本发明专利技术公开了一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：包括盒体，设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂，所述化学发光板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光板，各孔包被有抗NGAL抗体，抗体包被浓度为 5.0 μg/mL，所述试剂包括：NGAL系列标准品溶液，NGAL系列质控品溶液，样本稀释液，酶标NGAL抗体，链酶亲和素‑HRP，化学发光底物A液，化学发光底物B液，浓缩洗涤液。本发明专利技术的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高的特点，与传统的ELISA法比较，操作时间大幅度减少。可用作检测肾损伤的辅助诊断。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的化学发光盒，用于检测肾损伤病人血清中的NGAL蛋白的浓度。可用作检测脑梗死等脑损伤疾的辅助诊断。属于免疫学检测领域。
技术介绍
中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophilgelatinaseassociatedlipocalin，NGAL)，是人脂质运载蛋白家族中的一个新成员。近年来，NGAL作为一种新的肾损伤标志物倍受关注。人类NGAL基因定位于第9号染色体长臂(9q34)，全长5869bp，包括1695bp的5'端非转录区、178bp的3'端非转录区及由7个外显子和6个内含子构成的3696bp的原初转录区；其相对分子质量为25000bp。NGAL在肾脏病领域最早被作为急性肾损伤(AKI)新的早期诊断标志物提出。正常情况下NGAL在肾组织少量表达，缺血-再灌注肾损伤动物模型中血、尿NGAL分别上升300倍和1000倍。针对儿童心脏手术的研究显示并发AKI者术后2h尿NGAL浓度明显升高，远早于1～3d后才出现改变的血清肌酐，而术后12h尿NGAL水平则与AKI的病死率明显相关，成年患者心脏手术后2h尿NGAL同样可作为AKI的早期诊断指标，并与其发病率及体外循环持续时间明显相关，但该相关性较儿童低，考虑可能与受试人群基础疾病状态等因素相关。在肾移植手术中，尿及肾组织中的NGAL高表达均与术后肾功能延迟恢复(DGF)相关。
技术实现思路
为了解决现有技术中的问题，本专利技术提供了一种具有高灵敏度、简便快速、准确度高的中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的化学发光盒。为了解决上述问题，本专利技术所采取的技术方案是：一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：包括盒体，设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂，所述化学发光板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光板，各孔包被有抗NGAL抗体，抗体包被浓度为5.0μg/mL，所述试剂包括：NGAL系列标准品溶液，NGAL系列质控品溶液，样本稀释液，酶标NGAL抗体，链酶亲和素-HRP，化学发光底物A液，化学发光底物B液，浓缩洗涤液。前述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述盒体检测样本为人血清样本。前述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述NGAL系列标准品溶液浓度分别为：0、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL。前述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述NGAL系列质控品溶液浓度分别为：400-600ng/mL、160-240ng/mL。前述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述样本稀释液为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，磷酸盐缓冲液是每升含有16gNaCl，0.4gKCl，0.4gKH2PO4，5.8gNa2HPO4的水溶液。前述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述酶标NGAL抗体是由NGAL抗体与生物素偶合制成的偶联物作为检测抗体前述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述浓缩洗涤溶液是含有体积分数0.05％吐温-20的pH＝7.4，0.1mol/L磷酸盐缓冲液。前述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述化学发光液A液为鲁米诺含量为0.01M、对甲苯酚含量为0.001MpH＝8.8的三(羟甲基)氨基甲烷溶液；所述化学发光液B液为每100mL溶液含柠檬酸2.1g，无水Na2HPO42.82g，0.75％的过氧化氢脲0.64mL的水溶液，所述百分比为质量百分比。本专利技术所达到的有益效果：本专利技术主要是利用抗原与抗体的特异性免疫反应的基本原理来实现的。化学发光免疫分析法是化学发光法和免疫分析法结合的产物，因此同时具有化学发光法的高灵敏性和免疫分析法的高特异性。在整个反应过程中，样品中NGAL含量越高，反应体系中发光强度越强；反之，样品中NGAL含量越少，发光强度越弱。本专利技术的化学发光酶联免疫检测试剂盒具有高灵敏度、简便快速、准确度高的特点，与传统的ELISA法比较，操作时间大幅度减少。