本发明专利技术涉及生物技术领域，具体的涉及用于IL28B基因多态性检测的探针、基因芯片和试剂盒。一组用于IL28B基因多态性检测的探针，包括rs12979860和rs8099917位点的探针；所述探针序列为：rs12979860-C探针：TATTTGTTGGGGTAATCAACTGTT SEQ ID NO.1；rs12979860-T探针：TATTTGCTGGGGAAACCACTTGTT SEQ ID NO.2；rs8099917-T探针：CATTTGTTGGGGTAACCAACTATT SEQ ID NO.3；rs8099917-G探针：TGTTTGCTGGCATAATCAATTATT SEQ ID NO.4。本发明专利技术通过特异性的引物和探针的选择，结合基因芯片技术，不仅提高了检测效率和准确度。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物
，具体的涉及用于IL28B基因多态性检测的探针、基因芯片和试剂盒。
技术介绍
丙型病毒性肝炎是由丙型肝炎病毒(hepatitisCvirus，HCV)引起的一种传染病。HCV感染是引起全球慢性肝病的主要原因之一，我国HCV感染率约为3.2％，每年新发丙肝病例约3.5万例。目前，丙型肝炎尚无有效疫苗预防感染。人IL28B基因位于染色体19q13.13的ACO11445.6基因群上，属于III型干扰素家族，编码IFN-λ3。IL28B基因由6个外显子和5个内显子组成，含有由22个氨基酸组成的信号肽。研究发现丙型肝炎的治疗与宿主的IL28B基因多态性高度相关。IL28B基因的两个多态性位点rs12979860和rs8099917与丙型肝炎病毒患者的病毒清除有显著的相关性，即与丙肝患者标准化治疗方案(聚乙二醇干扰素联合利巴韦林)的抗病毒治疗效果密切相关。随着IL28B基因多态性临床诊断价值的出现，市场上有各种检测试剂盒诞生。如基因测序、高分辨率溶解曲线法(high-resolutionmeltinganalysis，HRM)、杂交探针法(hybridizationprobe，HP)、TaqMan探针法、PCR等。其中，基因测序法操作繁琐，工作量大成本高；HRM法操作繁琐，需用测序法对所得结果进一步确认且必须用特殊的仪器设备；HP法成本较高；TaqMan探针法成本高，结果受Taq酶活性影响较大，只能用于少量SNP位点分析，需要特殊的仪器设备，不能发现未知SNP位点；PCR每次只能检测一种突变要多管体系相对应，存在操作不便的缺点。本专利技术采用的基因芯片进行检测，其检测通量大，在一张芯片上一次性完成两个位点多态性的检测，结果更准确，具有检测灵敏度高、特异性好，所需样本量少等优点。传统的基因芯片技术的检测，是基于荧光标记探针的荧光发光来进行检测的。其信号弱，必须经过激发，才能发光，需要昂贵的激光扫描设备。在临床检测应用过程中，由于检测单位需要投资购置激光扫描设备，一方面，显著增加了进行相关检测的投资成本，另一方面，也直接增加了应用成本，限制了该技术的市场应用与推广。本专利技术可通过生物芯片的可见光光学放大，做到了信号分辨率高，信号可以用普通数码相机拍照或肉眼直接判读。相对传统荧光标记具有良好的效果。
技术实现思路
本专利技术的目的是为了克服现有技术不足，提供一种快速准确、结果直观的IL28B基因多态性检测的基因芯片和试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术的技术方案为：一组用于IL28B基因多态性检测的探针，包括rs12979860和rs8099917位点的探针；所述探针序列为：rs12979860-C探针：TATTTGTTGGGGTAATCAACTGTT；rs12979860-T探针：TATTTGCTGGGGAAACCACTTGTT；rs8099917-T探针：CATTTGTTGGGGTAACCAACTATT；rs8099917-G探针：TGTTTGCTGGCATAATCAATTATT。进一步地，本专利技术的内容还包括用于IL28B基因多态性检测的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片包括固体相和权利要求1所述探针。进一步地，本专利技术的内容还包括用于IL28B基因多态性检测的基因芯片试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1所述探针或权利要求2所述基因芯片。进一步地，所述基因芯片试剂盒还包括以下引物对：rs12979860引物对：上游通用引物FP1:5’-CGCGATGCCCCGGGCCACG-3’；下游通用引物RP1:5’-BioGGTCACCGCCCAGCCCCTGTG-3’；rs8099917引物对：上游通用引物FP2:5’-CACCATCCTCCTCTCATCCCTC-3’；下游通用引物RP2:5’-BioGCCAGCTACCAAACTGTATAC-3’。进一步地，所述引物上含有有生物素标记。