铜在制备钙化抑制剂中的用途制造技术

本发明专利技术公开了铜在制备钙化抑制剂中的新用途。本发明专利技术还公开了以铜作为活性成分的钙化抑制剂。铜具有抑制细胞钙化的作用，可用于治疗肌腱钙化和骨化病等疾病，临床应用前景良好。

【技术实现步骤摘要】
本申请是申请日：2014年6月27日、申请号：201410300441.3、专利技术名称：铜在制备钙化抑制剂中的用途的专利申请的分案申请。
本专利技术涉及铜在制备钙化抑制剂中的用途。
技术介绍
铜作为一种必需的微量元素，人们发现其具有促进血管新生的作用。在数十年前，研究者就发现铜离子可以促进血管新生和刺激内皮细胞的增殖。目前已有不少组织工程研究将铜离子作为一种促血管化试剂，用于增进新生组织的血管新生。另一方面，铜离子螯合剂也被证明能够抑制血管生成，并作为药物用于抑制肿瘤的生长。未见文献报道铜是否有抑制钙化或者抑制成骨的作用。
技术实现思路
本专利技术提供了铜的新用途。首先，铜在制备钙化抑制剂中的用途。钙化抑制剂：能抑制钙盐在生物体内或组织内的积累的物质。其中，所述的铜是铜离子或含铜络合物。其中，所述铜离子的浓度不低于0.5μM，进一步优选不低于5μM或者优选为0.5～5μM；更进一步优选地，所述铜离子的浓度为5μM。其中，所述钙化抑制剂用于抑制骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞。其中，所述钙化抑制剂用于降低钙含量；和/或，所述钙化抑制剂用于减少钙盐结节的形成。本专利技术还提供了一种钙化抑制剂，它是以铜为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂；优选地，所述钙化抑制剂是肌腱钙化、软骨钙化、血管钙化抑制剂；优选地，所述铜是铜离子或含铜络合物；优选地，所述铜离子的浓度不低于0.5μM，进一步优选不低于5μM或者优选为0.5～5μM；更进一步优选地，所述铜离子的浓度为5μM；优选地，所述辅助性成分是小肠粘膜下层。其中，所述钙化抑制剂用于抑制骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞。其中，所述钙化抑制剂用于降低钙含量；和/或，所述钙化抑制剂用于减少钙盐结节的形成。本专利技术还提供了一种抗钙化修饰方法，其特征在于：它是以铜为活性成分，对材料或器械进行修饰；优选地，所述材料为植入材料、人工器官、医用卫生材料、医用卫生敷料、医用缝合材料或医用缝合粘合剂；进一步优选地，所述植入材料是小肠粘膜下层、脱细胞猪心包、脱细胞牛心包、壳聚糖、聚乳酸或聚乙二醇；优选地，述铜是铜离子或含铜络合物；优选地，所述铜离子的浓度不低于5μM；进一步优选地，所述铜离子的浓度为5μM。其中，所述钙化抑制剂用于降低骨髓间充质干细胞中的钙含量；进一步优选地：所述钙化抑制剂用于降低钙含量；和/或，所述钙化抑制剂用于减少钙盐结节的形成。本专利技术首次公开了铜具有抑制细胞钙化和成骨的作用，可作为钙化抑制剂以及成骨抑制剂，治疗肌腱钙化和骨化病(颈椎后纵韧带骨化症)，临床应用前景良好。以下通过实施例形式的具体实施方式，对本专利技术的上述内容作进一步的详细说明。但不应将此理解为本专利技术上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本专利技术上述内容所实现的技术均属于本专利技术的范围。附图说明图1(A)接种3天后原代rBMSCs的形态特征；(B)第3代rBMSCs的形态特征图2流式细胞术检测rBMSCs表面标记物图3成骨诱导21天后茜素红S染色。(A)对照组；(B)诱导组图4成脂诱导10天后油红O染色。