一种防治金桔黄龙病的微生物菌剂及其制备方法技术

本发明专利技术提供了一种防治金桔黄龙病的微生物菌剂及其制备方法。具体是提供一种防治包含金桔，沙甜桔，柑橘黄龙病的微生物菌剂及其制备方法；本发明专利技术所提供的微生物菌剂是由古腊科链霉菌，卡伍尔链霉菌，冷解糖芽孢杆菌，尼氏芽孢杆菌，毛簇木霉等菌发酵后按比例混合而成。本发明专利技术通过从根部灌根和叶面喷雾方式抑制革兰氏阴性细菌的生殖繁衍，“以菌治菌”，杀灭土壤有害病菌，让树木根系更加发达，树木细胞管状通畅，使果树黄叶转绿、健康新稍生长，另一方面该微生物菌剂产生黄质霉素等杀虫抗生素，抑制或破坏线木虱和其它传病昆虫（如橘蚜）虫卵的发育过程，从而减少其成虫率，减少果园害虫发生量，切断黄龙病的传播媒介，达到防控柑橘黄龙病的作用。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及微生物应用
，具体而言，涉及一种防控金桔，沙甜桔，柑橘黄龙病的微生物菌剂及其制备方法。
技术介绍
柑橘（包含金桔，沙甜桔，普通柑橘）是世界产量最多的水果，在我国已经有4000多年的栽培历史。2009年我国柑橘栽培面积和产量均超过巴西、美国，位居世界首位，但在柑橘产业迅速发展的同时，黄龙病已成为柑橘生产上危害最为严重的毁灭性病害。早在18世纪中叶，印度就有相关报道。Reinking于19世纪20年代对我国华南地区进行首次报道，半个多世纪以来，柑橘黄龙病严重制约了广东、广西、福建3省区柑橘产业的发展。20世纪70年代末，四川省西昌地区和渡口市、江西赣州地区以及云南省得部分地区也先后发现柑橘黄龙病，到20世纪80年代中期，柑橘黄龙病已在我国广东、广西、福建、海南和台湾的柑橘产区广泛蔓延，并在浙江、贵州、湖南相继发生，我国柑橘栽培的19个省、区已有11个遭受危害，受害面积占柑橘总栽培面积的80%以上，产量占总产量的85%左右。2004年巴西圣保罗州和2005年美国佛罗里达州黄龙病相继发生，造成柑橘从业者的恐慌。迄今，黄龙病已广泛分布于亚洲、非洲、大洋洲、南美洲和北美洲的40多个国家。黄龙病又名黄梢病、黄枯病、青果病，是柑橘的重要病害，为国际、国内检疫对象。我国的17个柑橘产区中有11个产区收到黄龙病的胁迫，且作为柑橘主要产区的广东、广西、福建、云南、海南等地尤为严重。发病柑橘植株的典型症状是“黄梢”、叶片斑驳黄化、果实变小、形成无价值的“青果”或“红鼻子果”，发病后期根系坏死，树势衰退，导致落叶、落果、植株死亡等。当病害严重流行时，往往使大片橘园在几年内全部毁灭，对柑橘生产威胁极大。黄龙病的病原是寄生于韧皮部的革兰氏阴性细菌，能够在树皮组织、叶、花、根和果实中检测到。革兰氏阴性细菌传播途径广，非常难以被杀死。果树一旦感染这一病菌，为了避免其他果树被感染，控制黄龙病的传播和蔓延，人们只能挖除或砍除病树，损失巨大。因此，在果树的日常管理中，做好柑橘黄龙病的防控工作成为重中之重。目前，针对柑橘黄龙病的防控手段主要是有两方面：一是从根源上切断病菌的输入，主要是在苗木上把关，加强苗木繁育管理，及时排除病苗，选用无病苗木种植和接穗。二从切断病菌的传播媒介，主要采用化学、物理的方法防治木虱。可见，现有技术中对于柑橘黄龙病的传播媒介关注的比较少，主要还是在防治木虱上，而未见对其它传播媒介的防控手段。侯期任等在专利号2015104457788中公开了一种防控柑橘黄龙病的微生物肥料及其制备方法。所提供的微生物肥料包括以下组分：淡紫拟青霉、地衣芽胞杆菌、木霉菌和有机质;所述微生物肥料中，所述淡紫拟青霉的活菌含量不低于0.2亿/克，所述地衣芽抱杆菌的活菌含量不低于0.1亿/克，所述木霉菌的活菌含量不低于0.05亿/克。本专利技术中，淡紫拟青霉、地衣芽抱杆菌、木霉菌三种菌种共同作用，抑制或破坏线虫卵的发育过程，从而减少线虫成虫率，减少果园线虫基础发生量，切断黄龙病的传播媒介，达到防控柑橘黄龙病的作用。主要还是一种生物有机菌肥，菌体含量低，用量大，使用不方便。梁小文等在专利2016100006863中公开了一种微生物复合菌及其制备方法和其在防治柑橘黄龙病方面的应用。所述的微生物复合菌，包括克里本类芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌，所述克里本类芽孢杆菌的生物保藏编号为CGMCCN0.7996，微生物复合菌具体的可为微生物复合菌液或微生物复合菌剂，可以抑制病原菌，但没有杀虫的功能，无法切断黄龙病的传播媒介，达到防控柑橘黄龙病的作用。
