Semi quantitative Lily strawberry latent ringspot virus detection gold card and a preparation method thereof, in order to improve the detection method of colloidal gold immunochromatographic efficiency and field penetration, rapid and semi quantitative detection of lily virus detection line, will be increased to three, then the antibody known amount of concentration difference were coated on the test line, developed fast semi quantitative detection of SLRSV gold card, to meet the large-scale detoxification and Lily field demand for lily virus rapid semi quantitative detection; the gold standard card detection has strong pertinence, simple operation, high accuracy, strong sensitivity, without using any instruments and equipment, difference it can accurately detect the content of SLRSV between samples.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种对百合病毒快速半定量检测的金标卡及制备方法,具体指运用胶体金免疫层析法研制出能快速半定量检测百合草莓潜隐环斑病毒(SLRSV)的金标卡及其制备方法。
技术介绍
百合(Liliumspp.)是百合科(Liliaceae)百合属(Lilium)多年生宿根单子叶草本植物,是世界著名的球根花卉,栽培历史悠久,集观赏、食用和药用于一体;荷兰作为世界上最大的花卉种植大国,其百合的切花及种球产业发展较为成熟;在中国,食用和药用百合产业发展较好,主要产区在甘肃、湖南和湖北,主要品种为兰州百合、龙牙百合(野百合)等;对于切花百合,近年来,随着我国观赏百合种植面积的迅速增加,从国外引进种球的数量和批次数目不断增长,影响百合生产的病毒病在各百合种植区普遍流行。目前文献报道侵染百合的病毒有20多种,除百合斑驳病毒(Lilymottlevirus,LMoV),黄瓜花叶病毒(Cucumbermosaicvirus,CMV)和百合隐症病毒(Lilysymptomlessvirus,LSV)外,草莓潜隐环斑病毒(Strawberrylatentringspotvirus,SLRSV)也被证实可侵染百合。于翠等(2008)对来自荷兰的进口百合种球样品进行了病毒的DAS-ELISA检测,发现30个样品中,有6个样品检测到SLRSV的侵染,侵染率达20.0%。SLRSV隶属于伴生豇豆病毒科(Secoviridae)温州蜜柑矮缩病毒属(Sadwavi ...
【技术保护点】
一种百合草莓潜隐环斑病毒半定量检测金标卡,其特征在于包括金标卡槽(1)、衬板(12)、样品垫(8)、胶体金结合垫(9)、硝酸纤维素膜(10)和吸水滤纸(11),其中金标卡槽(1)包括上壳体和下壳体,上壳体和下壳体通过卡扣连接,上壳体设有加样孔(2)和反应窗(3),样品垫(8)置于加样孔(2)下方,硝酸纤维素膜(10)置于反应窗(3)下方,胶体金结合垫(9)上含有金标探针,衬板(12)固定于金标卡槽(1)中,样品垫(8)、胶体金结合垫(9)、硝酸纤维素膜(10)和吸水滤纸(11)依次排列连接于衬板(12)上表面,硝酸纤维素膜(10)上设有第一检测线(4)、第二检测线(5)、第三检测线(6)和对照线(7),第一检测线(4)、第二检测线(5)、第三检测线(6)上分别包被的是不同浓度的兔抗LVX IgG,对照线(7)上包被的是羊抗兔IgG,第一检测线(4)、第二检测线(5)、第三检测线(6)上LVX IgG包被量分别为2.0~2.5 pg、1.0~1.25 μg 和2.0~2.5 μg蛋白,金标探针抗体标记量为22μg/mL,羊抗兔IgG包被量为2.0~2.5μg蛋白;用所述金标卡检测时,在所 ...
