一种耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法技术

本发明专利技术公开了一种耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，包括以下步骤：1)猕猴桃资源的组织培养；2)组培苗的生根培养和移栽；3)组培盆栽苗的NaCl胁迫处理；4)盐害指数(Salt Damage Index，SDI)的统计分析；5)耐盐性鉴定。该方法简单易操作，因选用的材料为生长一致的组培盆栽苗，能够保证鉴定结果的准确性和可靠性，快速筛选耐盐猕猴桃种质资源，也可为其他果树资源的抗性鉴定提供借鉴。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及农业
中的果树种质资源的鉴定方法，特别提供了一种耐盐猕猴桃抗性种质的鉴定方法。
技术介绍
猕猴桃是原产我国的重要果树资源，以其独特风味和富含维生素C等营养成分而备受人们喜爱，是20世纪野生果树人工驯化栽培最成功的四大果树之一。我国猕猴桃栽培面积和产量都居世界前列，但果实综合品质、单位产量和价格与新西兰、意大利、日本等发达国家相比，均有较大差距，原因之一是我国缺乏适应性强、高抗性的猕猴桃专用砧木。栽培过程中砧木多随机选用中华猕猴桃(Actinidiachinensis)或美味猕猴桃(Actinidiadeliciosa)的不同株系，导致果实品质如果形均一性、单果重、口感等参差不齐，缺乏市场竞争力，经济效益较低。嫁接繁殖是猕猴桃栽培的主要繁殖方式，砧木不但可以提高嫁接品种对逆境(如干旱、盐碱、高温、涝渍等)的适应能力，还可调节接穗的生长特性、产量和果实品质等性状。因此，培育抗性强、适应性广的高效砧木对我国猕猴桃抗性育种及整个产业的发展都至关重要。猕猴桃属浅根系植物，其肉质根大多分布在地下40厘米深处，对盐胁迫非常敏感，盐碱胁迫会导致猕猴桃叶片萎蔫、脱落，严重时茎杆干枯、生长停滞。抗性资源的鉴定首先要明确抗性鉴定标准，然而，目前我国在猕猴桃耐盐方面的研究较少，也没有统一的抗性资源鉴定标准，因此，急需建立一套适用于猕猴桃耐盐种质资源筛选的鉴定方法。专利技术人在长期的资源收集和抗性评价研究过程中，逐步总结出一套行之有效的耐盐猕猴桃资源鉴定方法，并正在通过该方法对已收集到的资源进行系统的抗性评价，以期筛选出耐盐猕猴桃资源，并嫁接现有主栽品种，进行深入的比较研究，培育耐盐专用砧木，促进我国猕猴桃的抗性育种研究工作及整个产业的发展。
技术实现思路
有鉴于现有技术的上述缺陷，本专利技术提供一种耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，本专利技术操作简单，所需材料易获得，鉴定结果准确可靠，利用本专利技术可以快速筛选和鉴定耐盐资源，为培育猕猴桃耐盐专用砧木提供抗性材料。本专利技术提共的耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，包括以下步骤：1)猕猴桃资源的组织培养；2)组培苗的生根培养和移栽；3)组培盆栽苗的NaCl胁迫处理；4)盐害指数(SaltDamageIndex，SDI)的统计分析；5)耐盐性鉴定。进一步地，所述步骤1)中猕猴桃资源的组织培养方法为：挑选当年萌发的猕猴桃嫩枝条，剪取适当长度带回组培准备室，剪去叶片和叶柄，放于流水下冲洗小时，剪成3厘米长的单芽茎段，放于超净工作台上，先用75％酒精浸泡，再用0.1％升汞浸泡，再用无菌水冲洗，剪掉茎段两端及叶柄端口0.5厘米左右，接种于茎段出芽培养基，调整培养基pH值5.8。