合成用于绿脓杆菌疫苗的低聚糖制造技术

本发明专利技术提供了合成的绿脓杆菌脂多糖(LOS)-基低聚糖以及含有多种绿脓杆菌血清型特异性的低聚糖抗原或多种核心绿脓杆菌低聚糖结构或者基序的共轭物。本发明专利技术进一步提供了绿脓杆菌LOS-基免疫原和免疫保护组合物和由此得到的抗体，用于诊断、治疗和预防由绿脓杆菌引起的感染。

Synthesis of oligosaccharide for Pseudomonas aeruginosa vaccine

The present invention provides Pseudomonas aeruginosa lipopolysaccharide (LOS) - synthesis of conjugate base oligosaccharides and contains a variety of Pseudomonas aeruginosa serotype specific antigen or multiple core oligosaccharides of Pseudomonas aeruginosa oligosaccharide structure or motif. The present invention further provides Pseudomonas aeruginosa LOS- based immunogens and immune protective compositions and antibodies obtained thereby for the diagnosis, treatment and prevention of infections caused by Pseudomonas aeruginosa.

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】相关申请的交叉引用本申请要求享有2013年7月3日提交的美国临时专利申请号为61/842,474的权益,该专利的全部内容通过引用结合在本申请中。
本专利技术涉及免疫原性和免疫保护的组合物以及用于制备和使用同源合成的绿脓杆菌脂多糖(P.aeruginosalipooligosaccharide)(LOS)-基的低聚糖，共轭物及其衍生的抗体的方法。
技术实现思路
本专利技术提供了合成的低聚糖1a或者1b：其中每个R1和R2各自独立地为H、一种单醣或者一种寡糖，X是H、一种连接基团、或者一种保护基团；L是一种连接基团并且Y是一种载体。在某些实施方案中，R1和R2每个独立地为H、α-Rha-、α-Glc(1-2)-α-Rha-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-、β-FucNAc(1-3)-α-Rha-、α-Rha[2,3,4-OAc]-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2,4-OAc]-、或者β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-。在某些实施方案中，R1和R2选自在下表中所述的组合：R1R2α-Rha-Hα-Glc(1-2)-α-Rha-HHα-Rha-Hβ-QuiNAc(1-3)-α-Rha-Hβ-FucNAc(1-3)-α-Rha-Hα-Rha[2,3,4-OAc]-Hβ-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2,4-OAc]-Hβ-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-本专利技术还包括组合物，其含有一种抗原1a和/或1b以及一种药物学可接受的载体。优选地组合物含有一种单一抗原或者一种公知的、定义的抗原混合物。本专利技术进一步提供了疫苗组合物，包括免疫原性和免疫保护的组合物，包括抗原1a和/或1b以及一种药学上可接受的载体。这些疫苗组合物可任选地包括一种药学上可接受的佐剂。优选地，所述疫苗组合物是无内毒素的。所述的疫苗组合物可以是一、二、三、或者四价。本专利技术进一步提供了一种用于人工合成低聚糖1a和抗原1b。本专利技术进一步提供了用于诊断、治疗和预防由P.aeruginosa引起的感染。具体实施方案定义为了提供一种对说明书和权利要求书的清楚和一致的理解，提供了一下术语的定义。单位、前缀和符号可以它们的SI形式表示。在这里所限定的数字范围包括限定范围的边界数，并且包括所限定范围内的所有数。除非另有说明，术语“一个(a)”或者“一个(an)”可以解释为“至少其中一个”的意义加以理解。在此所使用的段落标题仅用于组织的目的，而不理解为多所述的主题的限定。在本申请中所引用的所有的文献，或者文献的部分，包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍以及论文，其所有或部分作为参考均完整的通过引用结合到本文中。正如在这里所使用的，“低聚糖”涉及一种化合物，其含有两个或多个单糖单元。低聚糖被认为是具有还原端以及非还原端，无论是否在还原端上的所述单糖单元实际上是一种还原糖。根据本领域所接受的术语，低聚糖在这里所指出的是具有在左侧的非还原端以及在右侧的还原端。在这里所描述的低聚糖是用针对非还原单糖(例如，Gal)的命名或者缩写进行描述的，加上糖苷键(α或者β)、换件、在减重所涉及的还原单糖的换位置的结构的前缀，并且之后是所述还原单糖(例如，GlcNAc)的名称或者缩写。在两种糖之间的连接键可以表示为，例如，2,3、2→3、或者2-3。每种单糖是吡喃糖或者呋喃糖。正如在这里所使用的，“单糖”或者“单糖单元”涉及在低聚糖中的单个的糖残基，包括其衍生物。在上下文的低聚糖中，各单体单元是单糖，其是(或者可以是)通过羟基基团连接到另一个单糖上。正如在这里所使用的，“无内毒素”指的是一种不含有通常存在于分离的细菌糖类或者多糖类中的内毒素或者内毒素成分的低聚糖。