吲哚哌嗪-二酮，其制备及治疗作用制造技术

本发明专利技术公开了下式所示的u‑PA抑制剂(3R，6R)‑3‑(4‑丁氨基)‑6‑(吲哚‑3‑乙基)‑哌嗪‑2，5‑二酮。本发明专利技术进一步公开了它的制备方法和用途。本发明专利技术的化合物除具有优秀的抑制肿瘤细胞侵袭、迁移和抗肿瘤转移作用外，还具有抗肿瘤和抗炎作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及了u-PA抑制剂(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮，涉及它的制备方法和作为u-PA抑制剂在抑制肿瘤侵袭和迁移、抗肿瘤和抗炎方面的应用。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
纤溶酶原激活系统由纤溶酶原激活剂(PAs)、纤溶酶原激活抑制剂(PAIs)和细胞外纤溶酶原激活剂受体(PAR)组成。纤溶酶原激活系统涉及到细胞迁移、血管生成、伤口愈合、胚胎发育、肿瘤细胞扩散和转移等一系列过程。在哺乳动物体内主要有两种纤溶酶原激活剂：组织型纤溶酶原激活剂(t-PA)和尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)。尿激酶型纤溶酶原激活剂(u-PA)是从人尿或肾细胞组织培养液中提取的一种丝氨酸蛋白酶，属双链尿激酶型纤溶酶原活化剂(tcu-PA)，其分子量为55000或33000，是外源性纤维溶解系统的激活剂。u-PA可以直接裂解纤溶酶原的精氨酸(560)-缬氨酸(561)肽键，使无活性的单链纤溶酶原转变为有活性的双链纤溶酶。在肿瘤组织中，u-PA激活纤溶酶原转化为纤溶酶，纤溶酶直接或间接的造成细胞外基质降解，进一步导致肿瘤细胞的浸润、转移和血管生成，促进肿瘤的增殖。在炎症应答过程中，u-PA通过与炎症细胞表面的u-PAR结合，参与调节炎症细胞对血管和组织的渗透能力，促进炎症细胞向炎症部位迁移，促进炎症反应以及炎症因子的释放，而炎症因子的释放又会诱导u-PA表达上升。由于u-PA的酶活性贯穿在肿瘤-纤溶-炎症复杂的交叉联系中，所以影响u-PA的活性会影响复杂的交叉联系。也就是说，专利技术优秀活性的u-PA抑制剂对于抑制u-PA在肿瘤-血栓-炎症交叉联系有重要意义。这种意义体现在70％以上癌症病人死于癌转移；有大约10％的癌症晚期病人出现出血症状，例如出现几乎无法预测鼻，咽，肺或胃肠道大出血；摘除肿瘤手术发生的出血，也恶化病人的预后。针对这种状况，本专利技术提出了(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮，其制备及治疗作用。此前，专利技术人曾报道下面结构的二酮哌嗪包括CIPPC是u-PA抑制剂(结构见图1)，有优秀的止血活性。1nmol/kg剂量下，CIPPC能显著降低小鼠鼠尾出血时间[33，34]。不幸的是，在10nmol/kg剂量下CIPPC能促进血栓生成。血栓是肿瘤本人重要的并合症，是造成肿瘤本人死亡的重要因素。CIPPC能促进血栓生成的作用为肿瘤病人带来了新的威胁。对比之下，(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮的意想不到的优势是，除了与CIPPC一样有优秀的止血活性外，还有抑制肿瘤细胞浸润和转移，抑制肿瘤本人并发炎症作用，同时不会引起血栓形成。
技术实现思路
本专利技术的第一个内容是提供结构式4代表的u-PA抑制剂；本专利技术的第二个内容是提供结构式4代表的u-PA抑制剂的制备方法，该方法包括：(1)在DCC和HOBt存在下D-Trp-OBzl在无水四氢呋喃中与D-Boc-Lys(Z)缩合为D-Boc-Lys(Z)-D-Trp-OBzl；(2)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中D-Boc-Lys(Z)-D-Trp-OBzl脱去Boc生成D-Lys(Z)-D-Trp-OBzl；(3)在乙酸乙酯和5％NaHCO3存在下D-Lys(Z)-D-Trp-OBzl生成(3R，6R)-3-(4-丁氨基苄基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮；(4)在Pd/C和H2存在下，在甲醇中(3R，6R)-3-(4-丁氨基苄基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮脱去苄基生成(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮。