一种非洲菊的开放式组织培养方法技术

本发明专利技术属于植物组织培养领域，提供一种非洲菊的开放式组织培养方法，利用次氯酸钠的抑菌作用，通过在非洲菊组织培养培养基中添加次氯酸钠，达到抑制非洲菊组织培养过程中真菌细菌的增长繁殖，从而实现非洲菊在有菌条件下的增殖及生根培养。该方法具有操作简单、省时省力、大大降低成本等优点，本发明专利技术提供了一种快速高效的新技术手段，为非洲菊工厂化育苗技术的发展奠定了重要基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于植物组织培养领域，涉及一种非洲菊的开放式组织培养方法。
技术介绍
非洲菊（GerberajamesoniiBolus），菊科大丁草属，又名扶郎花，为多年生宿根草本观赏花卉。是世界五大鲜切花之一，供插花以及制作花篮，也可作盆栽观赏。近年来，非洲菊常规用分株繁殖，繁殖速度慢，并且一直用分株繁殖，品种退化严重；非洲菊种子寿命极短，而且采用种子繁殖，开花迟。因此，为满足旺盛的非洲菊市场需求，都利用组织培养技术生产种苗，其能在很大程度上克服传统的种子繁殖和分株繁殖增殖慢的不足。非洲菊组织培养虽能在短期内提供数量庞大的种苗，但当组培生产步入商品化规模生产后，其生产的高成本问题日益突现。而通过开放式组培可以大大降低组培成本从而实现高效益的规模化商品生产。相对传统组织培养，开放式组织培养无需无菌操作接种和无菌环境培养，只需在培养基中添加了安全高效抗菌剂，可在有菌环境条件下接种、培养，省去了投资比例较大的高压灭菌锅和超净工作台。目前，开放式组织培养已在几十种植物上获得了成功，但非洲菊开放式组织培养目前还未见报道。此前，通过自然落菌试验，在4种抑菌剂（次氯酸钠、山梨酸钾、代森锰锌、多菌灵）中筛选出抑菌效果最明显的次氯酸钠用于后续试验。在非洲菊增殖培养中对次氯酸钠浓度进行优化，综合污染率及增殖系数得出结论：0.004-0.010％的次氯酸钠作为非洲菊组培抑菌剂的效果最好。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种非洲菊的开放式组织培养方法，通过添加在非洲菊组织培养基中添加次氯酸钠，从而实现非洲菊在有菌条件下的增殖及生根。脱离严格的无菌条件，无需高压锅、超净工作台等大型仪器，从根本上简化组培环节，大大降低组培成本。为实现上述目的，本专利技术采用如下技术方案：一种非洲菊的开放式组织培养方法，通过在增殖及生根培养基中添加抑菌剂，直接在开放有菌的条件下接种培养。所述的增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。所述的生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。所述的抑菌剂为次氯酸钠，培养基中的终浓度为0.004-0.010wt.％。本专利技术的优点在于：1、本专利技术通过系统研究，首次建立了非洲菊开放式组织培养体系；2、本专利技术通过添加一定浓度的次氯酸钠，实现非洲菊在有菌条件下的增殖及生根；3、本专利技术省去高压锅及超净工作台等大型仪器的使用，极大地降低了生产成本。附图说明图1自然落菌试验（培养9天后），A.MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L；B.MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+0.02％次氯酸钠；C.MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+0.02g/L代森锰锌；D.MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+100倍多菌灵；E.MS+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+0.02g/L山梨酸钾。图2非洲菊组培苗增殖培养20d；A.MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L（无菌条件接种）；B.MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+0.004％次氯酸钠（开放条件接种）；C.MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L+0.008％次氯酸钠（开放条件接种）；D.MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g+琼脂7g/L+0.010％次氯酸钠（开放条件接种）。