一种粪便标本李斯特菌培养用培养基制造技术

本发明专利技术公开了一种粪便标本李斯特菌培养用培养基。属于检验微生物培养领域，其特征在于，配制1000ml培养基的配方中含有：酵母浸出粉、牛肉粉、酪蛋白胨、琼脂、葡萄糖、氯化钠、酵母锌、磷酸二氢钠、γ-羟基精氨酸、N-乙酰-D-葡萄糖胺、杆菌肽、无菌马血蛋白，蒸馏水加至1000ml。本发明专利技术与现有技术相比较，具有检出可靠，李斯特菌分离率高的特点。

Culture medium for fecal specimen Lester culture

The invention discloses a culture medium for fecal specimen Lester culture. To test microbial culture field, which is characterized in that the preparation containing 1000ml medium formula: yeast extract, peptone, beef powder, casein agar, glucose, sodium chloride, yeast zinc, sodium dihydrogen phosphate, gamma hydroxy arginine, N- acetyl -D- glucosamine, bacitracin, sterile horse blood protein, distillation add water to 1000ml. Compared with the prior art, the invention has the advantages of reliable detection and high separation rate of List Rand.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及检验微生物培养领域，具体涉及一种用于粪便标本李斯特菌培养的培养基。
技术介绍
微生物培养是一种用人工方法使微生物生长繁殖的技术，而选择性培养基是用来促进或抑制一定类型的生物体（如细胞或细菌等）而设计的培养基，利用这种培养基可以将所需要的微生物从混杂的微生物中分离出来。李斯特菌（Listeriamonocytogenes）为革兰阳性杆菌，是一种兼性厌氧细菌，广泛分布在自然环境中，如土壤、污水、饲料、动物、健康人及各种生食和即食食品中，可引起人类李斯特菌病，李斯特菌是一种细胞内寄生菌，多数感染李斯特菌病的健康人没有症状或有自限性的流感样症状和胃肠道症状，如头痛、发热、寒战、肌肉疼痛、腹痛、腹泻、恶心、呕吐等。部分患者会发展为神经系统感染（如脑膜炎、脑膜脑炎、脑干脑炎等）、败血症及局灶感染（如心内膜炎、关节炎、肝炎、皮炎等）和菌血症等。神经系统的感染可能造成后遗症。孕妇感染后多无症状或症状轻微，但可导致流产、死胎、早产及严重的新生儿感染。近年来李斯特菌感染患者呈上升趋势，在新生儿、妊娠妇女、40岁以上及免疫功能受损的人群中均可发生，尤其是妊娠妇女感染李斯特菌的风险是普通人群的30～100倍。早期诊断并早期治疗，可100%治愈。若诊断延误，病死率可达20～30%，因此作为确诊唯一依据的临床细菌检查的正确与快速鉴定极为重要。目前，该菌属的鉴定金标准为荧光定量PCR鉴定，但是PCR检测设备要求和操作成本均较高，因此临床检验手段主要是革兰染色法，但有1/3的李斯特菌无法阳性检出，而且如果要辨别李斯特菌的种类就需要细菌培养，并就其菌落形态特征进行鉴别。目前培养多用胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）。但是李斯特菌培养阳性率低，仅为36%左右，主要是临床培养过程中该菌容易被认为是污染的杂菌而遭丢弃，且标本中的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎球菌等在目前的培养基上比李斯特菌生长更快，很快覆盖了培养基，李斯特菌无法生长，结果延误诊疗时间。
技术实现思路
本专利技术的技术任务是针对以上现有技术的不足，提供一种适合于粪便标本李斯特菌培养的培养基。本专利技术解决其技术问题的技术方案是：一种粪便标本李斯特菌培养用培养基，其特征为，配制1000ml培养基的配方中含有：酵母浸出粉5～8g；牛肉粉6～10g；酪蛋白胨6～10g；琼脂15～20g；葡萄糖3～5g；氯化钠5～5.5g；酵母锌0.01～0.05g；磷酸二氢钠1～3g；γ-羟基精氨酸0.1～0.5g；N-乙酰-D-葡萄糖胺0.01～0.05g；杆菌肽0.001～0.003g；无菌马血蛋白20～50g；蒸馏水加至1000ml。