基于响应面法优化当归多糖提取工艺参数的方法技术

开了一种基于响应面法优化当归多糖提取工艺参数的方法，用于甘肃产的“岷归3号”当归多糖的提取工艺，它包括药材除杂，水提醇沉法提取当归多糖，计算出当归药材中多糖的提取率等步骤，本发明专利技术采用响应面法确定当归多糖提取的变量参数，选取对当归多糖得率又较显著影响的三个因素，在单因素实验基础上，设计三因素五水平的响应面分析实验，进而确定出当归多糖的最佳提取工艺条件为提取时间120min，所加入水的体积与当归药材的质量的液料比7∶1ml/g，滤液中乙醇的质量浓度65%，在此条件下按照上述方法所述的步骤提取多糖，测定多糖含量计算得率为8.54645%。与理论预测值相差0.12379%，充分说明响应面分析法对当归多糖提取条件进行的优化可靠，有实用性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物成分提取
，具体的说是一种基于响应面法优化当归多糖提取工艺参数的方法，用于甘肃产的“岷归3号”当归多糖的提取工艺。
技术介绍
当归为伞形科植物当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，性温味辛、甘，归肝、心、脾经，具有补血活血、调经止痛、润肠通便等功效。当归中含有挥发油类藁本内酯及正丁烯基酜内酯、苯丙素类阿魏酸、多糖类等。其中当归多糖为当归的主要水溶性成分，经现代药理试验研究发现其具有增强机体免疫力、抗辐射、补血、抗氧化、抗病毒、镇痛、止血、抗肿瘤等作用。“岷归3号”是应用重离子辐照生物育种技术选育出的当归新品种，目前对其内在品质研究较少。水提醇沉法的基本原理是，利用药材等植物中的大多数成分如生物碱盐、甙类、有机酸类、氨基酸、多糖等易溶于水和醇中的特性，用水提出，并将其提取液浓缩，加入适当的乙醇或水反复数次沉降，除去其不溶物质，最后得到澄明液体。响应面法(ResponseSurfaceMethodology，RSM)是试验设计、数理统计和最优化技术的一种综合应用，是数学方法与统计方法结合的产物，用于对所感兴趣的响应受多个变量影响的问题进行建模及分析，其最终目的是优化该响应值。与正交设计分析法和均匀设计分析法相比较，响应面分析法在试验设计和结果表达方面更加优良。
技术实现思路
本专利技术的目的是在单因素实验的基础上，利用响应面分析法对“岷归3号”多糖提取工艺条件进行优化，为“岷归3号”品质的综合评价和开发利用提供参考依据。为实现上述目的，本专利技术所采取的技术方案为：一种基于响应面法优化当归多糖提取工艺参数的方法，本方法所述当归为利用重离子辐照生物育种技术选育出的当归新品种“岷归3号”，为当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，其特征在于：它包括以下步骤：步骤一、药材除杂，称取适量当归药材粉碎，用粒度为50目的筛子筛选后称取10.0g药材粉末放置于容量为250mL的圆底烧瓶中，加入80mL石油醚于75℃水浴中加热回流1h，抽滤，弃去滤液，将滤渣收集到容积为250mL的圆底烧瓶中，加入质量浓度为85%的乙醇溶液60ml，回流2h，抽滤，弃滤液，收集滤渣，当归药材中脂溶性杂质被除去；步骤二、水提醇沉法提取当归多糖，采用响应面法确定当归多糖提取的变量参数，设置三因素五水平的试验方式进行重复试验获得实验结果，计算出当归多糖得率，再采用DesignExpert7.0.0软件进行多元回归分析，得出试验因素对响应值影响的回归方程为：上式中响应值Y为当归多糖的提取率，变量参数X1为醇沉法提取时间、变量参数X2为所加入水的体积与当归药材的质量的液料比、变量参数X3为加入乙醇后滤液中乙醇的质量浓度，最终确定X1为2h，X2为7ml/g，X3为66%；按照所述的变量参数，在步骤一所制备的滤渣中加入200ml蒸馏水于80℃水浴中加热回流提取2次，每次提取时间为1h，得到滤液，在滤液中加入质量浓度为80%的乙醇，测量滤液中乙醇的质量浓度达到66%后沉淀12-24小时后，滤除上清液，将滤渣进行离心分离后，在滤渣中加入水进行溶解，所加入水的体积与当归药材的质量比为7ml/g，在溶液中再加入氯仿与正丁醇的混合液除去溶液中的蛋白，得到当归粗多糖；步骤三、将步骤二所制得的当归粗多糖用蒸馏水定容至100mL容量瓶中制得粗多糖溶液，再取1.6mL粗多糖溶液定容到100mL容量瓶中，用作标准曲线的方法测吸光度，计算出当归药材中多糖的提取率。