一种速生白榆的组培快繁方法技术

技术编号:14561125 阅读:84 留言:0更新日期:2017-02-05 17:14
本发明专利技术涉及植物组织培养技术领域,特别涉及一种速生白榆的组培快繁方法,由无菌外植体的获得,丛生芽诱导,组培苗复壮,生根培养和炼苗步骤组成。步骤中没有初代培养,得到无菌苗直接进行快繁,快繁后经壮苗再进行生根,提高了组培苗生根质量和炼苗成活率,经检索在目前公开的能找到的快繁方法的文献中,本发明专利技术的快繁出苗率是最高的,即速生白榆扩繁系数可达到4.5,生根率达到96.3%,炼苗成活率95%。利用改良培养基即在DKW培养基基础上添加不同浓度的和不同种类的激素提高繁殖效率,解决了速生白榆快繁难题,较常规步骤扩繁系数高、出苗质量好,为速生工厂化育苗或规模化生产及推广奠定了良好基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物组织培养
,特别涉及一种速生白榆的组培快繁方法
技术介绍
白榆(Ulmuspumila)为榆科榆属植物,根系发达,适应性强,耐寒耐旱,耐中度盐碱,可作滨海盐碱地造林和绿化树种,速生白榆在实际应用中优势明显,但传统的扦插无性繁殖法成活率低、扩繁周期长,致使其扩繁和推广受到影响。目前国内针对白榆的研究主要以资源保存、杂交育种、实生苗选育、非常规育种为主,将细胞和组织培养用于白榆遗传改良的较少,目前公开的白榆组织培养中,外植体以茎段诱导效果较好,叶片分化效果不佳,培养基以MS最常用,激素以6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)为主,辅以吲哚乙酸(IAA)、萘乙酸(NAA)、噻苯隆(TDZ)等,王静华等(2009)以白榆茎段和叶片为外植体进行白榆再生研究,茎段再生效果较好,最适增值培养基为MS+6-BA0.10mg/L+IBA0.005mg/L,增值系数为243%,平均茎高2.65cm。最适生根培养基为:MS+IBA0.01mg/L,生根率100%,生根系数8.94,但主根较少。现有专利中,辛全伟等(2012)公布了一种耐盐白榆的继代和生根配方;慕德宇等(2014)公布了一种耐盐速生白榆继代培养基EM及激素配比;林大为等(2014)公布了一种白榆组培苗复壮的方法,以上研究集中在基本培养基研发、继代、壮苗、生根等一个或两个环节且缺少炼苗过程,鲜有完整白榆再生体系,无法很好的指导生产。
技术实现思路
为了解决以上现有技术中白榆组织培养方法不系统、无法很好的指导生产的问题,本专利技术提供了一种完整的速生白榆的组培快繁方法。本专利技术是通过以下步骤得到的:本专利技术所述速生白榆的组培快繁方法,由无菌外植体的获得,丛生芽诱导,组培苗复壮,生根培养和炼苗步骤组成。其中:所述无菌外植体获得:5-6月份采取新生嫩枝和嫩芽为外植体,用饱和洗洁净水浸泡5~10min,后用毛笔轻刷表面,再用流水冲洗30~60min;移至超净工作台,用70~75%酒精消毒20~30s,无菌水冲洗2~3次,再用1%次氯酸钠溶液消毒8~10min,后用无菌水冲洗5~8次,每次不少于3min,最后再置于少量无菌水中,防止接种时间过长造成外植体缺水失活。接种时,用无菌滤纸吸去外植体表面多余水分,获得无菌外植体。其中:所述丛生芽诱导的方法是:将灭菌后的外植体剪成1cm左右带腋芽小段接种于快繁培养基上,在25±2℃,光照14~16h,光强3000lx条件下培养20~30天,获得丛生芽;其中所述快繁培养基的组成为:DKW+TDZ0.075~0.2mg/L+6-BA0.025~0.075mg/L+IBA0.025~0.075mg/L+NAA0~0.1mg/L+蔗糖20~30g/L+琼脂6.5g/L+AC0.5g/L,pH值为5.8~6.0;其中DKW培养基组分为:硝酸铵1416.0mg/L,硼酸4.8mg/L,无水氯化钙112.5mg/L,硝酸钙1367.0mg/L,五水硫酸铜0.25mg/L,乙二胺四乙酸二钠45.4mg/L,七水硫酸铁33.8mg/L,硫酸镁361.49mg/L,一水硫酸锰33.5mg/L,钼酸钠0.39mg/L,六水硫酸镍0.005mg/L,磷酸二氢钾265.0mg/L,硫酸钾1559.0mg/L,六水硝酸锌17.0mg/L,盐酸硫胺素5.22mg/L。