康复新液制剂指纹图谱的质量测定方法及标准指纹图谱技术

本发明专利技术涉及一种药品的检测方法，特别涉及康复新液制剂指纹图谱的质量测定方法及标准指纹图谱。本发明专利技术通过高效液相色谱法检测，获得康复新液的指纹图谱。方法主要包括如下步骤：a.对照品溶液的制备；b.供试品溶液的制备；c.指纹图谱制作。本发明专利技术建立了色谱峰的分离度、重复性和稳定性好的康复新液化学指纹图谱，可作为鉴定康复新制剂质量控制方法。为科学、有效地评价和控制美洲大蠊原料药材及康复新液制剂的内在质量提供了科学依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种药品的质量测定方法，特别涉及康复新液制剂指纹图谱的质量测定方法及标准指纹图谱。
技术介绍
康复新液收载于中华人民共和国卫生部药品标准中成药第十九册及WS3-B-3674-2000(Z)。康复新液为美洲大蠊提取物制成的单方制剂，具有抗炎、抗消化性溃疡、抗肿瘤、免疫调节、抗氧化等多种药理活性。康复新液临床应用广泛，内服可用于治疗胃痛出血，胃及十二指肠溃疡等疾病，外用可治疗金疮、外伤、溃疡、烧伤、烫伤等。目前，康复新液的质量评价多以一个或多个核苷类成分、氨基酸及多糖的含量测定研究为主，仅有少数报道开展了康复新液制剂的指纹图谱研究，但大部分色谱峰的峰型和分离度均较差，难以有效地控制康复新液制剂的质量。为了提高康复新液的质量控制水平，本研究采用高效液相色谱方法，建立了大部分色谱峰分离度、重复性和稳定性好的康复新液化学指纹图谱，并对不同批次样品的指纹图谱进行相似度评价，为科学、有效地评价和控制康复新液制剂的内在质量提供了依据。
技术实现思路
本专利技术的目的在于公开一种康复新液制剂的指纹图谱质量测定方法，此方法具有分离效果好，灵敏度高，能真实反映康复新液制剂所含特征物质，可作为康复新液制剂质量控制方法。为达到上述目的，本专利技术的技术方案如下：本专利技术康复新液制剂指纹图谱的质量测定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(A)供试品溶液的制备：取康复新液制剂，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，备用；(B)对照品溶液的制备：精密称取葫芦巴碱、尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷、腺苷适量，加水制成每1mL含葫芦巴碱、尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷及腺苷分别为20μg、30μg、20μg、40μg及40μg的混合对照溶液，备用；(C)测定：吸取供试品与对照品溶液各20μL注入高效液相色谱仪，以0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到康复新液制剂的指纹图谱。优选的流动相为0.1％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0～3min，3％B；3～5min，3％B～8％B；5～10min，8％B～10％B；10～15min，10％B～35％B；15～30min，35％B～80％B；30～40min，80％B～3％B；40～45min，3％B；检测波长为254nm；柱温为35℃；流速为0.8mL/min；理论板数按次黄嘌呤计算不低于5000。本专利技术得到的康复新液制剂的指纹图的特征在于：康复新液制剂共有12个共有指纹峰，其中5个分别与相应的参照物峰保留时间相同；与次黄嘌呤参照物峰相应的峰为S峰，12个共有指纹峰的相对保留时间分别为：1号峰0.432±0.043，2号峰0.671±0.067，3号峰0.731±0.073，4号峰0.820±0.082，5号峰0.888±0.089，6(S)号峰1.000±0.000，7号峰1.126±0.113，8号峰1.462±0.146，9号峰1.536±0.154，10号峰1.884±0.118，11号峰2.282±0.228，12号峰2.675±0.268。本专利技术的优点如下：1.本专利技术公开的康复新液制剂指纹图谱，对其特征物质进行了有效表征，提供了一种通过整体指纹图谱信息对康复新液质量进行评价的方法，避免了只测定其中一两种化学成分就对康复新液制剂质量判断的片面性，使得康复新液制剂质量控制更加准确客观。2.本专利技术提供的指纹图谱质量测定方法分离度好，重复性及稳定性好，能够快速的对康复新液进行鉴定。3.本专利技术提供的指纹图谱有12个共有峰，通过与标准品色谱峰对比，标定了色谱图中的5个共有峰，分别为：葫芦巴碱，次黄嘌呤，尿嘧啶，肌苷和腺苷。具体实施方式：下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本专利技术。实验例1(1)仪器及试剂TSQQuantumUltra液相色谱-串联质谱联用仪；HypersilGoldC18柱(4.6×150mm，5μm)。甲醇为色谱纯，水为超纯水，乙酸为分析纯。10个不同批次的康复新液：批号140308，批号140309，批号140310，批号140311，批号140312，批号140313，批号140314，批号140315，批号140316，批号140317。葫芦巴碱、尿嘧啶、次黄嘌呤、腺苷、肌苷(均购自中国药品生物制品鉴定所，批号分别为A0654、PCS3048、PCS3055、PCS0217、PCS3058)。(2)色谱条件a.检测波长的选择由于康复新液为药用昆虫美洲大蠊的醇提取物，其中含有大量核苷类物质，而现有研究表明，核苷类化合物(核苷、碱基及其类似物)是生物细胞维持生命活动的基本组成元素，参与DNA代谢过程，具有抗癌、抗病毒等药理活性。在多种动物药如冬虫夏草、广地龙、土鳖虫和蛇毒等中均发现含有大量的核苷类化合物，并被作为建立指纹图谱的参照物质。故本实验选择254nm(核苷类物质有最大吸收值)作为工作波长，之后根据梯度洗脱的色谱图，改变参比波长也发现，254nm处含有最多色谱峰，信息量丰富。b.流动相的选择乙腈和甲醇是高效液相色谱检测中最常用的两种流动相。以2005版《中国药典》为例，其中以甲醇为流动相主要成分的药品为159种，以乙腈为流动相主要成分的药品为116种。在色谱系统中，流动相强度对反相色谱分离的影响很大，若流动相过强，K值变小，分离度通常会降低，溶剂强度太弱，则运行时间过长，在批次多的情况下会浪费时间。乙腈在UV检测时产生的噪声小，洗脱能力强，一般为甲醇洗脱能力一倍以上；但色谱峰的出峰时间往往早于甲醇，这对于成分复杂的中药来说，往往会造成色谱峰之间不易分开，造成双峰的情况。从环保的角度看，甲醇的毒性远远小于乙腈。本实验比较了乙腈-水和甲醇-水流动相系统的色谱图，发现乙腈极性比甲醇大，导致峰图出峰太快，并且甲醇-水系统梯度洗脱的柱压也小于乙腈-水系统。而由于核苷类物质呈现弱碱性，故甲醇-0.1％乙酸系统洗脱比甲醇-水系统洗脱效果好，分离效果较好，保留时间适中，方法的精密度、稳定性、重复性好。c.洗脱条件的选择由于中药与有效成分单一的西药不同，其成分复杂，采用等度洗脱往往不能兼顾某些性质相差较大组分的分离要求，不能保证所有组分都出峰以及获得合适的分离。此时需要采用按一定程序改变流动相浓度配比的洗脱方式，即梯度洗脱。本实验选取的梯度洗脱，以甲醇-0.1％乙酸为流动相。d.其它参数的选择在反相液相色谱中，C18色谱柱的应用范围最广。本实验选择了HypersilGoldC18柱(4.6×150mm，5μm)、KromasilC18柱(4.6×250mm，5μm)和InertSustainC18柱(4.6×250mm，5μm)进行比较，根据色谱图的分离程度，最终选择InertSustainC18柱(4.6×250mm，5μm)。而内径为4.6mm的色谱柱，其最佳流速为1.0mL/min，由于中药成分复杂，为了使色谱峰能够更好的分离，将流速设定为0.8mL/min。而随着柱温的升高，色谱峰也随之变尖变对称，故选择的柱温为35℃。综上所述，康复新液制剂的HPLC指纹图谱的色谱条件如下：TSQQuantumUltra液相色谱-串联质谱联本文档来自技高网...