培养条件为：24±2℃，相对湿度40％，14小时光照，8小时黑暗。待茎段上新生出的腋芽长至2厘米时，切下转入增殖培养基，实现组培苗的增殖和扩繁。进一步地，出芽培养基为：MS+0.5mg/L6-苄基腺嘌呤+1.0mg/L吲哚乙酸，增殖培养基为：MS+1.0mg/L玉米素或MS+1.0mg/L玉米素+0.5mg/L赤霉素，并且增殖培养基的pH为5.8。进一步地，所述步骤2)的生根培养为将步骤1)中扩繁的组培苗转入生根培养基培养，组培苗的生根培养基配方为：MS+(0.2～0.7)mg/L吲哚乙酸，待诱导出的根生长至约2厘米时，放置在培养间打开盖子炼苗2～4天后即可移栽，移栽基质为河沙:珍珠岩:草炭＝1:1:1，栽植于32孔穴盘中，移栽前浇透水，移栽后少量浇水，之后每天采用喷灌的方法定期喷水2次，待移栽苗生长出新叶后，进行日常管理。进一步地，所述步骤3)中组培盆栽苗的NaCl胁迫处理方法为：放于温室穴盘中的组培苗等待第二年春天发出新的枝蔓时，只留一个主蔓，移栽到装有草炭:珍珠岩:基质＝1:1:1的黑色营养钵中，营养钵的规格为18×18，并用天平称量装入营养钵中的基质的重量，待主蔓生长至40厘米高时，挑选生长一致的盆栽苗，向营养钵中添加NaCl溶液，使NaCl的质量占营养钵基质重量的0.5％，并在营养钵下垫一个塑料圆盘，若有流出的NaCl溶液再次倒回营养钵中，经NaCl处理3天后浇水，之后进行日常管理。进一步地，所述步骤4)中盐害指数的统计分析方法为：a.对盐害指数SDI进行分级，b.公式计算各猕猴桃资源的盐害指数。进一步地，步骤a中对盐害指数SDI进行分级为：在经过NaCl胁迫处理30天后，根据盆栽苗所表现出的受害症状进行统计分析，盐害指数SDI的分级标准如下：Ⅰ老叶和新叶均生长正常，无盐害症状；Ⅱ老叶发黄，主要表现在叶缘和叶尖部位，新叶生长正常；Ⅲ老叶发黄并伴有干枯症状，干枯面积小于1/3，且新叶嫩梢部位伴有干枯症状；Ⅳ老叶发黄、干枯，干枯面积大于1/3，且新叶嫩梢干枯；Ⅴ老叶几乎完全干枯、脱落，且主蔓伴有干枯症状；所述新叶是指新发出的嫩枝上的叶片。进一步地，依据下列公式计算各猕猴桃资源的盐害指数：SDI＝∑(x×n)/(5N)×100，x--各级盐害级数值，n--各级盐害级株数，N--调查的总植株数。进一步地，所述步骤5)中耐盐性鉴定的依据为SDI值：值越大，表明盐害越严重，越不耐盐；值越小，表明盐害越轻，越耐盐。进一步地，耐盐性的分级标准为：盐害指数20≤SDI＜40为耐盐资源；40≤SDI＜60为中度耐盐资源；60≤SDI＜80为盐敏感资源；80≤SDI≤100为盐极敏感资源。本专利技术的主要优点在于鉴定耐盐猕猴桃资源时对所需的鉴定材料进行了详细的说明，可以保证鉴定材料的一致性，并制定了相应的盐害指数分级标准。由于猕猴桃是雌雄异株植物，会因授粉是否充分导致种子质量(如发芽率、种子内含物等)的差异；如果直接使用枝条进行资源鉴定，会因为枝条的年龄、粗度及新老枝等因素导致鉴定材料的不一致，从而对鉴定结果造成影响。因此，猕猴桃抗性资源鉴定时种子和枝条都不是理想的试材。组织培养不但可以保证猕猴桃资源的稳定性和一致性，还可以保持其优异性状，因此将猕猴桃资源进行组织培养、生根及移栽，经过冬季的休眠，在第二年春天新发芽后只留一个主蔓，并选取生长一致的材料(保证根生长情况的基本一致)，进行耐盐性鉴定，可以在最大程度上保证鉴定材料的均一性，结合NaCl处理30天后各资源的盐害指数的统计分析，确保鉴定结果的稳定和可靠。