其中:优选快繁培养基为:DKW+TDZ0.1-0.2mg/L+6-BA0.025-0.05mg/L+IBA0.025-0.075mg/L+NAA0-0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6.5g/L+AC0.5g/L。所述最适宜的快繁培养基为:DKW+TDZ0.2mg/L+6-BA0.05mg/L+IBA0.025mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6.5g/L+AC0.5g/L。其中:所述组培苗复壮的方法是:在无菌条件下将获得的丛生芽分成单株,切去基部愈伤组织,接种到复壮培养基上,在25±2℃,光照14~16h,光强3000lx条件下培养20~30天,得到茎秆粗壮,叶片开展,叶色浓绿的健壮组培苗;复壮培养基为:MS培养基+TDZ0.025mg/L+6-BA0.1mg/L+IBA0.05mg/L+AC0.5/L+蔗糖25g/L+琼脂6.5g/L,pH值为5.8~6.0;其中MS培养基组分为:硝酸铵1650.0mg/L,硝酸钾1900.0mg/L,二水合氯化钙440.0mg/L,七水硫酸镁370.0mg/L,磷酸二氢钾170mg/L,乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,七水硫酸铁27.8mg/L,碘化钾0.83mg/L,四水硫酸锰22.3mg/L,二水钼酸钠0.25mg/L,硼酸6.2mg/L,五水硫酸铜0.025mg/L,六水氯化钴0.025mg/L,肌醇100.0mg/L,盐酸硫胺素0.1mg/L,盐酸吡哆醇0.5mg/L,甘氨酸2.0mg/L。其中:所述生根培养的方法是:在无菌环境下将复壮后的组培苗剪去基部愈伤组织,接种到生根培养基上,在25±2℃,光照14~16h,光强3000lx条件下培养20~30天,得到生根组培苗;生根培养基组成为DKW或1/2DKW或1/2MS培养基+IBA0.01~0.05mg/L+NAA0~0.05mg/L+AC0.5g/L+蔗糖12.5g/L+琼脂6.5g/L,pH值为5.8~6.0。其中1/2DKW培养基组分为:硝酸铵708.0mg/L,硼酸4.8mg/L,无水氯化钙56.25mg/L,硝酸钙683.5mg/L,五水硫酸铜0.25mg/L,乙二胺四乙酸二钠45.4mg/L,七水硫酸铁33.8mg/L,硫酸镁361.49mg/L,一水硫酸锰33.5mg/L,钼酸钠0.39mg/L,六水硫酸镍0.005mg/L,磷酸二氢钾132.5mg/L,硫酸钾779.5mg/L,六水硝酸锌17.0mg/L,盐酸硫胺素5.22mg/L。其中1/2MS培养基组分为:硝酸铵825.0mg/L,硝酸钾950.0mg/L,二水合氯化钙220.0mg/L,七水硫酸镁185.0mg/L,磷酸二氢钾85.0mg/L,乙二胺四乙酸二钠37.3mg/L,七水硫酸铁27.8mg/L,碘化钾0.83mg/L,四水硫酸锰22.3mg/L,二水钼酸钠0.25mg/L,硼酸6.2mg/L,五水硫酸铜0.025mg/L,六水氯化钴0.025mg/L,肌醇100.0mg/L,盐酸硫胺素0.1mg/L,盐酸吡哆醇0.5mg/L,甘氨酸2.0mg/L。其中:优选DKW或1/2MS培养基+IBA0.01-0.05mg/L+NAA0-0.05mg/L+AC0.5g/L+蔗糖12.5g/L+琼脂6.5g/L,pH值为5.8~6.0。最适宜的生根培养基为:1/2MS培养基+IBA0.05mg/L+NAA0.025mg/L+AC0.5本文档来自技高网...
一种速生白榆的组培快繁方法