【技术保护点】
康复新液制剂指纹图谱的质量测定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(A)供试品溶液的制备：取康复新液制剂，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，备用；(B)对照品溶液的制备：精密称取葫芦巴碱、尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷、腺苷适量，加水制成每1mL含葫芦巴碱、尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷及腺苷分别为20μg、30μg、20μg、40μg及40μg的混合对照溶液，备用；(C)指纹图谱制作：吸取供试品与对照品溶液各20μL注入高效液相色谱仪，以0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)‑甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到康复新液制剂的指纹图谱。

【技术特征摘要】
1.康复新液制剂指纹图谱的质量测定方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(A)供试品溶液的制备：取康复新液制剂，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，备用；(B)对照品溶液的制备：精密称取葫芦巴碱、尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷、腺苷适量，加水制成每1mL含葫芦巴碱、尿嘧啶、次黄嘌呤、肌苷及腺苷分别为20μg、30μg、20μg、40μg及40μg的混合对照溶液，备用；(C)指纹图谱制作：吸取供试品与对照品溶液各20μL注入高效液相色谱仪，以0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)为流动相，采用梯度洗脱，得到康复新液制剂的指纹图谱。2.根据权利要求1所述的康复新液制剂的指纹图谱质量测定方法，其特征在于：步骤(C)中优选的流动相为0.1％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)。3.根据权利要求1所述的康复新液制剂的指纹图谱质量测定方法，其特征在于高效液相色谱仪测定条件为：填充剂为十八烷基硅烷键合硅胶；0.08％～1.2％乙酸水溶液(A)-甲醇(B)；采用梯度洗脱：0～3min，3％B；3～5min，3...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘越飞，耿福能，沈咏梅，
申请(专利权)人：四川好医生攀西药业有限责任公司，
类型：发明
国别省市：四川;51