一种对团头鲂进行急性应激的处理方法技术

本发明专利技术涉及一种对团头鲂进行急性应激的处理方法，属于鱼类养殖技术领域。其具体通过材料鱼的选取、材料鱼的养殖、皮质醇注射和采血获得了样品。本发明专利技术通过限定实验鱼养殖水质、温度和密度避免其他因素引起应激，采用麻醉方法降低捕捞和注射造成的应激背景值，最后采用定量注射皮质醇，其相比传统应激采样手法具备可重复性和易操控性等优势。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种对团头鲂进行急性应激的处理方法，具体涉及一种用外源应激激素注射团头鲂，从而对团头鲂进行急性应激采样，建立具有通用性和可重复性的应激模型，属于鱼类养殖

技术介绍
在高密度养殖模式下，环境或生物因素所造成的应激对养殖动物健康生长和抗病力具有显著影响，受到大家广泛关注。应激是鱼体对各种不利因素刺激所产生的非特异性生理反应。鱼类应激反应与其他脊椎动物类似，受下丘脑―垂体―肾间组织轴(HPI)的调控，在应激源刺激后，下丘脑中枢神经系统释放促肾上腺皮质激素释放激素(corticotrophin-releasinghormone，CRH)作用于有促皮质激素细胞分布的垂体前外侧部，由促皮质激素细胞中的阿片―促黑素细胞皮质素原(proopiomelanocortin，POMC)前体肽经加工处理生成促肾上腺皮质激素(adrenocorticotropichormone，ACTH)，进而调控鱼类重要皮质激素—皮质醇的合成，皮质醇释放到血液中，调节呼吸系统、心血管系统、能量代谢系统等相应组织器官中的反应变化。血液皮质醇被认为是鱼类应激的一个灵敏信号。基于应激与皮质醉的这种联系，国内外很多学者对应激的研究都将血液皮质醇水平做为一项重要指标，用以反映应激状态下内分泌系统的变化。团头鲂应激反应强，抗应激能力低，在拉网卖鱼以及运输过程中鱼体由于应激经常出现发毛发红，体表黏液减少或无黏液等现象，有时甚至导致鱼体死亡，严重影响养殖经济效益。在以往研究应激过程中，常采用捕捞、缺氧、控温等措施刺激鱼体产生应激，但不同实验批次应激反应差异较大，不具有可控性。专利技术内容本专利技术的目的在于克服上述不足之处，提供一种对团头鲂进行急性应激的处理方法。按照本专利技术提供的技术方案，一种对团头鲂进行急性应激的处理方法，步骤如下：（1）材料鱼的选取：选取同一批卵孵化所得鱼种，要求其规格整齐，活力强，体重50～500g；（2）材料鱼的养殖：按照每立方水体低于1kg鱼体重的养殖密度进行养殖，温度25～30℃，溶解氧6～10mg/L，pH值6.8～8.0，氨氮含量低于0.1mg/L，亚硝酸盐含量为0.1～0.3mg/L；（3）皮质醇注射：取纯度高于99%的皮质醇按照浓度1～5mg/mL溶解于质量浓度为50%的乙醇溶液中，得到混合试剂，随后取所配混合试剂对材料鱼进行腹腔注射；（4）采血：对步骤（2）养殖后的材料鱼进行深度麻醉，按照单位时间进行尾静脉采血，集血样后，离心收集血清，分装后在-20～70℃冰箱内冻存待检。步骤（4）所述深度麻醉采用的是MS-222间氨基苯甲酸乙酯甲磺酸盐，将其溶解在材料鱼的养殖水中，溶解浓度为140～160mg/L。步骤（4）所述腹腔注射步骤（3）所得试剂时，注射量为1.5～2.5mL/kg体重。本专利技术的有益效果：本专利技术限定了实验鱼养殖水质、温度和密度避免其他因素引起应激，采用麻醉方法降低捕捞和注射造成的应激背景值，最后采用定量注射皮质醇，其相比传统应激采样手法具备可重复性和易操控性等优势。附图说明图1是皮质醇注射鱼体血浆质醇含量随时间变化柱状图。具体实施方式下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。下面结合具体实施例，进一步阐述本专利技术。