技术实现思路
本专利技术的第一目的在于提供一种既能能杀虫又能抑菌，还具有根迹促生作用的防治金桔黄龙病的微生物菌剂。该微生物菌剂的原料配比为：古腊科链霉菌发酵液10-30份，卡伍尔链霉菌发酵液20-40份，冷解糖芽孢杆菌发酵液10-30份，尼氏芽孢杆菌发酵液10-30份，毛簇木霉发酵液10-30份。在所述微生物菌剂中，古腊科链霉菌，卡伍尔链霉菌，冷解糖芽孢杆菌，尼氏芽孢杆菌和毛簇木霉五种菌是从500多株微生物菌株中筛选得到的能共生共存，能产生多种抑制木虱和其它传病昆虫（如橘蚜）虫卵的发育过程的抗生素如卡伍尔链霉菌产生黄质霉素，一种杀虫的抗生素，从而减少其成虫率，减少果园害虫基础发生量，切断黄龙病的传播媒介，达到防控柑橘黄龙病的作用；另一方面，能产生多种拮抗革兰氏阴性细菌的抗菌素如古腊科链霉菌产生古腊霉素，一种抗革兰氏阴性细菌的抗菌素，能较好的抑制住黄龙病的病原菌。本专利技术的第二目的在于提供一种所述的微生物防治金桔黄龙病的微生物菌剂的制备方法，该方法步骤简单，确保微生物菌剂的药效突出。另外，所使用的这5株菌株都是可从土壤中直接分离得到，都具有根迹促生作用。为了实现本专利技术的上述目的，特采用以下技术方案：一种防治金桔黄龙病的微生物菌剂的制备方法，包括以下步骤：步骤一：古腊科链霉菌发酵液的制备取出古腊科链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为古腊科链霉菌种子液；发酵：将上述制备的古腊科链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的古腊科链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-32℃，开搅拌200r/min，前24小时，通气量为每分钟为200L空气，24-36小时，通气量为400L，36小时后，通气量为600L，培养40-48小时，待菌体含量达到60g/L，即可停罐，即得到古腊科链霉菌发酵液；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0.5克，氯化钠：0.5克，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的古腊科链霉菌发酵培养基：豆粕2%，玉米淀粉2%，石粉1%，大豆糖蜜2%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.01%，硫酸镁0.05%，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟。步骤二：卡伍尔链霉菌发酵液的制备取出卡伍尔链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天。在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为卡伍尔链霉菌种子液；发酵：将上述制备的卡伍尔链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的卡伍尔链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-30℃，前18小时，通气量为每分钟为300L空气，18-32小时，通气量为500L，32小时后，通气量为700L，开搅拌200r/min，培养40-48小时，待菌体含量达到80g/L，即可停罐，即得到卡伍尔链霉菌发酵液；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0.5克，氯化钠：0.5克，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种防治金桔黄龙病的微生物菌剂，其特征在于，该微生物菌剂的原料配比为：古腊科链霉菌发酵液10‑30份，卡伍尔链霉菌发酵液20‑40份，冷解糖芽孢杆菌发酵液10‑30份，尼氏芽孢杆菌发酵液10‑30份，毛簇木霉发酵液10‑30份。

