一种促细胞程序性坏死抗体及其应用制造技术

本发明专利技术提供了一种促细胞坏死的抗体，该抗体在TNF存在下，会使细胞发生程序性坏死。因此，所述抗体的抑制剂可用于治疗炎性疾病。进一步地，本发明专利技术提供所述促细胞坏死抗体在炎性疾病预后中的应用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医药领域；具体地说，本专利技术涉及一种抗-TNF单克隆抗体及其在炎症治疗中的应用。
技术介绍
肿瘤坏死因子α(TNF)是由各种细胞，主要是巨噬细胞和T细胞分泌的多功能细胞因子。TNF通过TNF受体1和2(TNFR1和TNFR2)行使多种生物学功能，其中TNFR2仅仅在免疫细胞中起到支持TNFR1的作用(1-3)。许多TNF功能主要涉及三种胞内事件：1)刺激转录因子核因子kappaB(NF-κB)，从而导致细胞激活和细胞因子产生；2)诱导细胞凋亡的外部途径；和3)诱导坏死。这些活性的胞内信号传导途径共有一些组分但导致不同的结果：NF-κB激活导致促炎细胞因子分泌和细胞存活及激活；凋亡是细胞死亡的状态，特征在于胱冬酶-3激活、核断裂、在早期含有完整的细胞膜、炎性反应很少或没有；然而，坏死是细胞死亡的另一机制，其中没有胱冬酶-3的激活，细胞膜的完整性受损。坏死导致刺激强烈免疫和炎性反应的胞内物质释放(4,5)。在凋亡条件下，抑制胱冬酶可导致一种程序性细胞死亡形式，其发生时具备坏死的特征，称为“程序性坏死”(6-11)。由于此类程序性坏死是炎性过程，因此在临床上可能与诸如类风湿性关节炎、克罗恩病和银屑病等疾病相关。然而，迄今为止，尚未鉴定到触发这些疾病中程序性坏死的因子。通过直接靶向TNF分子(单克隆抗体)或用作假受体的拮抗剂来中和TNF使得炎性疾病的治疗得到根本性变革(12)，但完全阻断TNF功能可能导致威胁生命的副作用，例如感染和肿瘤(13)。TNF在很多炎症性疾病(例如风湿性关节炎、炎性肠炎、牛皮癣等等)中都起很重要的病理作用。临床上用抗TNF治疗炎症性疾病非常有效。抗TNF的生物制剂包括：能够中和TNF的抗TNF的单克隆抗体，游离的TNF受体等等。抗TNF制剂的市场是每年150亿美元。虽然有以上成果，但炎性疾病中细胞和组织破坏的机制仍未知：诱导NF-κB是促生存的，不直接导致细胞死亡-实际上，发现NF-κB信号在炎性肠病中阻止凋亡(14)。据信，凋亡是抑制炎症的(15)。程序性坏死可能是炎症和细胞/组织破坏的可能机制，但缺乏人临床相关性的证据。例如，在非病毒炎性致病机理中，不知道靶细胞外的何种因子触发程序性坏死(14,16)。显然，鉴定这些因子为诊断和治疗许多炎性疾病提供了生物标志物。在脓毒症病人中，TNF显著升高并且与病情严重程度呈正相关。然而传统的TNF阻断型抗体和游离的受体均不能有效治疗脓毒症，暗示有其他因素或因子在致病过程中协同TNF起关键作用。因此，本领域急需调控、甚至逆转细胞坏死的物质手段，从而能治疗炎性疾病。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供调控、甚至逆转细胞坏死的物质手段，从而能治疗炎性疾病。在第一方面，本专利技术提供一种抗体的轻链可变区，所述轻链可变区具有选自下组的互补决定区CDR：SEQIDNO:1所示的CDR1，SEQIDNO:3所示的CDR2，和SEQIDNO:5所示的CDR3。在优选的实施方式中，所述的轻链可变区具有SEQIDNO:7所示的氨基酸序列。在第二方面，本专利技术提供一种抗体的轻链，所述的轻链具有本专利技术第一方面所述的轻链可变区和轻链恒定区。在优选的实施方式中，所述轻链的恒定区如SEQIDNO:9所示。在优选的实施方式中，所述轻链的氨基酸序列如SEQIDNO:10所示。在优选的实施方式中，所述轻链的编码多核苷酸序列如SEQIDNO:11所示。在第三方面，本专利技术提供一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO:12所示的CDR1，SEQIDNO:14所示的CDR2，和SEQIDNO:16所示的CDR3。在优选的实施方式中，所述重链可变区具有SEQIDNO:18所示的氨基酸序列。在第四方面，本专利技术提供一种抗体的重链，所述的重链具有本专利技术第三方面所述的重链可变区和重链恒定区。在优选的实施方式中，所述的重链恒定区如SEQIDNO:20所示。在优选的实施方式中，所述重链的氨基酸序列如SEQIDNO:21所示。在优选的实施方式中，所述重链的编码多核苷酸序列如SEQIDNO:22所示。在第五方面，本专利技术提供一种抗体，所述抗体具有：(1)本专利技术第一方面所述的轻链可变区；和/或(2)本专利技术第三方面所述的重链可变区。在优选的实施方式中，所述抗体具有：本专利技术第二方面所述的轻链；和/或本专利技术第四方面所述的重链。在第六方面，本专利技术提供一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：(i)本专利技术第一方面所述的轻链可变区的序列、本专利技术第二方面所述的轻链的序列、本专利技术第三方面所述的重链可变区的序列、本专利技术第四方面所述的重链的序列、或本专利技术第五方面所述的抗体的序列；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。在优选的实施方式中，所述的标签序列包括6His标签。在第七方面，本专利技术提供一种抗体，所述抗体特异性结合序列QLVVPSE。在第八方面，本专利技术提供一种多核苷酸，它编码选自下组的多肽：(1)本专利技术第一方面所述的轻链可变区的序列、本专利技术第二方面所述的轻链的序列、本专利技术第三方面所述的重链可变区的序列、本专利技术第四方面所述的重链的序列、或本专利技术第五方面或第七方面所述的抗体的序列；或(2)本专利技术第六方面所述的重组蛋白。在第九方面，本专利技术提供一种载体，含有本专利技术第八方面所述的多核苷酸。在优选的实施方式中，所述的载体包括：细菌质粒、噬菌体、酵母质粒、植物细胞病毒、哺乳动物细胞病毒如腺病毒、逆转录病毒、或其他载体。在第十方面，本专利技术提供一种遗传工程化的宿主细胞，它含有本专利技术第九方面所述的载体或基因组中整合有本专利技术第八方面所述的多核苷酸。在第十一方面，本专利技术提供一种药物组合物，它含有：(i)本专利技术第一方面所述的轻链可变区、本专利技术第二方面所述的轻链、本专利技术第三方面所述的重链可变区、本专利技术第四方面所述的重链、本专利技术第五方面或第七方面所述的抗体、本专利技术第六方面所述的重组蛋白；以及(ii)任选的药学上可接受的载体。在优选的实施方式中，所述的药物组合物为注射剂型。在优选的实施方式中，所述的药物组合物用于制备治疗肿瘤、细菌或病毒感染的药物。在第十二方面，本专利技术提供一种促细胞坏死抗体抑制剂，其特征在于，所述促细胞坏死抗体抑制剂能够结合本专利技术第五方面或第七方面所述的抗体。在优选的实施方式中，所述促细胞坏死抗体抑制剂是突变型TNF，与野生型TNF相比，所述突变型TNF能够结合本专利技术第五方面或第七方面所述的抗体，但不结合TNF受体。在优选的实施方式中，所述突变型TNF如SEQIDNO:23所示。在第十三方面，本专利技术提供本专利技术第十一方面所述的促细胞坏死抗体抑制剂在制备治疗炎性疾病的药物中的用途。在优选的实施方式中，所述炎性疾病包括类风湿性关节炎、克罗恩病、银屑病、脓毒症。在第十四方面，本专利技术提供QLVVPSE所示片段或本专利技术第五方面或第七方面所述抗体在制备诊断炎性疾病或对炎性疾病患者进行分型的检测试剂中的用途。在优选的实施方式中，所述用途是对患者进行分型。在第十五方面，本专利技术提供一种诊断炎性疾病或对炎性疾病患者进行分型的检测试剂盒，其装有：a.作为标准品的QLVVPSE所示片段或本专利技术第五方面或第七方面所述抗体；和b.以QLVVPSE所示片段或本专利技术第五方面或第七方面所述抗体作为标准品检测本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抗体的轻链可变区，所述轻链可变区具有选自下组的互补决定区CDR：SEQ ID NO:1所示的CDR1，SEQ ID NO:3所示的CDR2，和SEQ ID NO:5所示的CDR3。

