选籽粒饱满、无虫害、病害的玛卡种子，用清水法再浮选大比重大于1玛卡种子，之后晾干备用。将玛卡种子在超净工作台上用75％酒精消毒45s，再用0.1％升汞消毒20min，倒掉升汞溶液，然后用无菌水清洗种子10次洗去残留的升汞和酒精。2.在超净工作台酒精灯火焰旁，将种子表面水分晾干，再用消毒后的镊子将玛卡种子放置在MS基本培养基+0.8％琼脂培养基上，每个组培瓶放置5颗种子，在组培室设置光照强度2000lux培养5天。3.待种子萌芽后，在超净工作台上酒精灯火焰旁，用消毒后镊子小心地转接到MS基本培养基+0.8％琼脂培养基+20mg/L三氮唑核苷上，注意使胚芽朝上。在培养室设置光照强度2000lux继续培养20天。4.在超净工作台上酒精灯火焰旁取玛卡幼苗本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种玛卡高效脱毒组织培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：a将玛卡种子用70‑75％酒精消毒30‑60s，再用0.1％升汞消毒10‑20min，倒掉升汞溶液，然后用无菌水清洗种子6‑10次洗去残留的升汞和酒精；b将玛卡种子放置在培养基上在组培室培养5天，光照强度1000‑2000lux；c待种子萌芽后，在超净工作台上转接到培养基上；继续培养20天，光照强度1500‑2500lux；d在超净工作台上取玛卡2‑3mm嫩茎，茎尖移入培养基上诱导愈伤组织；e在超净工作台上取玛卡愈伤组织放在分化培养基中培养，室温25±3℃，光照强度1500‑2500lux组培室诱导玛卡丛芽的生成；f在超净工作台上将玛卡丛芽接种到继代培养基培养，在室温25±3℃，光照强度1500‑2500lux组培室扩繁玛卡丛芽；g在超净工作台上将玛卡丛芽转移到生根培养基上，在室温25±3℃，光照强度1000‑1500lux组培室诱导根系生成；h待组培苗长成后，可调节光照强度的培养室中培养幼苗，是光照强度每两天增加500±100lux的强度下培育10d后，洗净幼苗根系培养基，将幼苗移栽到玻璃温室，光照强度4000‑5000lux，温度25‑28℃，移栽到温室第一周湿度保持在80‑90％，以后湿度保持在70‑80％继续培养成商品苗。...

【技术特征摘要】
1.一种玛卡高效脱毒组织培养的方法，其特征在于，包括如下步骤：
a将玛卡种子用70-75％酒精消毒30-60s，再用0.1％升汞消毒10-20min，倒
掉升汞溶液，然后用无菌水清洗种子6-10次洗去残留的升汞和酒精；
b将玛卡种子放置在培养基上在组培室培养5天，光照强度1000-2000lux；
c待种子萌芽后，在超净工作台上转接到培养基上；继续培养20天，光照强
度1500-2500lux；
d在超净工作台上取玛卡2-3mm嫩茎，茎尖移入培养基上诱导愈伤组织；
e在超净工作台上取玛卡愈伤组织放在分化培养基中培养，室温25±3℃，光
照强度1500-2500lux组培室诱导玛卡丛芽的生成；
f在超净工作台上将玛卡丛芽接种到继代培养基培养，在室温25±3℃，光照
强度1500-2500lux组培室扩繁玛卡丛芽；
g在超净工作台上将玛卡丛芽转移到生根培养基上，在室温25±3℃，光照强
度1000-1500lux组培室诱导根系生成；
h待组培苗长成后，可调节光照强度的培养室中培养幼苗，是光照强度每两
天增加500±100lux的强度下培育10d后，洗净幼苗根系培养基，将幼苗移栽到
玻璃温室，光照强度4000-5000lux，温度25-28℃，移栽到温室第一周湿度保持
在80-90％，以后湿度...

【专利技术属性】
技术研发人员：张龙，
申请(专利权)人：丽水学院，
类型：发明
国别省市：浙江;33