含检测GFOD2的骨质疏松血液诊断试剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及含检测GFOD2的骨质疏松血液诊断试剂及其应用。发明专利技术人对9例骨质疏松患者外周血样本及6例健康人对照外周血样本进行高通量测序，结合生物信息学方法进行基因筛选，挑选出候选基因GFOD2，分子验证结果证实GFOD2基因在骨质疏松患者外周血中低表达。本发明专利技术提示检测外周血中致病靶点基因将辅助临床骨质疏松的诊疗，为骨质疏松诊断、治疗及预测提供了新的解决方案。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域，具体涉及含检测GFOD2的骨质疏松血液诊断试剂及其应用。
技术介绍
骨质疏松症(Osteoporosis)是由各种原因导致的骨量减少，骨组织微结构破坏，骨骼脆性增加，易于发生脆性骨折的一种全身性骨病。美国国立卫生研究院把骨质疏松症定义为“以骨强度下降而易于骨折为特征的骨骼系统疾病。其主要病理表现为松质骨骨小梁变细、断裂和数量减少，皮质骨多孔、骨质结构紊乱。依据发病的原因不同，骨质疏松可分为:原发骨质疏松和继发骨质疏松两类。原发性骨质疏松，临床上比较多见，主要分为3种：妇女绝经后骨质疏松症、老年性骨质疏松症和特发性骨质疏松症。继发性骨质疏松症主要由于以下因素引起：内分泌因素、过多使用激素类药物、营养因素、机体疾病因素以及其他因素。骨质疏松症本质上是一种骨重建障碍的疾病，导致的骨量减少(骨密度降低)、骨质结构改变和骨转换失衡构成了骨质疏松症的病理基础。研究骨质疏松病理的分子机制，探究异常表达的特异性基因与疾病之间的关系，有助于深入了解疾病的发病机制，有利于骨质疏松的早期诊断及预后。为解决目前骨质疏松分子标记稀缺的问题，专利技术人对9例骨质疏松患者外周血样本及6例健康人对照外周血样本进行高通量测序，结合生物信息学方法进行基因筛选，挑选出候选基因GFOD2。进一步，本专利技术进行了分子生物学方法证实了GFOD2与骨质疏松病的关系：GFOD2在骨质疏松患者外周血中低表达，与骨质疏松病具有很好的相关性。血清检测有创伤小、方法简便、结果可靠等优点，检测外周血中GFOD2为骨质疏松诊断、治疗及预测提供了新的解决方案。本专利技术提供的候选基因GFOD2可用于制备骨质疏松辅助诊疗制剂，有望成为骨质疏松临床治疗的潜在基因治疗靶点，具有良好的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供GFOD2基因和/其表达产物在制备骨质疏松诊断和/或治疗制剂中的应用。本专利技术的目的在于提供检测GFOD2基因和/其表达产物在制备骨质疏松诊断制剂中的应用。进一步，骨质疏松诊断制剂检测外周血中GFOD2基因和/或其表达蛋白的表达情况。为实现上述目的，本专利技术首先通过高通量测序结合生物信息学方法筛选到候选基因GFOD2，进一步通过分子生物学方法验证了GFOD2与骨质疏松的关系：GFOD2在骨质疏松患者外周血中低表达，与骨质疏松病具有很好的相关性，可用于制备治疗骨质疏松制剂和/或骨质疏松诊断制剂，具有重要的临床应用价值。本专利技术的目的在于提供GFOD2基因在制备骨质疏松诊断制剂中的应用。进一步，所述的骨质疏松的诊断制剂包括用荧光定量PCR方法、基因芯片方法检测骨质疏松外周血中GFOD2基因的表达。荧光定量PCR法是通过荧光染料或荧光标记的特异性的探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。荧光定量PCR的出现，极大地简化了定量检测的过程，而且真正实现了绝对定量。多种检测系统的出现，使实验的选择性更强。自动化操作提高了工作效率，反应快速、重复性好、灵敏度高、特异性强、结果清晰。基因芯片又称为DNA微阵列(DNAmicroarray)，可分为三种主要类型：1)固定在聚合物基片(尼龙膜，硝酸纤维膜等)表面上的核酸探针或cDNA片段，通常用同位素标记的靶基因与其杂交，通过放射显影技术进行检测。2)用点样法固定在玻璃板上的DNA探针阵列，通过与荧光标记的靶基因杂交进行检测。3)在玻璃等硬质表面上直接合成的寡核苷酸探针阵列，与荧光标记的靶基因杂交进行检测。基因芯片作为一种先进的、大规模、高通量检测技术，应用于疾病的诊断，其优点有以下几个方面：一是高度的灵敏性和准确性；二是快速简便；三是可同时检测多种疾病。