图3非洲菊组培苗生根培养20d；A.1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L（无菌条件接种）；B.1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+0.004％次氯酸钠（开放条件接种）；C.1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+0.008％次氯酸钠（开放条件接种）；D.1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L+0.010％次氯酸钠（开放条件接种）。具体实施方式实施例11．洗---培养瓶洗涤。将培养瓶中培养基冲干净，然后在清水中浸泡1h，刷洗瓶内污物，泡入1%的洗衣粉溶解液中，再进行刷洗，尤其是瓶口处也要认真刷洗。刷洗完后于水龙头下以流水冲洗干净。最后倒置于洁净的器皿篮中，以便沥干水分。2．配---培养基配制。依照所设计的培养基配方（增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L、生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L），按比例吸取母液注入容量瓶内，加水定容，倒进不锈钢锅内加琼脂和糖。边加热边搅拌以免煮糊，使琼脂和糖完全溶解。用盐酸或氢氧化钠溶液调整pH值，煮沸，待冷却至50-60℃时加入0.008％的次氯酸钠。3．装---培养基分装。将培养基趁热均匀分装到培养瓶内，30min内盖好瓶盖。把培养瓶放平，凝固后可进行接种。4．种---组培苗接种。包括继代接种和生根接种。继代接种使用增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L；生根接种使用生根培养基为1/2MS+NAA0.2mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。1)、工作环境：可选择干净整洁的房间，一张合适的桌子、一把椅子，准备好一个不锈钢小托盘或一块清洁的玻璃，两把手术剪刀、两把手术刀、两把镊子、一个装有适量70%酒精的广口瓶（高度适当低些，便于接种工具浸入、取出），一包药棉和一个废纸篓。2)、接种过程：①接种前；工作人员必须肥皂洗手，继代、生根瓶苗用干净的纱布擦洗掉培养瓶外的尘土。②将培养瓶、瓶苗、手术刀、镊子、70%酒精广口瓶、药棉、工具架、无菌垫板等，整齐合理地摆放在桌子上。③将瓶苗取出，放在经70%酒精消毒的无菌垫板上，进行接种材料的切割，每接种完一瓶，把残渣倒入废纸篓，用蘸有70%酒精的药棉擦拭数遍，不留盲区，板面酒精稍干后，进行下一瓶接种材料的切割。④切割材料的刀、剪、镊子等，每接种完一瓶，用药棉擦干净叶碎片、琼脂，浸泡在70%的酒精中。⑤接完后盖紧瓶盖。5、养---组培苗培养。培养室内的温度控制在25（±2）℃。光照强度为2000Lx，光照时间每天11h。6、栽---组培苗移栽。移苗前洗干净粘附在生根苗根上的培养基，不要损伤组培苗的幼根。移植时，把根放进预先打好的小孔中，使根系舒展，填满土充分压实，使根土密接，要防止栽植过深、窝根或露根，每个容器内移苗一株，移植后随即浇透水。实施例2次氯酸钠在培养基中的终浓度为0.004wt.％。培养室内的温度控制在25（±2）℃。光照强度为2000Lx，光照时间每天10h。其余方法与实施例1相同。实施例3次氯酸钠在培养基中的终浓度为0.01wt.％。培养室内的温度控制在25（±2）℃。光照强度为2000Lx，光照时间每天12h。其余方法与实施例1相同.实施结果分析：依图1，不添加抑菌剂的培养基经自然落菌培养9天后表面长满各种真菌与细菌菌落（A）；添加0.02％次氯酸钠的培养基表面无任何菌落（B）；添加0.02g/L代森锰锌的培养基表面无任何菌本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非洲菊的开放式组织培养方法，其特征在于：通过在增殖及生根培养基中添加抑菌剂，直接在开放有菌的条件下接种培养。

【技术特征摘要】
1.一种非洲菊的开放式组织培养方法，其特征在于：通过在增殖及生根培养基中添加抑菌剂，直接在开放有菌的条件下接种培养。2.根据权利要求1所述的一种非洲菊的开放式组织培养方法，其特征在于：所述的增殖培养基为MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7g/L。3....

【专利技术属性】
技术研发人员：林玉玲，蔡顺亮，赖钟雄，程春振，陈裕坤，刘生财，张梓浩，
申请(专利权)人：福建农林大学，
类型：发明
国别省市：福建;35