其中多糖得率的计算公式为：多糖得率（%）=（粗多糖质量/药材质量）×100优选的，所述步骤二中氯仿与正丁醇的混合液中氯仿与正丁醇的体积比为4:1。优选的，所述步骤二中滤渣进行离心分离时，离心机的转速为4000-5000转/min。优选的，所述多糖含量测定标准曲线的制定，包括以下步骤：（1）称取100.00mg蒽酮用质量百分比浓度为76%的稀硫酸定容到容积为100ml容量瓶中备用；（2）称取105℃干燥至质量恒定的葡萄糖50.00mg，加蒸馏水定容于容积为50mL的容量瓶中，配成质量体积浓度为1mg/ml的标准葡萄糖溶液备用；（3）分别吸取标准葡萄糖溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL置于容积为50mL的容量瓶中，加蒸馏水定容摇匀，再分别吸取各不同质量浓度的葡萄糖溶液1mL，均加入配制好的5mL蒽酮试液，立即放入冰水浴中摇匀后，置沸水浴中煮12min，取出用水冲洗2.5min冷却，静置10min后放置于波长624nm处测定吸光度，以蒸馏水1.0mL作空白对照；（4）以葡萄糖质量浓度为横坐标x、吸光度为纵坐标y做回归处理，得回归方程y=8.2286x-0.0133，R2=0.9983，线性范围20～120μg/ml，绘制成多糖含量测定标准曲线。本专利技术的有益效果为：本专利技术采用响应面法确定当归多糖提取的变量参数，选取对当归多糖得率又较显著影响的三个因素，即醇沉法提取时间、所加入水的体积与当归药材的质量的液料比、滤液中乙醇的质量浓度，在单因素实验基础上，设计三因素五水平的响应面分析实验，进而确定出当归多糖的最佳提取工艺条件。附图说明图1是不同滤液中乙醇的质量浓度与多糖得率关系示意图；图2是不同所加入水的体积与当归药材质量的液料比与多糖得率关系示意图；图3是不同提取时间与多糖得率关系示意图；图4是提取时间和所加入水的体积与当归药材的质量的液料比对多糖得率影响的交互作用的示意图；图5是提取时间和滤液中乙醇的质量浓度对多糖得率影响的交互作用的示意图；图6是所加入水的体积与当归药材的质量的液料比和滤液中乙醇的质量浓度对多糖得率影响的交互作用的示意图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作进一步详细的说明。一种基于响应面法优化当归多糖提取工艺参数的方法，本方法所述当归为利用重离子辐照生物育种技术选育出的当归新品种“岷归3号”，为当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，其特征在于：它包括以下步骤：步骤一、药材除杂，称取适量当归药材粉碎，用粒度为50目的筛子筛选后称取10.0g药材粉末放置于容量为250mL的圆底烧瓶中，加入80mL石油醚于75℃水浴中加热回流1h，抽滤，弃去滤液，将滤渣收集到容积为250mL的圆底烧瓶中，加入质量浓度为85%的乙醇溶液60ml，回流2h，抽滤，弃滤液，收集滤渣，当归药材中脂溶性杂质被除去；步骤二、水提醇沉法提取当归多糖，采用响应面法确定当归多糖提取的变量参数，设置三因素五水平的试验方式进行重复试验获得实验结果，计算出当归多糖得率，再采用DesignExpert7.0.0软件进行多元回归分析，得出试验因素对响应值影响的回归方程为：式中响应值Y为当归多糖的提取率，变量参数X1为醇沉法提取时间、变量参数X2为所加入水的体积与当归药材的质量的液料比、变量参数X3为加入乙醇后滤液中乙醇的质量浓度，最终确定X1为2h，X2为7ml/g，X3为66%；按照所述的变量参数，在步骤一所制备的滤渣中加入200ml蒸馏水于80℃水浴中加热回流提取2次，每次提取时间为1h，得到滤液，在滤液中加入质量浓度为80%的乙醇，测量滤液中乙醇的质量浓度达到66%后沉淀12-24小时后，滤除上清液本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种基于响应面法优化当归多糖提取工艺参数的方法，本方法所述当归为利用重离子辐照生物育种技术选育出的当归新品种“岷归3号”，为当归Angelica