所述的用于荧光定量PCR方法检测骨质疏松中GFOD2基因的产品含有一对特异性扩增GFOD2基因的引物；所述的基因芯片包括与GFOD2基因的核酸序列杂交的探针。本专利技术的目的在于提供GFOD2基因表达产物在制备骨质疏松诊断制剂中的应用。进一步，所述的骨质疏松的诊断制剂包括用免疫方法检测GFOD2蛋白的表达。优选所述免疫检测方法检测骨质疏松中GFOD2蛋白表达的为westernblot和/或ELISA和/胶体金检测方法。酶联免疫吸附实验(ELISA)即将已知的抗原或抗体吸附在固相载体表面，使酶标记的抗原抗体反应在固相表面进行的技术。该技术可用于检测大分子抗原和特异性抗体等，具有快速、灵敏、简便、载体易于标准化等优点。ELISA检测试剂盒根据检测目的和操作步骤可分为间接法、双抗夹心法、竞争法、双位点一步法、捕获法测IgM抗体、应用亲和素和生物素的ELISA。ELISA检测试剂盒中生色底物可选择辣根过氧化物酶(HRP)或者碱性磷酸酶(AP)。常用的免疫胶体金检测技术：(1)免疫胶体金光镜染色法细胞悬液涂片或外周血切片，可用胶体金标记的抗体进行染色，也可在胶体金标记的基础上，以银显影液增强标记，使被还原的银原子沉积于已标记的金颗粒表面，可明显增强胶体金标记的敏感性。(2)免疫胶体金电镜染色法可用胶体金标记的抗体或抗抗体与负染病毒样本或外周血超薄切片结合，然后进行负染。可用于病毒形态的观察和病毒检测。(3)斑点免疫金渗滤法应用微孔滤膜作载体，先将抗原或抗体点于膜上，封闭后加待检样本，洗涤后用胶体金标记的抗体检测相应的抗原或抗体。(4)胶体金免疫层析法将特异性的抗原或抗体以条带状固定在膜上，胶体金标记试剂(抗体或单克隆抗体)吸附在结合垫上，当待检样本加到试纸条一端的样本垫上后，通过毛细作用向前移动，溶解结合垫上的胶体金标记试剂后相互反应，当移动至固定的抗原或抗体的区域时，待检物与金标试剂的结合物又与之发生特异性结合而被截留，聚集在检测带上，可通过肉眼观察到显色结果。该法现已发展成为诊断试纸条，使用十分方便。进一步，所述检测GFOD2蛋白的ELISA法为使用ELISA检测试剂盒。所述试剂盒中的抗体可采用市售的GFOD2单克隆抗体，优选abcam抗体。进一步，所述的试剂盒包括：包被GFOD2单克隆抗体的固相载体，酶标二抗，酶的底物，蛋白标准品，阴性对照品，稀释液，洗涤液，酶反应终止液等。进一步，所述检测GFOD2蛋白的胶体金法为使用检测试剂盒，所述的抗体可采用市售的GFOD2单克隆抗体。进一步，所述的胶体金检测试剂盒采用胶体金免疫层析技术或胶体金渗滤法。进一步，所述的胶体金检测试剂盒硝酸纤维素本文档来自技高网...

【技术保护点】
检测GFOD2基因和/或其表达产物的试剂在制备骨质疏松诊断制剂中的应用。

【技术特征摘要】
1.检测GFOD2基因和/或其表达产物的试剂在制备骨质疏松诊断制剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，骨质疏松诊断制剂检测外周血中
GFOD2基因和/或其表达蛋白的表达情况。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述骨质疏松诊断制剂包括用荧
光定量PCR方法、基因芯片方法检测GFOD2基因的表达。
4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于，用荧光定量PCR方法检测GFOD2
基因的产品含有一对特异性扩增GFOD2基因的引物；基因芯片包括与GFOD2
基因的核酸序列杂交的探针。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述一对特异性扩增GFOD2基因
的引物，上游引物序列为SEQIDNO.1，下游引物序列为SEQIDNO.2。
6.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，骨质疏松诊断制剂采用免疫方法
检测GFOD2蛋白的表达，优选的，所述免疫方法检测GFOD2蛋白表达的为ELISA
检测试剂盒和/胶体金检测试剂盒。...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨添祎，杨承刚，
申请(专利权)人：北京泱深生物信息技术有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11