一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法技术

本发明专利技术公开了一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：a、将鹰嘴豆用水浸泡，发芽处理，分离出胚芽，烘干，粉碎，加入乙醇水溶液，混合，超声提取，在水浴温度60～80℃，加热1～2h，分离，提取1～6次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；b、将粗提液装入大孔树脂柱，静置，洗去杂质，再用体积浓度为60％～90％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮。经检测，本发明专利技术的方法分离条件简单、能耗低，获得鹰嘴豆异黄酮，纯度高、杂质较少，收率高。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及鹰嘴豆异黄酮的制备
，具体涉及一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法。
技术介绍
鹰嘴豆属豆科野豌豆族鹰嘴豆属(CicerarietinumL.)，是世界第二大消费豆类，世界上有50多个国家种植鹰嘴豆。鹰嘴豆具有降血糖、降血脂、抗氧化、抗肿瘤、保护心血管等多种药理活性，与其活性成分异黄酮有关。鹰嘴豆中异黄酮主要为鹰嘴豆芽素A、刺芒柄花素、大豆苷元和染料木素等。异黄酮类化合物是广泛存在于大豆、鹰嘴豆等豆科植物中的一类生物活性物质，在植物中主要以糖苷形式存在，其分子结构跟动物雌性激素比较相似，故被称作植物雌激素。膳食中的异黄酮以糖苷的形式存在，在体内可转化为具有生物活性的代谢物质。异黄酮的抗氧化性与免疫调节、降血压、降胆固醇、抗肿瘤等都有一定的联系，它通过减少氧自由基、轻自由基，从而达到抗衰老的功能。目前从鹰嘴豆中提取分离鹰嘴豆异黄酮主要采取溶剂萃取的方法，通过乙醇等有机溶剂加热回流提取异黄酮。由于加热回流提取鹰嘴豆粉或豆芽中异黄酮时间较长一般为1～3小时，加热温度一般在60～90℃，温度较高，溶剂易挥发，成本较高，提取效率有限。在从鹰嘴豆提取异黄酮过程中往往忽略了鹰嘴豆发芽处理，提取出的异黄酮含量较少，纯度较低。
技术实现思路
本专利技术的目的是克服现有技术的不足，提供一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法。本专利技术的技术方案概述如下：一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：a、将鹰嘴豆用水浸泡，在10～20℃下发芽处理3～5天，分离出胚芽，在40～50℃烘干，粉碎，加入20～50质量倍的体积浓度为55％～85％的乙醇水溶液，混合，在超声功率200～500W条件下，超声10～30min，在水浴温度60～80℃，加热1～2h提取，分离，提取1～6次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；b、将粗提液装入大孔树脂柱，静置1-3h，先用体积浓度为10％～20％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为60％～90％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为0.5-2mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮。步骤a中的乙醇水溶液的体积浓度优选为65％～75％。步骤a中超声功率优选为300～400W。大孔树脂的型号优选为AB-8、DM-130、DM301、D101、HP-100、XAD-2或HP-20型。步骤b中洗脱用乙醇水溶液的体积浓度优选为65％～85％。本专利技术的优点在于：鹰嘴豆进行发芽，促进鹰嘴豆异黄酮合成，利用超声波空化作用辅助异黄酮提取，通过大孔树脂吸附富集，获得纯度较高的鹰嘴豆异黄酮，分离条件简单、样品提取率高、能耗低。利用HCLP进行检测，本专利技术的方法得到鹰嘴豆异黄酮含量高，纯度为42.4～58.3％，收率高、杂质较少。附图说明图1为鹰嘴豆中异黄酮对照品的液相色谱图。图2为本专利技术从鹰嘴豆中提取异黄酮的液相色谱图。具体实施方式本专利技术的实施例是为了使本领域的技术人员能够更好地理解本专利技术，并不能对本专利技术作任何限制。下面结合具体实施例对本专利技术作进一步的说明。实施例1一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：a、将鹰嘴豆筛选清洗，用水浸泡2h，在15℃下发芽4天，分离出胚芽，将胚芽在45℃烘干，粉碎，过60目筛，加入40质量倍的体积浓度为75％的乙醇水溶液，混合，在超声功率300W条件下，超声15min，在超声15min中采用超声10s，间歇5s进行，在水浴温度70℃，加热1.5h提取，分离，提取6次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；b、将粗提液装入型号为AB-8大孔树脂柱，静置2h，先用体积浓度为15％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为65％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为0.5mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮，纯度为58.3％。