sinensis (Oliv.)Diels的干燥根，其特征在于：它包括以下步骤：步骤一、药材除杂，称取适量当归药材粉碎，用粒度为50目的筛子筛选后称取10.0g药材粉末放置于容量为250mL的圆底烧瓶中，加入80mL石油醚于75℃水浴中加热回流1h，抽滤，弃去滤液，将滤渣收集到容积为250mL的圆底烧瓶中，加入质量浓度为85%的乙醇溶液60ml，回流2h，抽滤，弃滤液，收集滤渣，当归药材中脂溶性杂质被除去；步骤二、水提醇沉法提取当归多糖，采用响应面法确定当归多糖提取的变量参数，设置三因素五水平的试验方式进行重复试验获得实验结果，计算出当归多糖得率，再采用Design Expert 7.0.0软件进行多元回归分析，得出试验因素对响应值影响的回归方程为：式中响应值Y为当归多糖的提取率，变量参数X1为醇沉法提取时间、变量参数X2为所加入水的体积与当归药材质量的液料比、变量参数X3为加入乙醇后滤液中乙醇的质量浓度，最终确定X1为2h，X2为7ml/g，X3为66%；按照所述的变量参数，在步骤一所制备的滤渣中加入200ml蒸馏水于80℃水浴中加热回流提取2次，每次提取时间为1h，得到滤液，在滤液中加入质量浓度为80%的乙醇，测量滤液中乙醇的质量浓度达到66%后沉淀12‑24小时后，滤除上清液，将滤渣进行离心分离后，在滤渣中加入水进行溶解，所加入水的体积与当归药材的质量比为7ml/g，在溶液中再加入氯仿与正丁醇的混合液除去溶液中的蛋白，得到当归粗多糖；步骤三、将步骤二所制得的当归粗多糖用蒸馏水定容至100mL容量瓶中制得粗多糖溶液，再取1.6mL粗多糖溶液定容到100mL容量瓶中，用作标准曲线的方法测吸光度，计算出当归药材中多糖的提取率。...

【技术特征摘要】
1.一种基于响应面法优化当归多糖提取工艺参数的方法，本方法所述当归为利用重离子辐照生物育种技术选育出的当归新品种“岷归3号”，为当归Angelicasinensis(Oliv.)Diels的干燥根，其特征在于：它包括以下步骤：步骤一、药材除杂，称取适量当归药材粉碎，用粒度为50目的筛子筛选后称取10.0g药材粉末放置于容量为250mL的圆底烧瓶中，加入80mL石油醚于75℃水浴中加热回流1h，抽滤，弃去滤液，将滤渣收集到容积为250mL的圆底烧瓶中，加入质量浓度为85%的乙醇溶液60ml，回流2h，抽滤，弃滤液，收集滤渣，当归药材中脂溶性杂质被除去；步骤二、水提醇沉法提取当归多糖，采用响应面法确定当归多糖提取的变量参数，设置三因素五水平的试验方式进行重复试验获得实验结果，计算出当归多糖得率，再采用DesignExpert7.0.0软件进行多元回归分析，得出试验因素对响应值影响的回归方程为：式中响应值Y为当归多糖的提取率，变量参数X1为醇沉法提取时间、变量参数X2为所加入水的体积与当归药材质量的液料比、变量参数X3为加入乙醇后滤液中乙醇的质量浓度，最终确定X1为2h，X2为7ml/g，X3为66%；按照所述的变量参数，在步骤一所制备的滤渣中加入200ml蒸馏水于80℃水浴中加热回流提取2次，每次提取时间为1h，得到滤液，在滤液中加入质量浓度为80%的乙醇，测量滤液中乙醇的质量浓度达到66%后沉淀12-24小时后，滤除上清液，将滤渣进行离心分离后，在滤渣中加入水进行溶解，所加入水的体积与当归药材的质量比为7ml/g，在溶液中再加入氯仿与正丁醇的混合液除去溶液中的蛋白，得到当归粗多糖；步...

【专利技术属性】
技术研发人员：赵翊，李硕，张艳，
申请(专利权)人：甘肃中医药大学，
类型：发明
国别省市：甘肃;62