人抗IFN-α抗体制造技术

提供了新型的人源IFN-α结合分子，特别是人源化抗IFN-α抗体以及其IFN-α结合片段、衍生物和变体。此外，描述了用于诊断和治疗中的药物组合物、试剂盒和方法。

Human anti IFN- antibody

The present invention provides a novel human IFN- alpha binding molecule, in particular humanized anti IFN- alpha antibody and its IFN- alpha binding fragment, derivative and variant. In addition, pharmaceutical compositions, kits and methods for diagnosis and treatment are described.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术大体上涉及结合哺乳动物(优选人)源的IFN-α的新型分子，特别是识别IFN-α的不同亚型的人单克隆抗体以及其片段、衍生物和变体。特别地，提供了重组的人患者来源的抗IFN-α抗体及其制备方法。此外，描述了包括可用于治疗和诊断失调(紊乱，disorder)的这样的结合分子、抗体以及其模拟物(mimics)的组合物。此外，本专利技术涉及在免疫治疗中用作药剂以及在自身免疫和自发炎症性失调以及恶性肿瘤(诸如全身性红斑狼疮(SLE)和1型糖尿病(T1DM))的治疗干预中用作靶的自身抗体(自体抗体)。更具体地，本发明涉及单克隆自身抗体，该单克隆自身抗体已经与来源于由于涉及免疫调节的基因突变而通常受已受损的中枢和/或外周耐受或自身耐受的丧失影响的受试者的B细胞分离。
技术介绍
免疫系统的不恰当反应可以引起所涉及机体的应激症状(stressfulsymptom)。通常对动物或人的健康没有显著影响的外来物质或物理状况的的夸张的免疫应答可能引起具有下述症状的过敏，上述症状在从温和反应(诸如皮肤刺激)到致命情形(诸如过敏性休克或各种血管炎)的范围内变动。对内源性抗原的免疫应答可以引起自身免疫失调，诸如系统性红斑狼疮(SLE)、1型或胰岛素依赖型糖尿病(T1DM或IDDM)和不同形式的关节炎。免疫反应以协调方式发生，涉及多种细胞并且需要通过信号分子诸如所涉及的细胞之间的细胞因子进行通讯。可以通过例如信号拦截或各受体的阻断来影响或抑制这种通>讯。细胞因子是以纳摩尔至皮摩尔浓度的作为体液调节物的分泌的可溶性蛋白、肽和糖蛋白，由于它们在系统水平起作用，因此其表现出像典型荷尔蒙，并且它们在正常或病理状况下调节各个细胞和组织的功能活性。细胞因子与荷尔蒙的不同之处在于：它们并不是由组织在专门腺体中的专门细胞生成的，即不存在针对这些介体(mediator)的单一器官或细胞源，这是因为它们实质上由先天免疫和适应性免疫所涉及的所有细胞表达，上述细胞诸如为上皮细胞、巨噬细胞、树突细胞(DC)、自然杀伤(NK)细胞，并且特别是由其中主要是辅助性T(Th)淋巴细胞的T细胞表达。根据它们各自的功能，细胞因子可以被分为三种功能类别：调节先天免疫反应、调节适应性免疫反应以及刺激造血。由于它们在所述三种类别内的例如涉及细胞活化、增殖、分化、募集或其他生理反应(例如通过靶细胞来分泌炎症特有的蛋白)的多效活性，已经发现由异常调节的细胞因子产生介导的细胞信号传导的干扰是与缺陷免疫反应相关联的许多失调(例如炎症和肿瘤)的原因。由三种已知的蛋白家族(I型、II型和III型干扰素)组成的干扰素(IFN)构成细胞因子的最重要种类之一。所有的人I型干扰素结合至由两种跨膜蛋白(IFNAR-1和IFNAR-2)组成的细胞表面受体(IFNα受体，IFNAR)，该细胞表面受体引起JAK-STAT活化、ISGF3的形成和随后开始的基因表达(Platanias和Fish,Exp.Hematol.(1999),1583-1592)。