正如在这里所使用的，“合成物”指的是一种材料，其基本上或者大体上不含有一些成分，例如内毒素、糖脂类、不相关的低聚糖等等，当其被分离时其通常伴随有一种化合物。典型的，合成的化合物有至少大约90％的纯度，通常为至少大约95％，并且优选为至少大约99％的纯度。纯度可以用本领域所熟知的多种方式进行测定。优选地，纯度是通过HPLC进行测定。合成的材料的标识是通过质朴分析和/或NMR波谱法进行确定。正如在这里所使用的，术语“连接物”指的是键或者基团，根据本专利技术所述，其表现出在末端进入到与载体的反应功能基团共价连接的种类，例如，氨基、硫醇或者羧基基团，并且在另一个末端同样地一种能够进入到与低聚糖的羟基或者氨基基团共价连接的种类。在这里的连接分子的两个功能基团之间是合适长度的生物相容性桥接分子，例如取代或者未被取代的杂烷基、芳烷基、烯烃基、亚烯基或者(寡)亚烷基二醇基团。连接物优选包括一种取代的或者未被取代的(C1-C10)亚烷基基团或者一种取代的或者未被取代的(C2-C10)亚烯基基团。正如在这里所使用的，术语“载体”指的是蛋白质、肽、脂质、聚合物、树枝状聚合物、病毒颗粒、病毒类似物颗粒(VLP)，或者它们的组合，其被连接到低聚糖上从而将所得到的低聚糖-载体共轭物的免疫原性增强至比单独的低聚糖更高的水平。正如在这里所使用的，“蛋白质载体”指的是一种蛋白质、肽或其片段，其被连接或者共轭到低聚糖上从而将所得到的低聚糖-蛋白质载体共轭物的免疫原性增强至比单独的低聚糖更高的水平。例如，当使用一种载体时，蛋白质载体可起到T-依赖抗原的作用，所述T-依赖抗原能够激活并且召集T细胞从而由此增强T细胞依赖性的抗体产生。正如在这里所使用的，“共轭”指的是一种化学交联，不论是共价的还是非共价的，其最接近地将低聚糖与一种载体相关联从而所述低聚糖共轭物具有相对于非共轭的低聚糖而言增强的免疫原性。正如在这里所使用的，“共轭物”值得是通过键和/或交联剂与一种载体化学结合的低聚糖。正如在这里所使用的，“被动免疫”指的是将抗体给药于受试者，其中所述抗体是在不同的受试者中产生的(包括相同或者不同种类的受试者)，从而所述抗体附着在细菌表面上，并造成细胞被吞噬。正如在这里所使用的，“保护性免疫”指的是给药于动物的疫苗或者免疫接种程序表，诱导一种免疫应答，从而预防、阻碍疾病的严重程度的发展，或者本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种合成的低聚糖1a或1b其中R1和R2各自独立地是H、单糖或者低聚糖，X是H、连接基团或者保护基团；L是连接体并且Y是载体。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2013.07.03 US 61/842,4741.一种合成的低聚糖1a或1b
其中R1和R2各自独立地是H、单糖或者低聚糖，X是
H、连接基团或者保护基团；L是连接体并且Y是载体。
2.根据权利要求1所述的低聚糖，其中R1和R2各自独立地选
自由H、α-Rha-、α-Glc(1-2)-α-Rha-、β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-、
β-FucNAc(1-3)-α-Rha-、α-Rha[2,3,4-OAc]-、β-QuiNAc(1-3)-
α-Rha[2,4-OAc]-、以及β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2,4,-OAc]-独
立地所组成的组中。
3.根据权利要求1所述的低聚糖，其中R1和R2选自有下表所
列的组合中的其中之一：
R1R2α-Rha-
H
α-Glc(1-2)-α-Rha-
H
H
α-Rha-
H
β-QuiNAc(1-3)-α-Rha-
H
β-FucNAc(1-3)-α-Rha-
H
α-Rha[2，3，4-OAc]-
H
β-QuiNAc(1-3)-α-Rha[2，4-OAc]-
H
β-FucNAc(1-3)-α-Rha[2，4，-OAc]-
4.根据权利要求1到3任意其中一项所述的低聚糖，其中L是
亚烷基硫醇连接体。
5.根据权利要求1到3任意其中一项所述的合成低聚糖，其中
Y是一种载体，其选自由蛋白质、肽、脂质、聚合物、树枝
状聚合物、病毒颗粒、以及病毒类似物颗粒或者它们的组合
所组成的组中。
6.根据权利要求5所述的合成低聚糖，其中所述载体时一种载
体蛋白质。
7.根据权利要求6所述的合成低聚糖，其中所述的载体蛋白质
选自由细菌类毒素、毒素、外毒素、及其非毒性的衍生物所
组成的组中。
8.根据权利要求7所述的合成低聚糖，其中所述载体蛋白质选
自由破伤风类毒素、破伤风毒素片段C、白喉类病毒、CRM、
霍乱类毒素、金黄色葡萄球菌外毒素或类毒素、大肠杆菌热
肠毒素、绿脓杆菌外毒素A，其基因方面解毒变体；细菌外
膜蛋白、血清型乙外膜蛋白复合物(OMPC)、外膜3类孔蛋
白(rPorB)、孔蛋白；匙孔血蓝蛋白(KLH)、乙型肝炎病毒
核心蛋白、甲状腺球蛋白、和卵清蛋白；肺炎球菌表面蛋白
A(PspA)、肺炎球菌粘附蛋白(PsaA)；结核菌素纯蛋白衍
生物(PPD)；运铁蛋白结合蛋白、TLR-5的肽激动剂；及上
述所述的载体的衍生物和/或组合。
9.根据权利要求8所述的合成低聚糖，其中所述载体蛋白质选
自由CRM197、脑膜炎奈瑟氏菌、牛血清白蛋白(BSA)、
人血清白蛋白(HSA)、聚(赖氨酸:谷氨酸)、f能动菌的鞭

\t毛蛋白以及上述所述的载体的衍生物和/或组合所组成的组
中。
10.根据权利要求8所述的合成低聚糖，其中所述载体蛋白质选
自由破伤风类毒素、CRM197以及OMPC所组成的组中。
11.一种药物组合物，包括权利要求1到10任意其中一项所述
的至少以一种低聚糖，其以有效剂量用于刺激免疫应答，可
选择...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·S·坎贝尔，O·J·普兰特，
申请(专利权)人：辛格利科医药品有限公司，
类型：发明
国别省市：美国;US