具体实施方式实施例本实施例一种耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，所述耐盐性鉴定方法包括如下步骤：1)猕猴桃资源的组织培养；2)组培苗的生根培养和移栽；3)组培盆栽苗的NaCl胁迫处理；4)盐害指数(SaltDamageIndex，SDI)的统计分析；5)耐盐性鉴定。步骤1)中猕猴桃资源的组织培养方法为：挑选春季新萌发的嫩枝条，剪取成长度为15～40厘米长，放于清水中，遮阴迅速带回组织培养准备室，剪去叶片，留叶柄长度约1厘米，放于流水下冲洗2小时，剪成3厘米长的单芽茎段，放于超净工作台上，75％酒精浸泡30秒，0.1％升汞浸泡1分钟，无菌水冲洗5遍，剪掉茎段两端约0.2厘米长度，留叶柄端口0.4厘米左右，接种于茎段出芽培养基：MS+0.5mg/L6-BA(6-苄基腺嘌呤)+1.0mg/LIBA(吲哚乙酸)，调整培养基pH值5.8。培养条件为：24±2℃，相对湿度40％，14小时光照，8小时黑暗。待茎段上新生出的本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)猕猴桃资源的组织培养；2)组培苗的生根培养和移栽；3)组培盆栽苗的NaCl胁迫处理；4)盐害指数(Salt Damage Index，SDI)的统计分析；5)耐盐性鉴定。

【技术特征摘要】
1.一种耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：1)猕猴桃资源的组织培养；2)组培苗的生根培养和移栽；3)组培盆栽苗的NaCl胁迫处理；4)盐害指数(SaltDamageIndex，SDI)的统计分析；5)耐盐性鉴定。2.如权利要求1所述的耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，其特征在于，所述步骤1)中猕猴桃资源的组织培养方法为：挑选当年萌发的猕猴桃嫩枝条，剪取适当长度带回组培准备室，剪去叶片和叶柄，放于流水下冲洗，剪成3厘米长的单芽茎段，放于超净工作台上，先用75％酒精浸泡，再用0.1％升汞浸泡，再用无菌水冲洗，剪掉茎段两端及叶柄端口0.5厘米左右，接种于茎段出芽培养基，培养，待茎段上新生出的腋芽长至2厘米时，切下转入增殖培养基，实现组培苗的增殖和扩繁。3.如权利要求2所述的耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，其特征在于，出芽培养基为：MS+0.5mg/L6-苄基腺嘌呤+1.0mg/L吲哚乙酸，增殖培养基为：MS+1.0mg/L玉米素或MS+1.0mg/L玉米素+0.5mg/L赤霉素，并且出芽培养基和增殖培养基的pH为5.8。4.如权利要求1所述的耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，其特征在于，所述步骤2)中的生根培养为将步骤1)中扩繁的组培苗转入生根培养基培养，待诱导出的根生长至约2厘米时，放置在培养间打开盖子，炼苗2～4天后即可移栽，移栽前浇透水，移栽后少量浇水，之后每天采用喷灌的方法定期喷水2次，待移栽苗生长出新叶后，进行日常管理，组培苗的生根培养基配方为：MS+(0.2～0.7)mg/L吲哚乙酸。5.如权利要求1所述的耐盐猕猴桃种质资源的鉴定方法，其特征在于，所述步骤3)中组培盆栽苗的NaCl胁迫处理方法为：放于温室穴盘中的组培苗等待第二年春天发出新的枝蔓时，只留一个主蔓，移栽到装有草炭:珍珠岩:基质＝1:1:1的黑色...

【专利技术属性】
技术研发人员：钟云鹏，方金豹，陈锦永，齐秀娟，林苗苗，孙雷明，顾红，魏翠果，
申请(专利权)人：中国农业科学院郑州果树研究所，
类型：发明
国别省市：河南;41