一种抗胃癌细胞表面功能性表达的足萼样蛋白前体亚型2的单克隆抗体及其制备方法和用途技术

本发明专利技术涉及生物制药领域，特别是涉及一种抗胃癌细胞表面功能性表达的足萼样蛋白前体亚型2（PODXL-v2）的单克隆抗体（命名为MS17-38）及其制备方法和用途。本发明专利技术提供一种抗胃癌细胞表面功能性表达的足萼样蛋白前体亚型2的单克隆抗体，其抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2或其保守型变异序列，其抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4或其保守型变异序列。本发明专利技术发现MS17-38单抗是针对一组人胃癌细胞的表面PODXL抗原而产生的，并可诱导特异性、功效性生物反应，能够特异性识别胃癌等消化道肿瘤并进行靶向治疗，同时可以应用在消化道肿瘤的诊断和影像中。

Monoclonal antibody capable of resisting surface functional expression of gastric cancer cell, and its preparation method and use of monoclonal antibody of 2

The present invention relates to the field of biological pharmacy, especially relates to a kind of pedalcalix protein precursor isoforms function against gastric cancer cell surface expression of 2 (PODXL-v2) monoclonal antibody (designated as MS17-38) and its preparation and use. The present invention provides a kind of pedalcalix protein function against gastric cancer cell surface expression of precursors of subtype 2 monoclonal antibodies to the amino acid sequence of the antibody light chain variable region of SEQ ID NO:2 or its variant conservative sequence, amino acid sequence of the heavy chain variable region is SEQ ID NO:4 or the conservative sequence variation. The present invention found MS17-38 monoclonal antibody and PODXL antigen on the surface for a group of human gastric cancer cells and produce, and induce the specificity and efficacy of biological reaction, can specifically recognize gastric cancer and other gastrointestinal tumors and targeted therapy, diagnosis and imaging can also be used in the digestive tract tumor.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制药领域，特别是涉及一种抗胃癌细胞表面功能性表达的足萼样蛋白前体亚型2(PODXL-v2)的单克隆抗体(命名为MS17-38)及其制备方法和用途。
技术介绍
如同专利技术人陆梅生等早先申请的专利“抗细胞表面异位表达的单克隆抗体MS17-57及其制备方法和用途”(专利申请号为：201310090565.9，已公开和批准)所述的背景知识，胃癌(GastricCancer，GC)是人类最常见的消化系统恶性肿瘤并且是肿瘤相关死亡的主要原因之一。中国和日本等国家是世界上胃癌发病率最高的国家，每年新发病例近60-70万并占世界病例的多数。很多胃癌患者初次就诊已属临床晚期。胃癌的早期筛查和确诊目前主要依靠胃镜和组织病理学的活检，但是依靠这种早期筛查诊断的手段其特异性、敏感性、准确性和安全性均有一定程度限制性、普及困难以及诸多干扰因素存在和临床应用效果并不令人满意。因此，多数胃癌患者初诊时发现已转移至其它脏器，必须依靠外科手术、放疗和全身化疗等。这些传统治疗或补救措施不仅费用昂贵，大大增加个人和社会沉重经济负担，且存在治疗的特异性和疗效不尽人意等问题。据不完全统计晚期胃癌患者的五年生存率通常不超过10％，所以新的胃癌特异、高效临床治疗方法迫在眉睫。近年来，虽然有一些新的化学治疗药物以及联合治疗方案(个性化医疗)的实施使胃癌患者的治疗反应率有所提高，但在已经开展的随机临床研究调查中发现均未达到中位生存期1年以上的治疗目标。由于化疗及放疗对胃癌普遍不敏感，并缺乏对其有效的替补治疗方案，近年来新的胃癌治疗方法和药物的研发成为基础及临床研究的热点。2002年在美国国立癌症研究所(NCI)的癌症专家建议对肿瘤进行分子分析的定义，这样会有效地实现对肿瘤患者的个体化治疗、复发检测以及预后评估等。在这些新理念的指导下，胃癌的分子靶向治疗和分子生物功能治疗得到快速的发展同时也成为肿瘤治疗的新趋势。专利技术人陆梅生等在早先申请的专利“抗细胞表面异位表达的单克隆抗体及其制备方法和用途”(专利申请号为：201310090565.9，已公开和批准)还阐述了肿瘤标志物靶向和生物学功能治疗是在肿瘤细胞表面过度表达或者功能性表达的某些生物标志性分子作为靶点。从20世纪90年代开始，一直以来多种分子靶向治疗药物(包括抗体药物)相继进入临床试验的肿瘤治疗并显示出很好的疗效，它们包括两大类，大分子单克隆抗体(作用于细胞外的治疗性抗体药物)和小分子酪氨酸激酶抑制剂(作用于细胞内的化学类药物)。由于抗体药物可以高度特异性地识别、结合相应的肿瘤细胞外受体并随即对细胞激发生物学功能，如果不能激发功能的，分有另外几种抗体治疗方法1.抗体药物偶联(AntibodyDrugConjugation,ADC)；2.抗体与放射性同位素结合而进行的特异性放射免疫治疗；3.嵌合抗原受体(ChimericAntigenReceptor,CAR)的T细胞免疫治疗。我们把这些归纳为肿瘤的抗体靶向治疗(AntibodyTargetingTherapy,ATT)和抗体生物功能治疗(AntibodyBiofunctionalTherapy,ABT)，后面那种的抗体生物功能治疗(ABT)又可以分为抗体与生物功能协同作用的激动剂(Agonist)和抗体与生物功能竞争性作用的拮抗剂(Antagonist)。抗体的生物功能作用主要对肿瘤细胞发生发展的相关分子作为靶点而实现对肿瘤的特异性杀伤，防止转移或对其生长微环境的干扰。因此，与传统的化疗、放疗和中医中药相比，抗体药物效果更为明显、效用期长而毒副作用低。肿瘤的抗体生物功能治疗将会成为肿瘤治疗发展的主要方向。专利技术人陆梅生等在早先申请的专利“抗细胞表面异位表达的单克隆抗体及其制备方法和用途”(专利申请号为：201310090565.9，已公开和批准)对于胃癌抗体治疗的背景还阐述了抗体药物对胃癌治疗近年来发展迅速。目前已经过美国FDA批准的一些抗体药物，它们的临床前研究毒理试验和各期临床病例报告显示着特异性不高、靶向性不强和实际临床治疗效果总体上还不十分理想，这些药物包括抗表皮生长因子受体(EGFR)的西妥昔(Cetuximab)单抗药物爱必妥(Erbitux)、抗表皮生长因子受体-2(EGFR2)或叫HER2为靶点的曲妥珠(Trastuzumab)单抗药物赫赛汀(Herceptin)以及抗血管内皮生长因子(VEGF)为靶点的贝伐(Bevacizumab)单抗药物阿瓦斯丁(Avastin)等。所以我们必须制备胃癌靶向生物学功能的高效单抗药物，以面对当前肿瘤临床医学的急需。学者Brichory在世界上首先将蛋白质组学的多肽合成或构建方法引入到鉴定筛选肿瘤相关抗原及抗肿瘤自身抗体领域，通过这一思路和方法，人们揭示出了众多细胞内和细胞外的新肿瘤标志物蛋白分子，比如葡萄糖调节蛋白(GlucoseRegulatedProtein，GRP78)，热休克蛋白-27，-60，-70等(HeatShockProtein，HSP-27、-60、-70etc.)以及纤维蛋白肽-A(FibrinPeptide-A)等。但是此手段也带来了很多的局限性，因为肿瘤生物功能靶点不仅具有细胞表面特异性抗原，而且其功能还必须带有蛋白质空间结构或天然构象，这样就大大地限制了Brichory思路的进一步研究和应用。毋庸置疑，本研究专利技术就是在人体生物自然状态下通过活细胞免疫和活细胞高通量流式细胞仪(FACS)筛选来鉴定胃癌或其它肿瘤细胞表面特异性抗原，从而捕捉和制备特异、高效的治疗性抗体药物，并为胃癌分子标志物鉴定以及胃癌靶向治疗单抗药物的临床应用提供有力工具。足糖萼蛋白(Podocalyxin，PC)是主要表达在肾小球基底膜足细胞(Podocyte)表面的糖蛋白，蛋白等电点(pI)小于7，是偏酸和带负电荷。它在肾小球足细胞上扮演了保持滤过缝隙的开发。足糖萼蛋白在血小板凝血、早期糖尿病发病中起了一定的作用。但是，足萼样蛋白(Podocalyxin-Likeprotein，PODXL)是人类独有的并由PODXL基因编码的唾液粘蛋白家族的一个成员蛋白。足萼样蛋白具有与细胞内结构元素的钠泵/氢泵交换因子组成一个复合物，同时在造血细胞的分化中扮演了一定的角色。它能在血管内皮细胞上表达和能与L型选择蛋白(L-selectin)结合。PODXL具有一些不同氨基酸序列，不同长短多肽片段的亚型体并在不同的组织、细胞和肿瘤上表达。
技术实现思路
鉴于以上所述现有技术的缺点，本专利技术的目的在于提供一种抗胃癌细胞表面功能性表达的足萼样蛋白前体亚型2(英文简本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗胃癌细胞表面功能性表达的足萼样蛋白前体亚型2的单克隆抗体，其抗体轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:2或其保守型变异序列，其抗体重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO:4或其保守型变异序列。