已经在例如Stark等人,Annu.Rev.Biochem.(1998),227–64；PestkaS.,Biopolymers(2000),254–87中综述了I型IFN的组合物、受体和信号通路。I型干扰素构建了在结构上相关的家族(IFN-α(α)、IFN-β(β)、IFN-κ(κ)、IFN-δ(δ)、IFN-ε(ε)、IFN-τ(τ)、IFN-ω(ω)和IFN-ζ(ζ))，其中IFN-δ和IFN-τ不会在人类中出现。人I型干扰素(IFN)基因簇集在人染色体9p21上，而小鼠基因位于小鼠4号染色体上的保守的共线性区中。迄今为止，已在小鼠中鉴定出14种IFN-α基因和3种伪基因。在人类中，已经鉴定出13种IFN-α(或IFNA)基因(IFNA1、IFNA2、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA7、IFNA8、IFNA10、IFNA13、IFNA14、IFNA16、IFNA17和IFNA21)以及1个伪基因，其中两种人IFN-α基因(IFNA1/IFN-α1和IFNA13/IFN-α13)针对相同的蛋白编码(vanPesch等人,J.Virol.(2004),8219-8228)。IFN-γ是唯一的II型干扰素。其主要涉及通过巨噬细胞刺激诱导抗菌和抗肿瘤机制。IFN-γ受体(IFNGR)是由与两种信号转导IFNGR2链相关联的两种配体结合IFNGR1链组成的异质二聚体受体(Schroder等人,J.Leukoc.Biol.75(2004),163-189；Bach等人,Annu.Rev.Immunol.15(1997),563-591)。III型干扰素由三种亚型组成，并且还被称为IFNλ(IFNλ1或IL-29、IFNλ2或IL-28A和IFNλ3或IL-28B)，且具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节活性。IFN-λ受体也是由唯一的配体结合链IFN-λR1(也被指定为IL-28Rα)以及与用于IL-10相关细胞因子的受体共享的副链IL-10R2组成的异质二聚体复合物(Li等人,J.Leukoc.Biol.86(2009),23-32)。I型干扰素是具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节功能的多效细胞因子。根据所处环境，它们可以是抗炎的和组织保护性的或促炎的，并且促进自身免疫。IFN-β1a或1b用于治疗多种硬化症，而IFN-α2b疗法用于多种癌症(黑素瘤、血液学、恶变)。经常在患有系统性红斑狼疮(SLE)的患者的血清中检测到升高的IFN-α活性，这表明IFN-α在SLE的发展中起核心作用(和Alm,J.Exp.Med.(2001),F59-F63；CrowMK,ArthritisRheum.(2003),2396-2401；CrowMK.,CurrTopMicrobiol.Immunol.(2007),359-386；CrowMK.RheumDisClinNorthAm.(2010),173-186)。另一方面，在患有各种自身免疫失调(诸如SLE、T1DM、干燥综合征、皮肌炎、多发性硬化症(MS)、银屑病和风湿性关节炎(RA)患者的患者的白细胞中显示出干扰素依赖基因的特异性表达谱(pattern)(也称为“干扰素签名”)。此外，在IFN-α治疗期间已经重复观察到炎性关节炎、MS和T1DM的发展，这表明IFN-α至少促进了那些疾病CrowMK.,ArthritisResTher.(2010),Suppl1:S5)。另外的数据表明在肌炎、系统性硬皮病、慢性牛皮癣(Higgs等人,EurMuscRev(2012),22-28；Bissonnette等人,J本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种人抗干扰素‑α(IFN‑α)抗体或其IFN‑α结合片段。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.07.03 EP 13174995.41.一种人抗干扰素-α(IFN-α)抗体或其IFN-α结合片段。