进一步地，所述基因芯片试剂盒还包括PCR反应体系、阴性对照品、阳性对照品、杂交缓冲液、洗涤液、BW反应液和TMB显色液。进一步地，所述阳性对照品为9860-T，9917-T型样本浓度106-109copies/ml，所述阴性对照品为生理盐水。进一步地，所述杂交缓冲液为柠檬酸三钠0.3M、氯化钠3M、十二烷基硫酸钠0.3M、TritonX–1000.1％水溶液。进一步地，所述洗涤液分为洗涤液A和洗涤液B，所述洗涤液A为0.01-0.1NNaOH溶液，所述洗涤液B为0.1×SSC溶液。进一步地，所述BW反应液为用20×SSC缓冲液将HRP标记的亲合素稀释到1:5000～1:10000。为了更好地理解和实施，下面详细说明本专利技术。本专利技术通过特异性的引物和探针的选择，结合基因芯片技术，不仅提高了检测效率和准确度。本专利技术通过PCR技术对病原体DNA进行扩增，扩增产物与生物芯片上的寡核苷酸探针进行杂交，通过通过生物素标记，显色液进行显色后，直观的表现检测结果。本专利技术的基因芯片试剂盒，通过生物芯片的可见光光学放大，做到了信号分辨率高，信号可以用普通数码相机拍照或肉眼直接判读。相对传统荧光标记具有良好的效果。为了更好地理解和实施，下面结合附图详细说明本专利技术。附图说明图1是本专利技术采用基因芯片对人工合成的核酸链对应包含有待检测的特异性基因序列的9860CC质粒，9860TT质粒，9917TT质粒，9917GG质粒进行扩增和检测结果。图2A、B、C、D、E分别对不同浓度9860CC质粒扩增和阴性样品杂交检测结果。图3A、B、C、D、E分别对不同浓度9860TT质粒扩增和阴性样品杂交检测结果。图4A、B、C、D、E分别对不同浓度9917TT质粒扩增和阴性样品杂交检测结果。图5A、B、C、D、E分别对不同浓度9917GG质粒扩增和阴性样品杂交检测结果。图6为9860CC、9860TT、9917TT和9917GG四种样本提取DNA后杂交检测结果。图7A、B、C、D、E、F为6组基因型为9860CC的标本提取DNA后杂交检测结果。图8A、B、C、D、E、F为6组基因型为9860TT的标本提取DNA后杂交检测结果。图9A、B、C、D、E、F为6组基因型为9917TT的标本提取DNA后杂交检测结果。图10A、B、C、D、E、F为6组基因型为9917GG的标本提取DNA后杂交检测结果。具体实施方式【实施例1】芯片和检测试剂盒的制备基因芯片：按真空气相沉淀法镀膜，使用旋转真空镀膜机在厚度约为2.5mm，直径20cm硅片(SiO2)上镀上475埃的氮化硅及135埃的TSPS的薄膜，制备出相应的生物传感器，并覆盖150埃的多聚苯丙氨酸-赖氨酸涂层，最后经过1-10uM盐酸琥珀酸酰亚胺基烟酸盐处理20分钟，清水洗净供芯片制作。将氨基修饰的探针，按照表1排列分别将探针点样到处理本文档来自技高网...
【技术保护点】
一组用于IL28B基因多态性检测的探针，包括rs12979860和rs8099917位点的探针；所述探针序列为：rs12979860‑C探针：TATTTGTTGGGGTAATCAACTGTT；rs12979860‑T探针：TATTTGCTGGGGAAACCACTTGTT；rs8099917‑T探针：CATTTGTTGGGGTAACCAACTATT；rs8099917‑G探针：TGTTTGCTGGCATAATCAATTATT。
【技术特征摘要】
1.一组用于IL28B基因多态性检测的探针，包括rs12979860和rs8099917位点的探针；所述
探针序列为：
rs12979860-C探针：TATTTGTTGGGGTAATCAACTGTT；
rs12979860-T探针：TATTTGCTGGGGAAACCACTTGTT；
rs8099917-T探针：CATTTGTTGGGGTAACCAACTATT；
rs8099917-G探针：TGTTTGCTGGCATAATCAATTATT。
2.用于IL28B基因多态性检测的基因芯片，其特征在于，所述基因芯片包括固体相和权利要
求1所述探针。
3.用于IL28B基因多态性检测的基因芯片试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1
所述探针或权利要求2所述基因芯片。
4.根据权利要求3所述的基因芯片试剂盒，其特征在于，所述基因芯片试剂盒还包括以下引
物对：
rs12979860引物对：
上游通用引物FP1:5’-CGCGATGCCCCGGGCCACG-3’；
下游通用引物RP1:5’-BioGGTCACCGCCCAGCCCCTGTG-3’；
rs8099917引物对：
上游通用引物FP2:5’-CACCA...
【专利技术属性】
技术研发人员：宋家武，王丽玲，肖杰，熊珊珊，郝永芬，康启鸣，陈妙萍，钟宇萍，
申请(专利权)人：珠海赛乐奇生物技术股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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