一种止痛贴剂的指纹图谱及其质量检测方法技术

本发明专利技术提供了一种止痛贴剂有效成分的测定方法及指纹图谱的建立方法，包括对照品溶液的制备、供试品溶液的制备、测定等步骤，其中高效液相色谱仪的色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相为乙腈-0.2％甲酸，按照特定程序进行梯度洗脱，流动相的流速为0.8-1.2ml/min，柱温30-40℃，检测波长：290±3nm。本发明专利技术所选择的流动相和洗脱梯度是经过实验验证的，和现有技术比较，能够同时满足止痛贴剂中指纹图谱检测和两种黄酮类有效成分的含量测定。

Fingerprint of analgesic patch and quality detection method thereof

The present invention provides a method for establishing a method for the determination of effective components of analgesic patch and fingerprint, including standard solution preparation, test solution preparation, determination and other steps, including column high performance liquid chromatography with eighteen alkyl silane bonded silica as filler, acetonitrile -0.2% formic acid, gradient elution according to specific procedures, the flow rate of mobile phase was 0.8-1.2ml/min, the column temperature is 30-40 DEG C, detection wavelength: 290 + 3nm. Compared with the prior art, the mobile phase and the elution gradient selected by the invention can be used for the detection of the fingerprint of the analgesic patch and the determination of the effective components of the two flavonoids.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及药品检测领域，尤其是涉及一种中成药的高效液相色谱检测。
技术介绍
消肿止痛贴是以地方药材沙蒿子为主要原料药的外用贴剂，经动物实验和多年临床使用验证，疗效确切，具有非常好的消炎止痛功效。临床用于疖疮初起，关节肿痛的辅助治疗。自该品种上市以来，经过不断地技术升级，在产品品质和生产工艺方面都得到了大幅度地改进。但是对于该产品的质量控制方面，缺乏系统地研究和统一的、适用于工业生产的标准。张媛媛等人曾经研究沙蒿子的指纹图谱条件(张媛媛，乔延江，HPLC法测定沙蒿子种子中两种二氢黄酮的含量，北京中医药大学学报，2008，31(1)：58～60.)。但是按照其条件检测消肿止痛贴中的沙蒿子有效成分时，发现其峰型很差，分离度不好，达不到中国药典要求，不利于企业大生产适用。李莎莎等研究了沙蒿子中有效成分的含量测定，但其采用的是等度洗脱，不能满足指纹图谱检测的要求。(李莎莎，史新元，展晓日等，沙蒿子子中总黄酮及圣草酚-7-甲醚、异樱花素的含量测定，中华中医药杂志，2009,24(9):1223～1225.)因此，需要提供一种新的检测方法，能同时满足沙蒿子种子中多种有效成分的含量测定和指纹图谱检测。
技术实现思路
为了解决上述至少一个技术问题，本专利技术提供了一种消肿止痛贴剂有效成分的测定方法。本专利技术提供的测定方法，包括如下步骤：(1)对照品溶液的制备：称取圣草酚-7-甲醚、异樱花素对照品，加乙醇制得混合对照品溶液。(2)供试品溶液的制备：取消肿止痛贴的药贴，粉碎，过筛，加入乙醇溶液，提取20-50min，放至室温，加入乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，蒸干，残渣加入乙醇溶解，摇匀即得供试品溶液。(3)测定法：吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中，高效液相色谱仪的色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈-0.2％甲酸为流动相，进行梯度洗脱，梯度程序如下表流动相的流速为0.8-1.2ml/min，柱温30-40℃，检测波长：290±3nm。本专利技术所选择的流动相和洗脱梯度是经过实验验证的，和现有技术比较，能够同时满足消肿止痛贴剂中指纹图谱检测和两种黄酮类有效成分的含量测定。根据本专利技术实施方式之一，步骤(1)中混合对照品溶液中圣草酚-7-甲醚和异樱花素的浓度分别为40μg/ml和20μg/ml。根据本专利技术实施方式之一，洗脱梯度程序可以为：0～10min,乙腈12％；10～15min,乙腈12％～16％；15～30min,乙腈16％；30～65min,乙腈16％～30％；65～80min,乙腈30％～35％；80～110min,乙腈35％。也就是采用如下表所示的洗脱梯度。根据本专利技术实施方式之一，乙醇的浓度为55～85％。根据本专利技术实施方式之一，乙醇的浓度优选为80％。根据本专利技术实施方式之一，步骤(2)中所述药贴经粉碎、过筛后加入乙醇，使得每100ml提取溶剂中所含药粉为1g～5g。根据本专利技术实施方式之一，步骤(2)中提取方法为超声提取或加热回流提取。根据本专利技术实施方式之一，步骤(2)中提取方法为超声提取25～35min。进一步地，超声功率可以为500W，频率为40kHz。根据本专利技术实施方式之一，色谱柱可以为AgilentZORBAXSB-C18柱。根据本专利技术实施方式之一，柱温优选35℃。根据本专利技术实施方式之一，流动相的流速优选1ml/min。根据本专利技术实施方式之一，检测波长为290nm。本专利技术还提供了一种消肿止痛贴剂高效液相指纹图谱的建立方法，其特征在于包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备：称取圣草酚-7-甲醚、异樱花素对照品，加入浓度为55～85％的乙醇制得混合对照品溶液。(2)供试品溶液的制备：取消肿止痛贴的药贴，粉碎，过筛，加入浓度为55～85％的乙醇溶液，使得每100ml提取溶剂中所含药粉为1g～5g，超声提取或加热回流提取20-50min，放至室温，加入浓度为55～85％的乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，蒸干，残渣加入浓度为55～85％的乙醇溶解，摇匀即得供试品溶液。(3)获得色谱图：以对照品溶液作为参照物，将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中，所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈-0.2％甲酸为流动相，进行梯度洗脱，梯度程序如下：流动相的流速为0.8-1.2ml/min，柱温30-40℃，检测波长：290±3nm。(4)生成对照指纹图谱：选择合格的多批消肿止痛贴剂的指纹图谱，以圣草酚-7-甲醚为参比峰，得到11个共有峰的图谱，按中位数法计算生成标准对照指纹图谱，其中，指纹图谱相对保留时间为：图形见附图2。根据本专利技术的实施方式之一，乙醇的浓度为80％。根据本专利技术的实施方式之一，色谱柱可以为AgilentZORBAXSB-C18柱。根据本专利技术的实施方式之一，步骤(1)中混合对照品溶液中圣草酚-7-甲醚和异樱花素的浓度分别为40μg/ml和20μg/ml。根据本专利技术的实施方式之一，检测波长为290nm。根据本专利技术的实施方式之一，步骤(2)中提取方法为超声提取25～35min。需要说明的是，本专利技术中所采用的消肿止痛贴是以地方药材沙蒿子为主要原料药的外用贴剂，例如，亚宝药业集团股份有限公司生产的批号为1504288、1505048、1505201、1505202、1505203、1505204、1505205、1505206、1505207、1505208、1505209、1505210、1505211、1505212、1505213、1505214、1505215、1505216、1505219、1505221、1505223、1505224的消肿止痛贴。本专利技术对现有技术中的HPLC指纹图谱方法进行了优化，经过对流动相和梯度洗脱条件等方法进行改进，使得图谱的主峰分离度明显改善，达到药典要求，同时对照峰的峰形也明显变好，可以满足工业化大生产的需要。本专利技术附加的方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本专利技术的实践了解到。附图说明本专利技术的上述和/或附加的方面和优点从下面结合附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中：图1根据本专利技术提供方法所得对照品指纹图谱；图2根据本专利技术实施例所得供试品色谱图；图3圣草酚-7-甲醚标准品紫外吸收图；...