应理解，这些实施例仅用于说明本专利技术而不用于限制本专利技术的范围。实施例1（1）材料鱼的选取和养殖：2015年6月选取中国水产科学研究院淡水渔业研究中心南泉养殖基地团头鲂，鱼体健康，室外网箱驯养10天，体重(139±10)g，体长（22±2）cm，水温（25±2）℃左右。（2）对比注射：将6个网箱分成两组，一组为实验组，另一组为注射组，实验组和对照组各75尾鱼，每箱25尾鱼；实验组腹腔注射质量浓度为5mg/mL的皮质醇溶液（溶剂为乙醇），注射量为2mL/kg体重；对照组注射相同剂量的乙醇。实验组和对照组分别在注射后0、2、4、8、10、12、24和48h取样，每个时间点取6尾鱼，用浓度为100mg/LMS-222快速深度麻醉，每尾鱼均静脉取血，3000rpm4℃离心10min，吸取上清放入新的1.5mL离心管中，并于-80℃冰箱中保存。取300μL血浆使用皮质醇(CORTISOL)测定试剂盒在MAGLUMI1000全自动化学发光免疫分析仪上检测血浆皮质醇含量。注射鱼体血浆质醇含量变化具体如图1所示。图1中的“*”表示同一时间点差异显著(P<0.05)；柱状图上方不同的大小写字母表示不同时间点差异显著(One-wayANOVA,P<0.05)。实施例2（1）材料鱼的选取：2015年8月选取中国水产科学研究院淡水渔业研究中心南泉基地养殖团头鲂，鱼体健康无伤，活力强，体重(445±32)g，体长(32±4)cm。（2）材料鱼的养殖：将材料鱼于循环养殖系统中暂养2周，水温控制在(25±1)℃，持续充氧，光周期同自然光，按体重的3%投喂商品颗粒饲料，一天3次。（3）皮质醇注射：实验鱼腹腔注射皮质醇溶液（2mL/kg体重，浓度为5mg/mL，溶剂为酒精），在注射后记为0h。在0h，2h，4h，8h，12h，24h，5d时间点分别取样，每次取5尾鱼。（4）采血：取样前使用175mg/L的MS-222对鱼进行麻醉，尾静脉采血。鱼体血浆质醇含量检测采用实例1中相同方法。鱼体血浆质醇含量变化鱼实例1变化趋势相同，2h时间点血浆质醇含量最高达5μg/mL。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对团头鲂进行急性应激的处理方法，其特征是步骤如下：（1）材料鱼的选取：选取同一批卵孵化所得鱼种，要求其规格整齐，活力强，体重50～500g；（2）材料鱼的养殖：按照每立方水体低于1kg鱼体重的养殖密度进行养殖，温度25～30℃，溶解氧6～10mg/L，pH值6.8～8.0，氨氮含量低于0.1mg/L，亚硝酸盐含量为0.1～0.3mg/L；（3）皮质醇注射：取纯度高于99%的皮质醇按照浓度1～5mg/mL溶解于质量浓度为50%的乙醇溶液中，得到混合试剂，随后取所配混合试剂对材料鱼进行腹腔注射；（4）采血：对步骤（2）养殖后的材料鱼进行深度麻醉，按照单位时间进行尾静脉采血，集血样后，离心收集血清，分装后在‑20～70℃冰箱内冻存待检。

【技术特征摘要】
1.一种对团头鲂进行急性应激的处理方法，其特征是步骤如下：（1）材料鱼的选取：选取同一批卵孵化所得鱼种，要求其规格整齐，活力强，体重50～500g；（2）材料鱼的养殖：按照每立方水体低于1kg鱼体重的养殖密度进行养殖，温度25～30℃，溶解氧6～10mg/L，pH值6.8～8.0，氨氮含量低于0.1mg/L，亚硝酸盐含量为0.1～0.3mg/L；（3）皮质醇注射：取纯度高于99%的皮质醇按照浓度1～5mg/mL溶解于质量浓度为50%的乙醇溶液中，得到混合试剂，随后取所配混合试剂对材料...

【专利技术属性】
技术研发人员：习丙文，陈凯，高金伟，薛春雨，米海峰，谢骏，潘良坤，
申请(专利权)人：通威股份有限公司，中国水产科学研究院淡水渔业研究中心，
类型：发明
国别省市：四川;51