实施例2一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：a、将鹰嘴豆筛选清洗，用水浸泡2h，在15℃下发芽处理4天，分离出胚芽，在45℃烘干，粉碎，加入40质量倍的体积浓度为65％的乙醇水溶液，混合，在超声功率400W条件下，超声20min，在超声25min中采用超声10s，间歇5s进行，在水浴温度70℃，加热1.5h提取，分离，提取5次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；b、将粗提液装入型号为DM-130大孔树脂柱，静置2h，先用体积浓度为15％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为85％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为1mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮，纯度为51.6％。实施例3一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：a、将鹰嘴豆筛选清洗，用水浸泡2h，在10℃下发芽处理5天，分离出胚芽，在40℃烘干，粉碎，加入20质量倍的体积浓度为85％的乙醇水溶液，混合，在超声功率500W条件下，超声10min，在超声10min中采用超声10s，间歇5s进行，在水浴温度60℃，加热2h提取，分离，提取3次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；b、将粗提液装入型号为DM301大孔树脂柱，静置1h，先用体积浓度为10％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为60％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为1mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮，纯度为47.3％。实施例4一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，包括如下步骤：a、将鹰嘴豆筛选清洗，用水浸泡2h，在20℃下发芽处理3天，分离出胚芽，在50℃烘干，粉碎，加入50质量倍的体积浓度为55％的乙醇水溶液，混合，在超声功率200W条件下，超声30min，在超声30min中采用超声10s，间歇5s进行，在水浴温度80℃，加热1h提取，分离，提取1次，提取液过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；b、将粗提液装入型号D101为大孔树脂柱，静置3h，先用体积浓度为20％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为90％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为2mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮，纯度为42.4％。实验证明，型号为HP-100、XAD-2或HP-20的大孔树脂替代本实施例的型号为D101大孔树脂，其它同本实施例，制备出纯度相似的黄色粉末鹰嘴豆异黄酮。用HPLC进行检测各实施例产物中鹰嘴豆芽素A、刺芒柄花素和大豆苷元的含量。表1鹰嘴豆中主要异黄酮的含量实施例1实施例2实施例3实施例4大豆苷元(mg/g)14.91±0.0212.56±0.038.59±0.117.32±0.16刺芒柄花素(mg/g)239.05±34.2201.48±12.5151.2±18.7138.5±22.3鹰嘴豆芽素A(mg/g)19.38±0.0417.68±0.0711.3±0.0910.3±0.05本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，其特征是包括如下步骤：a、将鹰嘴豆用水浸泡，在10～20℃下发芽处理3～5天，分离出胚芽，在40～50℃烘干，粉碎，加入20～50质量倍的体积浓度为55％～85％的乙醇水溶液，混合，在超声功率200～500W条件下，超声10～30min，在水浴温度60～80℃，加热1～2h提取，分离，提取1～6次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；b、将粗提液装入大孔树脂柱，静置1‑3h，先用体积浓度为10％～20％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为60％～90％乙醇水溶液洗脱，洗脱流速为0.5‑2mL/min收集洗脱液，旋转蒸发，除尽乙醇，得到浓缩液；真空冷冻干燥，得到黄色粉末鹰嘴豆异黄酮。

【技术特征摘要】
1.一种鹰嘴豆异黄酮分离纯化方法，其特征是包括如下步骤：a、将鹰嘴豆用水浸泡，在10～20℃下发芽处理3～5天，分离出胚芽，在40～50℃烘干，粉碎，加入20～50质量倍的体积浓度为55％～85％的乙醇水溶液，混合，在超声功率200～500W条件下，超声10～30min，在水浴温度60～80℃，加热1～2h提取，分离，提取1～6次，合并提取液并过滤，滤液旋转除尽乙醇，得到粗提液；b、将粗提液装入大孔树脂柱，静置1-3h，先用体积浓度为10％～20％的乙醇水溶液洗去杂质，再用体积浓度为60％～90％乙醇水溶液洗脱，...

【专利技术属性】
技术研发人员：薛照辉，温海超，刘畅，寇晓虹，
申请(专利权)人：天津大学，
类型：发明
国别省市：天津;12