【技术保护点】
一种消肿止痛贴剂有效成分的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)对照品溶液的制备称取圣草酚‑7‑甲醚、异樱花素对照品，加乙醇制得混合对照品溶液；(2)供试品溶液的制备取消肿止痛贴的药贴，粉碎，过筛，加入乙醇溶液，提取20‑50min，放至室温，加入乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，蒸干，残渣加入乙醇溶解，摇匀即得供试品溶液；(3)测定法吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，其中，所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，流动相：乙腈‑0.2％甲酸为流动相，进行梯度洗脱，梯度程序如下表流动相的流速为0.8‑1.2ml/min，柱温30‑40℃，检测波长：290±3nm。

【技术特征摘要】
1.一种消肿止痛贴剂有效成分的测定方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)对照品溶液的制备
称取圣草酚-7-甲醚、异樱花素对照品，加乙醇制得混合对照品溶液；
(2)供试品溶液的制备
取消肿止痛贴的药贴，粉碎，过筛，加入乙醇溶液，提取20-50min，放至室温，加入乙醇
补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，蒸干，残渣加入乙醇溶解，摇匀即得供试品溶液；
(3)测定法
吸取混合对照品溶液和供试品溶液，注入高效液相色谱仪，得到色谱图，
其中，所述高效液相色谱仪的色谱条件如下：
色谱柱以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，
流动相：乙腈-0.2％甲酸为流动相，进行梯度洗脱，梯度程序如下表
流动相的流速为0.8-1.2ml/min，柱温30-40℃，
检测波长：290±3nm。
2.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，其中，步骤(1)中混合对照品溶液中圣
草酚-7-甲醚和异樱花素的浓度分别为40μg/ml和20μg/ml。
3.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，乙醇的浓度为55～85％。
4.根据权利要求3所述的测定方法，其特征在于，乙醇的浓度为80％。
5.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，步骤(2)中所述药贴经粉碎、过筛后加
入乙醇，使得每100ml提取溶剂中所含药粉为1g～5g。
6.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中提取方法为超声提取
或加热回流提取。
7.根据权利要求6所述的测定方法，其特征在于，所述步骤(2)中提取方法为超声提取
25～35min。
8.根据权利要求7所述的测定方法，其特征在于，超声功率为500W，频率为40kHz。
9.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，色谱柱为AgilentZORBAXSB-C18柱。
10.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，柱温优选35℃。
11.根据权利要求1所述的测定方法，其特征在于，流动相的流速优选1ml/...

【专利技术属性】
技术研发人员：周海燕，周丽娟，杨芮平，张超，
申请(专利权)人：亚宝药业集团股份有限公司，
类型：发明
国别省市：山西;14