【技术特征摘要】
1.一种百合草莓潜隐环斑病毒半定量检测金标卡,其特征在于包括金标卡槽(1)、衬板
(12)、样品垫(8)、胶体金结合垫(9)、硝酸纤维素膜(10)和吸水滤纸(11),其中金标卡槽(1)
包括上壳体和下壳体,上壳体和下壳体通过卡扣连接,上壳体设有加样孔(2)和反应窗(3),
样品垫(8)置于加样孔(2)下方,硝酸纤维素膜(10)置于反应窗(3)下方,胶体金结合垫(9)
上含有金标探针,衬板(12)固定于金标卡槽(1)中,样品垫(8)、胶体金结合垫(9)、硝酸纤维
素膜(10)和吸水滤纸(11)依次排列连接于衬板(12)上表面,硝酸纤维素膜(10)上设有第一
检测线(4)、第二检测线(5)、第三检测线(6)和对照线(7),第一检测线(4)、第二检测线(5)、
第三检测线(6)上分别包被的是不同浓度的兔抗LVXIgG,对照线(7)上包被的是羊抗兔
IgG,第一检测线(4)、第二检测线(5)、第三检测线(6)上LVXIgG包被量分别为2.0~2.5
pg、1.0~1.25μg和2.0~2.5μg蛋白,金标探针抗体标记量为22μg/mL,羊抗兔IgG包被量
为2.0~2.5μg蛋白;
用所述金标卡检测时,在所述加样孔(2)处加入百合样品的待检溶液,对比反应窗(3)
内第一检测线(4)、第二检测线(5)、第三检测线(6)和对照线(7)的颜色,即可判定被检测百
合是否感染了百合草莓潜隐环斑病毒;
将待检溶液加入到金标卡的加样孔内,若待检溶液中含有SLRSV,检测样品经过所述胶
体金结合垫时,SLRSV与金标垫上的金标多克隆抗体形成复合物,然后继续向所述第一检测
线(4)、第二检测线(5)、第三检测线(6)方向渗移,当接触到所述第一检测线(4)时发生抗原
抗体结合反应而被全部截留下来,形成可见的淡红色条带;金标垫上剩余的金标多克隆抗
体继续向所述第二检测线(5)、第三检测线(6)方向渗移,当接触到所述第二检测线(5)和第
三检测线(6)时不发生反应,金标多克隆抗体继续向所述对照线(7)方向渗移,当接触到所
述对照线(7)时与羊抗兔IgG结合而被截留下来,形成可见的棕红色条带;当第二检测线
(5)、第三检测线(6)没有颜色变化,而第一检测线(4)出现淡红色、对照线(7)出现棕红色条
带时,则判定被检样品感染了百合草莓潜隐环斑病毒,病毒含量低,田间防治以杀灭蚜虫为
主;
若待检溶液中含有SLRSV,检测样品经过所述胶体金结合垫时,SLRSV与金标垫上的金
标多克隆抗体形成复合物,然后继续向所述第一检测线(4)、第二检测线(5)、第三检测线
(6)方向渗移,当接触到所述第一检测线(4)时发生抗原抗体结合反应而被部分截留下来,
形成淡红色条带;剩余的复合物继续往所述第二检测线(5)、第三检测线(6)方向渗移,当接
触到所述第二检测线(5)时发生抗原抗体结合反应被全部截留下来,形成淡红色条带;剩余
的金标多克隆抗体继续向所述第三检测线(6)和对照线(7)方向渗移,当接触到所述第三检
测线(6)时不发生反应,金标多克隆抗体继续向所述对照线(7)方向渗移,当接触到所述对
照线(7)时与羊抗兔IgG结合而被截留下来,形成可见的棕红色条带;当第三检测线(6)没有
颜色变化,而第一检测线(4)和第二检测线(5)出现淡红色、对照线(7)出现棕红色条带时,
则判定被检样品感染了百合草莓潜隐环斑病毒,田间防治采取杀灭蚜虫并喷施抗病毒药
剂;
若待检溶液中含有SLRSV,检测样品经过所述胶体金结合垫时,SLRSV与金标垫上的金
标多克隆抗体形成复合物,然后继续向所述第一检测线(4)、第二检测线(5)、第三检测线
(6)方...
【专利技术属性】
技术研发人员:张玉宝,陈延,王亚军,谢忠奎,王若愚,王乐,郭志鸿,
申请(专利权)人:中国科学院寒区旱区环境与工程研究所,
类型:发明
国别省市:甘肃;62
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