【技术特征摘要】
1.一种抗体的轻链可变区，所述轻链可变区具有选自下组的互补决定区CDR：SEQIDNO:1所示的CDR1，SEQIDNO:3所示的CDR2，和SEQIDNO:5所示的CDR3。2.一种抗体的轻链，所述的轻链具有权利要求1所述的轻链可变区和轻链恒定区。3.一种抗体的重链可变区，所述的重链可变区包括以下三个互补决定区CDR：SEQIDNO:12所示的CDR1，SEQIDNO:14所示的CDR2，和SEQIDNO:16所示的CDR3。4.一种抗体的重链，所述的重链具有权利要求3所述的重链可变区和重链恒定区。5.一种抗体，所述抗体具有：(1)权利要求1所述的轻链可变区；和/或(2)权利要求3所述的重链可变区。6.一种重组蛋白，所述的重组蛋白具有：(i)权利要求1所述的轻链可变区的序列、权利要求2所述的轻链的序列、权利要求3所述的重链可变区的序列、权利要求4所述的重链的序列、或权利要求5所述的抗体的序列；以及(ii)任选的协助表达和/或纯化的标签序列。7.一种抗体，所述抗体特异性结合序列QLVVPSE。8.一种多核苷酸，它编码选自下组的多肽：(1)权利要求1所述的轻链可变区的序列、权利要求2所述的轻链的序列、权利要求3所述的重链可变区的序列、权利要求4所述的重...

【专利技术属性】
技术研发人员：姜石松，逯文姝，
申请(专利权)人：姜石松，逯文姝，
类型：发明
国别省市：北京;11