2.根据权利要求1所述的抗体或IFN-α结合片段，所述抗体或IFN-α结合片段：
(i)结合至人IFN-α亚型IFNA2、IFNA4、IFNA5、IFNA6、IFNA10和IFNA14；
(ii)结合于至少一种人IFN-α亚型IFNA1/13(IFNA1b)、IFNA8、IFNA16和/或IFNA21；以
及
(iii)能够中和所述人IFN-α亚型中的至少一种的生物活性。
3.根据权利要求1或2所述的抗IFN-α抗体或IFN-α结合分子，其能够结合至IFN-ω和/
或中和IFN-ω的活性。
4.根据权利要求1或2所述的抗体或其IFN-α结合片段或者其合成或生物技术衍生物，
在其可变区中包括：
(a)在(i)图1(VH)(SEQIDNO：2、10、18、22、或84)和(ii)图1(VL)(SEQIDNO：4、12、20、
24、或86)中描述的VH和/或VL可变区氨基酸序列的至少一个互补决定区(CDR)；
(b)在图1中所描述的VH和/或VL区的氨基酸序列；
(c)由从(a)的所述氨基酸序列中的任一种的部分改变所得到的氨基酸序列组成的至
少一个CDR；和/或
(d)包括从(b)的所述氨基酸序列的部分改变所得到的氨基酸序列的重链和/或轻可变
区。
5.根据权利要求4所述的抗体或IFN-α结合片段、合成或生物技术衍生物，其能够结合
由氨基酸序列SAAWDETLLDKFYTELYQ(SEQIDNO：99)和/或RITLYLKEKKYSPCAWEV(SEQID
NO：100)组成的IFNA2的表位。
6.根据权利要求3所述的抗体或IFN-α结合片段或者其合成或生物技术衍生物，在其可
变区中包括：
(a)在(i)图1(VH)(SEQIDNO：SEQIDNO：30、38、76或92)和(ii)图1(VL)(SEQIDNO：
SEQIDNO：32、40、78或94)中描述的VH和/或VL可变区氨基酸序列的至少一个互补决定区
(CDR)；
(b)如图1中所描述的所述VH和/或VL区的氨基酸序列；
(c)由从(a)的所述氨基酸序列中的任一种的部分改变所得到的氨基酸序列组成的至
少一个CDR；和/或
(d)包括从(b)的所述氨基酸序列的部分改变所得到的氨基酸序列的重链和/或轻可变
区。
7.根据权利要求6所述的抗体或IFN-α结合片段、合成或生物技术衍生物，其识别由氨
基酸序列YTELYQQLNDLEACVIQG(SEQIDNO：101)组成的IFNA2的表位和/或由氨基酸序列
TGLHQQLQHLETCLLQVV(SEQIDNO：102)组成的IFNAW的表位。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的抗体或IFN-α结合片段，其为IgG1。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的抗体或IFN-α结合片段，包括CH和/或CL恒定区，所
述CH和/或CL恒定区包括选自表1中所列的CH和CL氨基酸序列(SEQIDNO：6、8、14、16、26、
28、34、36、42、44、72、74、80、82、88、90、96和98)的氨基酸序列或具有至少60％同一性的氨
基酸序列。
10.一种抗体或IFN结合分子，其与根据权利要求1至9中任一项所述的抗体竞争，用于
特异性结合于至少一种人IFN-α亚型和/或人IFN-ω。
11.根据前述权利要求中任一项所述的抗体或IFN结合分子，其针对至少五种人IFN-α
亚型和/或人IFN-ω具有≤10ng的IC50值。
12.根据权...

【专利技术属性】
技术研发人员：萨达·F·Y·哈克，艾德里安·海迪，凯·金萨德，凯·克朗，安娜莉莎·玛卡吉诺，史蒂芬·迈耶，帕特·彼得森，麦克·罗斯，菲利普·弗拉伊库，马丁·沃克沃德，
申请(专利权)人：因美诺克股份公司，
类型：发明
国别省市：德国;DE