【技术特征摘要】
1.一种防治金桔黄龙病的微生物菌剂，其特征在于，该微生物菌剂的原料配比为：古腊科链霉菌发酵液10-30份，卡伍尔链霉菌发酵液20-40份，冷解糖芽孢杆菌发酵液10-30份，尼氏芽孢杆菌发酵液10-30份，毛簇木霉发酵液10-30份。2.根据权利要求1所述的一种防治金桔黄龙病的微生物菌剂，其特征在于，其制备方法，包括以下步骤：步骤一：古腊科链霉菌发酵液的制备取出古腊科链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为古腊科链霉菌种子液；发酵：将上述制备的古腊科链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的古腊科链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-32℃，开搅拌200r/min，前24小时，通气量为每分钟为200L空气，24-36小时，通气量为400L，36小时后，通气量为600L，培养40-48小时，待菌体含量达到60g/L，即可停罐，即得到古腊科链霉菌发酵液；其中，所述的高氏一号固体培养基：硝酸钾：1克，可溶性淀粉：20克，磷酸氢二钾：0﹒5克，硫酸镁：0.5克，氯化钠：0.5克，硫酸亚铁：0.01克，琼脂：20克，蒸馏水补足1000ml，PH7.2～7.4；其中，所述的古腊科链霉菌发酵培养基：豆粕2%，玉米淀粉2%，石粉1%，大豆糖蜜2%，硫酸锰0.004%，磷酸氢二钾0.01%，硫酸镁0.05%，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤二：卡伍尔链霉菌发酵液的制备取出卡伍尔链霉菌菌种保藏管，用高氏一号固体培养基划平板进行复苏，30℃培养7天，在平板下挑取单个菌落划线接种装有150毫升高氏一号固体培养基的茄子瓶中，在培养箱中30℃培养6-8天，待菌苔长满茄子瓶，产生大量孢子粉即可用500毫升的无菌生理盐水洗脱，调节孢子浓度为0.1亿cfu/ml，即为卡伍尔链霉菌种子液；发酵：将上述制备的卡伍尔链霉菌种子液以1%的接种量接种至装有灭菌的600L的卡伍尔链霉菌发酵培养基的1000L发酵罐中，控温28-30℃，前18小时，通气量为每分钟为300L空气，18-32小时，通气量为500L，32小时后，通气量为700L，开搅拌200r/min，培养40-48小时，待菌体含量达到80g/L，即可停罐，即得到卡伍尔链霉菌发酵液；其中，所述的高氏一号固体培养基与步骤一中的高氏一号固体培养基相同；其中，所述的卡伍尔链霉菌发酵培养基：豆粕3%，棉粕1%，玉米淀粉2%，石粉1%，大豆糖蜜3%，硫酸锰0.002%，磷酸氢二钾0.01%，硫酸镁0.02%，各培养基灭菌的条件为：0.10-0.15MPa，121℃灭菌30分钟；步骤三，冷解糖芽孢杆菌发酵液的制备取出冷解糖芽孢杆菌保藏管，用LB固体培养基分别划平板进行复苏，30℃培养48小时，在平板下挑取单个菌落接种至装有LB固体培养基，在30℃培养箱中培养48小时，用3000ml无菌水将三个茄子瓶中的菌苔洗脱，接种至装有300L冷解糖芽孢杆菌发酵培养基的500L发酵罐中，开搅拌120r/min，前12小时通气量为200L/min，12小时后通气量为320L/min，30℃培养26-36小时，待总芽孢含量不低于60亿cfu/ml，即可作为冷解糖芽孢杆菌发酵液；其中，所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：蒋常德，胡艳晖，
申请(专利权)人：佛山市艳晖生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44