【技术保护点】
一种速生白榆的组培快繁方法,其特征在于包括无菌外植体的获得,丛生芽诱导,组培苗复壮,生根培养和炼苗步骤;其中所述丛生芽诱导中使用的快繁培养基组成为:DKW培养基 + TDZ 0.075~0.2 mg/L + 6‑BA 0.025~0.075 mg/L+ IBA 0.025~0.075 mg/L + NAA 0~0.1 mg/L+蔗糖20~30g/L+琼脂6.5g/L+AC 0.5g/L,pH值为5.8~6.0。

【技术特征摘要】
1.一种速生白榆的组培快繁方法,其特征在于包括无菌外植体的获得,丛生芽诱导,组培苗复壮,生根培养和炼苗步骤;
其中所述丛生芽诱导中使用的快繁培养基组成为:DKW培养基+TDZ0.075~0.2mg/L+6-BA0.025~0.075mg/L+IBA0.025~0.075mg/L+NAA0~0.1mg/L+蔗糖20~30g/L+琼脂6.5g/L+AC0.5g/L,pH值为5.8~6.0。
2.根据权利要求1所述的组培快繁方法,其特征在于无菌外植体的获得包括以下步骤:
5-6月份采取新生嫩枝和嫩芽为外植体,用饱和洗洁净水浸泡5~10min,后用毛笔轻刷表面,再用流水冲洗30~60min;移至超净工作台,用70~75%酒精消毒20~30s,无菌水冲洗2~3次,再用1%次氯酸钠溶液消毒8~10min,后用无菌水冲洗5~8次,每次不少于3min,最后再置于无菌水中,防止接种时间过长造成外植体缺水失活,接种时,用无菌滤纸吸去外植体表面多余水分,获得无菌外植体。
3.根据权利要求1所述的组培快繁方法,其特征在于所述丛生芽诱导的方法是:
将无菌外植体剪成1±0.1cm带腋芽小段接种于快繁培养基上,在25±2℃,光照14~16h,光强3000lx条件下培养20~30天,获得丛生芽,其中DKW培养基中含有硝酸铵1416.0mg/L,硼酸4.8mg/L,无水氯化钙112.5mg/L,硝酸钙1367.0mg/L,五水硫酸铜0.25mg/L,乙二胺四乙酸二钠45.4mg/L,七水硫酸铁33.8mg/L,硫酸镁361.49mg/L,一水硫酸锰33.5mg/L,钼酸钠0.39mg/L,六水硫酸镍0.005mg/L,磷酸二氢钾265.0mg/L,硫酸钾1559.0mg/L,六水硝酸锌17.0mg/L,盐酸硫胺素5.22mg/L。
4.根据权利要求1所述的组培快繁方法,其特征在于快繁培养基组成为:DKW+TDZ0.2mg/L+6-BA0.05mg/L+IBA0.025mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖25g/L+琼脂6.5g/L+AC0.5g/L。
5.根据权利要求1所述的组培快繁方法,其特征在于组培苗复壮的方法是:在无菌条件下将获得的丛生芽分成单株,切去基部愈伤组织,接种到复壮培养基...

【专利技术属性】
技术研发人员:韩义张占彪李文清解孝满韩彪鲁仪增杨海平刘鵾王倩
申请(专利权)人:山东省林木种质资源中心
类型:发明
国别省市:山东;37

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