可用作检测肾损伤的辅助诊断。附图说明图1是本专利技术化学发光试剂盒标准曲线。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步描述。以下实施例仅用于更加清楚地说明本专利技术的技术方案，而不能以此来限制本专利技术的保护范围。本专利技术中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，第一方面提供了一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(NGAL)的化学发光酶联免疫(CLEIA)检测试剂盒，包括盒体，设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂：1.包被有抗NGAL抗体的白色不透明96孔可拆卸或不可拆卸的聚苯乙烯化学发光板，抗体包被浓度为5.0μg/mL。2.NGAL系列标准品溶液。浓度分别为：0、50、100、250、500、1000ng/mL。3.NGAL系列质控品溶液浓度分别为：500±100、200±40ng/mL。4.样本稀释液。为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4。5.酶标NGAL抗体。由NGAL抗体与生物素偶联制备得到。6.链亲和素-HRP。7.发光底物液。化学发光液分为A、B液。化学发光液A液为化学发光底物-鲁米诺和发光增强剂-对甲苯酚溶液，化学发光液B液为过氧化氢脲溶液。8.浓缩洗涤液。浓缩洗涤溶液具体为含有吐温-20(Tween-20)缓冲液的20倍浓缩磷酸盐缓冲液，使用前用双蒸水稀释至工作浓度后使用，用于实验过程中洗涤化学发光板本专利技术第二方面该试剂盒适用于肾损伤的辅助诊断。本专利技术第三方面该试剂盒检测样本为人血清样本。本专利技术第四方面相关溶液的配制：本专利技术试剂盒中涉及的NGAL标准品溶液、样本稀释液、化学发光液及浓缩洗涤液及其配方对本专利技术试剂盒检测的灵敏度影响很大；其中各溶液的主要成分及其配制方法是：1.NGAL系列标准品溶液：以常规方法将NGAL纯品用标准品稀释液配制成浓度分别为0、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL的NGAL标准溶液。2.NGAL系列质控品溶液：以常规方法将NGAL纯品用标准品稀释液配制成浓度分别为：500±100ng/mL、200±40ng/mL。3.酶标NGAL抗体溶液：用NGAL抗体与生物素偶联制备，将所得NGAL抗原用酶标NGAL稀释液稀释成1:4000的工作浓度。4.标准品稀释液：为含有BSA，蔗糖的0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，是每升含有20gBSA，50g蔗糖，16gNaCl，0.4gKCl，0.4gKH2PO4，5.8gNa2HPO4的水溶液。5.酶标抗原稀释液：为含有BSA的0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，是每升含有20gBSA，16gNaCl，0.4gKCl，0.4gKH2PO4，5.8gNa2HPO4的水溶液。6.样本稀释液：为0.05mol/L磷酸盐缓冲液，pH＝7.4，磷酸盐缓冲液是每升含有16gNaCl，0.4gKCl，0.4gKH2PO4本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：包括盒体，设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂，所述化学发光板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光板，各孔包被有抗NGAL抗体，抗体包被浓度为5.0μg/mL，所述试剂包括：NGAL系列标准品溶液，NGAL系列质控品溶液，样本稀释液，酶标NGAL抗体，链酶亲和素‑HRP，化学发光底物A液，化学发光底物B液，浓缩洗涤液。
【技术特征摘要】
1.一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：包括盒体，设在盒体内的化学发光板和设在盒体内的试剂，所述化学发光板为乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光板，各孔包被有抗NGAL抗体，抗体包被浓度为5.0μg/mL，所述试剂包括：NGAL系列标准品溶液，NGAL系列质控品溶液，样本稀释液，酶标NGAL抗体，链酶亲和素-HRP，化学发光底物A液，化学发光底物B液，浓缩洗涤液。2.根据权利要求1所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述盒体检测样本为人血清样本。3.根据权利要求2所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述NGAL系列标准品溶液浓度分别为：0、100ng/mL、200ng/mL、500ng/mL、1000ng/mL、2000ng/mL。4.根据权利要求3所述的一种中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白的化学发光盒，其特征在于：所述NGAL系列质控品溶液浓度分别为：400-600ng/mL、160-240ng/mL。5.根据权利...
【专利技术属性】
技术研发人员：陆上苏，吴伟，徐恒，
申请(专利权)人：镇江华测金太医学检验所有限公司，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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