【技术特征摘要】
1.一种抗胃癌细胞表面功能性表达的足萼样蛋白前体亚型2的单克隆抗体，其抗体轻
链可变区的氨基酸序列为SEQIDNO:2或其保守型变异序列，其抗体重链可变区的氨基酸
序列为SEQIDNO:4或其保守型变异序列。
2.如权利要求1所述的一种单克隆抗体，其特征在于，所述轻链可变区的编码序列为
SEQIDNO:1或其保守型变异序列，所述重链可变区的编码序列为SEQIDNO:3或其保守型
变异序列。
3.如权利要求1所述的一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体是鼠源性的。
4.如权利要求1所述的一种单克隆抗体，其特征在于，所述单克隆抗体是IgG1重链和κ
轻链亚型的免疫球蛋白。
5.一种分离的DNA分子，编码如权利要求1-4任一权利要求所述的单克隆抗体的重链
和/或轻链的可变区或全长氨基酸序列。
6.一种构建体，包含所述权利要求5所述的分离的DNA分子。
7.一种单克隆抗体的表达系统，由权利要求6所述的构建体转...

【专利技术属性】
技术研发人员：陆梅生，杰弗瑞·李，张冬青，刘炳亚，
申请(专利权)人：陆梅生，杰弗瑞·李，张冬青，刘炳亚，
类型：发明
国别省市：美国;US