其中：所述的牛肉粉、酪蛋白胨、葡萄糖提供碳源、氮源，酵母浸出粉富含蛋白质、氨基酸、多肽、核苷酸、维生素、生长因子、微量元素等营养成分，为李斯特菌的繁殖和生长提供均衡的营养元素；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂为培养基的凝固剂；酵母锌为营养剂，专利技术人发现，在培养基中加入一定浓度的锌离子，目标菌的生长状态好于对照组，因此推论锌离子有助于该菌的生长，同时母体酵母含微生物必需氨基酸含量丰富、配比合理，具有促进细菌繁殖的功效；磷酸二氢钠为缓冲剂；N-乙酰基-D-葡萄糖胺是营养强化剂，基础实验证实，将同一李斯特菌菌株接种到2个TSA-YE培养基上，其中一个TSA-YE配方中加入N-乙酰-D-葡萄糖胺0.05g/L，37℃下大气条件下培养，48小时后观察菌株，发现添加N-乙酰-D-葡萄糖胺的TSA-YE培养基有小的李斯特菌菌落，没有添加N-乙酰-D-葡萄糖胺的TSA-YE培养基未发现李斯特菌菌落，N-乙酰-D-葡萄糖胺促进细胞生长、分化，是李斯特菌的生长因子；杆菌肽（Bacitracin），实验室研究表明杆菌肽可以抑制革兰阳性细菌和阴性球菌、肺炎双球菌、葡萄球菌、淋球菌、脑膜炎双球菌等杂菌的生长，但该浓度下由于对李斯特菌属无抗菌抑菌作用，因此提高了李斯特菌的分离率。γ-羟基精氨酸为激活剂，可以促进李斯特菌对矿物质的摄取；无菌马血蛋白提供能量环境。此外，光谷甘肽可以降低培养基氧化还原电势，促进细胞生长、分化，是李斯特菌的生长促进剂。苍术酮抑制大肠杆菌、肠炎沙门菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、铜绿假单胞等细菌生长，但该浓度下对李斯特菌菌落的生长没有影响；山萸肉为山茱萸科植物山茱萸的果实，现代医学研究表明，山萸肉含山茱萸鞣毛，山茱萸裂甙，铁、铝、铜、锌、硼、磷等21种元素，苏氨酸、缬氨酸、亮氨酸等14种氨基酸，维生素A，葡萄糖、果糖、蔗糖、熊果酸、没食子酸、苹果酸、酒石酸等糖类和有机酸类，山萸肉水提液是良好的营养强化剂，并且对金黄色葡萄球菌、奈氏卡他球菌、结核杆菌、肺炎双球菌、流感嗜血杆菌、脊髓灰质炎病毒等均有不同程度的抑菌作用。本专利技术与现有技术相比较，具有检出可靠、李斯特菌分离率高的特点。具体实施方式以下结合实际情况，对本专利技术的具体实施方式作详细说明。实施例1，配制1000ml培养基的配方中含有：酵母浸出粉5g；牛肉粉10g；酪蛋白胨6g；琼脂15g；葡萄糖4g；氯化钠5g；磷酸二氢钠1g；γ-羟基精氨酸0.3g；酵母锌0.01g；N-乙酰-D-葡萄糖胺0.01g；杆菌肽0.003g；无菌马血蛋白20g，蒸馏水加至1000ml。制备方法：称取酵母浸出粉；牛肉粉；酪蛋白胨；琼脂；葡萄糖；氯化钠；磷酸二氢钠；γ-羟基精氨酸；酵母锌，混匀蒸馏水溶解，210℃，灭菌15min，冷却到45℃，加入灭菌N-乙酰-D-葡萄糖胺；灭菌杆菌肽；无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。实施例2，配制1000ml培养基的配方中含有：酵母浸出粉5g；牛肉粉6g；酪蛋白胨8g；琼脂15g；葡萄糖3g；氯化钠5g；磷酸二氢钠3g；γ-羟基精氨酸0.1g；酵母锌0.05g；N-乙酰-D-葡萄糖胺0.03g；杆菌肽0.001g；光谷甘肽0.1g；无菌马血蛋白40g，蒸馏水加至1000ml。制备方法：称取酵母浸出粉；牛肉粉；酪蛋白胨；琼脂；葡萄糖；氯化钠；磷酸二氢钠；γ-羟基精氨酸；酵母锌，混匀蒸馏水溶解，210℃，灭菌15min，冷却到45℃，加入灭菌光谷甘肽；灭菌N-乙酰-D-葡萄糖胺；灭菌杆菌肽；无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。实施例3，配制1000ml培养基的配方中含有：酵母浸出粉5g；牛肉粉8g；酪蛋白胨6g；琼脂18g；葡萄糖5g；氯化钠5.5g；磷酸二氢钠2g；γ-羟基精氨酸0.5g；酵母锌0.03g；N-乙酰-D-葡萄糖胺0.05g；杆菌肽0.001g；苍术酮0.003g；无菌马血蛋白50g，蒸馏水加至1000ml。制备方法：称取酵母浸出粉；牛肉粉；酪蛋白胨；琼脂；葡萄糖；氯化钠；磷酸二氢钠；γ-羟基精氨酸；酵母锌；苍术酮，混匀蒸馏水溶解，210℃，灭菌15min，冷却到45℃，加入灭菌N-乙酰-D-葡萄糖胺；灭菌杆菌肽；无菌马血蛋白混匀，灭菌蒸馏水定容到1000ml后分装。实施例4，配制1000ml培养基的配方中含有：酵母浸本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种粪便标本李斯特菌培养用培养基，其特征在于配制1000ml培养基的配方中含有：酵母浸出粉5～8g；牛肉粉6～10g；酪蛋白胨6～10g； 琼脂15～20g；葡萄糖3～5g；氯化钠 5～5.5g；酵母锌0.01～0.05g；磷酸二氢钠1～3g；γ‑羟基精氨酸0.1～0.5g；N‑乙酰‑D‑葡萄糖胺0.01～0.05g；杆菌肽0.001～0.003g；无菌马血蛋白20～50g；蒸馏水加至1000ml。

【技术特征摘要】
1.一种粪便标本李斯特菌培养用培养基，其特征在于配制1000ml培养基的配方中含有：
酵母浸出粉5～8g；
牛肉粉6～10g；
酪蛋白胨6～10g；
琼脂15～20g；
葡萄糖3～5g；
氯化钠5～5.5g；
酵母锌0...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘名霞，
申请(专利权)人：刘名霞，
类型：发明
国别省市：山东;37