本专利技术的第三个内容是评价结构式4代表的u-PA抑制剂在抑制肿瘤细胞侵袭、转移和抗肿瘤转移方面，以及在制作抗肿瘤和抗炎药物方面的作用。附图说明图1.合成路线1.i)DCC，HOBt，NMM，THF；ii)HCl/EA(4N)；iii)EA，TEA，80℃；iv)CH3OH，Pd/C，H2。图2.(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮体外对UK激活纤溶酶原活力的影响。其中：1为单组分的人纤溶酶原(PLG)；2为UK与PLG的共孵育组分；3为200μg(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮、UK与PLG的共孵育组分；4为100μg(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮、UK与PLG的共孵育组分；5为50μg(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮、UK与PLG的共孵育组分；6为500μg的EACA、UK与PLG的共孵育组分；7为250μg的EACA、UK与PLG的共孵育组分。具体实施方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。实施例1制备D-Boc-Lys(Z)-D-Trp-OBzl(1)将1.9g(5.0mmol)D-Boc-Lys(Z)混悬于20mL无水四氢呋喃，室温搅拌下向溶液中加入0.675g(5.0mmol)HOBt，冰浴搅拌下加入1.133g(5.5mmol)DCC，得到反应液I，冰浴下搅拌30分钟。将1.47g(5.0mmol)D-Trp-OBzl混悬于20mL无水四氢呋喃中，然后逐渐加入NMM，调节pH至8-9，得到反应液II。将反应液II加入反应液I中，先在冰浴下搅拌1h，再在室温搅拌，TLC监测至原料点消失。后处理：减压过滤除去DCU，将滤液减压浓缩除去四氢呋喃，残留物用150mL乙酸乙酯溶解，将得到的溶液置于250mL分液漏斗中，依次用5％KHSO4水溶液洗和饱和NaCl水溶液各洗3次，乙酸乙酯层用无水Na2SO4干燥30min，减压过滤，滤液减压浓缩至干，得到的黄色泡状物，经硅胶柱层析纯化(CH2Cl2∶CH3OH＝100∶1～20∶1)，得到2.919g(89％)标题化合物，为无色固体。ESI-MS(m/e)：657[M+H]+。实施例2制备D-Lys(Z)-D-Trp-OBzl(2)将纯品2.62g(4.0mmol)D-Boc-Lys(Z)-D-Trp-OBzl(1)置于50mg茄瓶中，冰浴搅拌下缓慢向反应瓶中滴加30mL4N氯化氢-乙酸乙酯溶液，加干燥管，冰浴搅拌下反应4小时后TLC监测原料点消失，终止反应。后处理：搅拌下用水泵将反应液减压抽干，加乙酸乙酯溶解后再次用水泵减压抽干，重复三次；加无水乙醚充分混悬后静置，倾倒出乙醚，抽干产物，重复三次，得2.046g(93％)标题化合物，为淡黄色粉末。ESI-MS(m/e)：557[M+H]+。实施例3制备(3R，6R)-3-(4-丁氨基苄基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮(3)将1.83g(3.29mmol)化合物D-Ly本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式所示的u‑PA抑制剂(3R，6R)‑3‑(4‑丁氨基)‑6‑(吲哚‑3‑乙基)‑哌嗪‑2，5‑二酮

【技术特征摘要】
1.下式所示的u-PA抑制剂(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮
2.制备权利要求1的u-PA抑制剂(3R，6R)-3-(4-丁氨基)-6-(吲哚-3-乙基)-哌嗪-2，5-二酮
的方法，该方法由以下步骤构成：
(1)在DCC和HOBt存在下D-Trp-OBzl在无水四氢呋喃中与D-Boc-Lys(Z)缩合为
D-Boc-Lys(Z)-D-Trp-OBzl；
(2)在氯化氢-乙酸乙酯溶液中D-Boc-Lys(Z)-D-Trp-OBzl脱去Boc生成
D-Lys(Z)-D-Trp-OBzl；
(3)在乙酸乙酯和5％NaHCO3存在下D-Lys(Z)-D-Trp-OBzl生成(3R，6R)-3-(4-丁氨基苄
基)-6-(吲哚-3...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，王玉记，吴建辉，王枫，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京;11