(A)对照组；(B)诱导组图5成软骨诱导21天后甲苯胺蓝染色。(A)对照组；(B)诱导组图6不同浓度的CuSO4处理rBMSCs48小时后，使用MTT法检测其细胞增殖活性。值以平均值±标准差表示(*，表示与0μMCuSO4组有显著性差异P<0.05)图75μM的CuSO4处理rBMSCs48小时后，使用Roche’sCASYCellCounter检测其细胞活力。值以平均值±标准差表示(#，表示与对照组无显著性差异P>0.05)图85μM的CuSO4处理rBMSCs48小时后，使用Roche’sCASYCellCounter检测其细胞大小。值以平均值±标准差表示(#，表示与对照组无显著性差异P>0.05)图95μM的CuSO4处理rBMSCs48小时后钙黄绿素-碘化丙啶活死细胞染色(A)对照组；(B)5μMCuSO4添加组。(绿色钙黄绿素，红色碘化丙啶)图10培养21天后细胞倒置相差显微镜成像。(A)对照组；(B)加Cu组；(C)成骨诱导组；(D)成骨诱导加Cu组图11培养21天后茜素红S染色。(A)对照组；(B)加Cu组；(C)成骨诱导组；(D)成骨诱导加Cu组图12Con表示对照组；Cu表示加Cu组；Osteo表示成骨诱导组；Osteo+Cu表示成骨诱导加Cu组。*，表示与0μMCuSO4组有显著性差异P<0.05；#，表示与成骨诱导组有显著性差异P<0.05。图13细胞培养7、14、21天后倒置相差显微镜成像与茜素红染色。(A-C)铜离子浓度为0μM；(D-F)铜离子浓度为0.5μM；(G-I)铜离子浓度为5μM。(C、F、I)为茜素红染色倒置相差显微镜成像。图14realtimeRT-PCR检测细胞中成骨相关基因mRNA表达水平的改变。(*，表示与Control组有显著性差异P<0.05；#表示与成骨诱导组有显著性差异P<0.05)图15免疫印迹检测细胞中成骨相关基因蛋白表达水平的改变。图16培养7天后ALP染色。(A)对照组；(B)成骨诱导组；(C)加Cu组；(D)成骨诱导加Cu组。图17细胞中ALP活力的改变。(*，表示与Control组有显著性差异P<0.05；#表示与成骨诱导组有显著性差异P<0.05)图18细胞培养过程中倒置相差显微镜采图。(Con)对照组；(Cu)加Cu组；(Osteo)成骨诱导组；(Osteo+Cu)成骨诱导加Cu组图19细胞培养过程中激光共聚焦显微镜采图。(Control)对照组；(Cu)加Cu组；(Osteo)成骨诱导组；(Osteo+Cu)成骨诱导加Cu组。(绿色，鬼笔环肽；蓝色，DAPI)图20realtimeRT-PCR检测细胞细胞骨架相关基因mRNA表达水平的改变。(*，表示与Control组有显著性差异P<0.05；#表示与成骨诱导组有显著性差异P<0.05)图21大鼠异位成骨模型构建及含铜细胞支架植入图22植入后2周H&E染色图23植入后2个月H&E染色图24植入后2个月Masson染色图25植入后2个月天狼星红染色，偏振光观察具体实施方式实施例1铜抑制细胞钙化的体外实验1主要材料与仪器1.1主要试剂1.2主要仪器2实验方法2.1rBMSCs原代细胞的培养2.1.1rBMSCs原代细胞的培养4～7日龄SD大鼠乳鼠购自成都达硕实验动物有限公司。(1)取SD大鼠乳鼠，断颈法处死后，于75％乙醇中消毒备用。(2)将已处死消毒的乳鼠置于灭菌后的培养皿中，使用眼科剪和眼科镊仔细去除皮肤和肌肉，把分离获得的胫骨和股骨置于低糖的DMEM培养基(Dulbecco’sModifiedEagleMedium-lowglucose，DMEM-L)中备用。(3)眼科剪去掉长骨两端，使用1毫升注射器吸取含10％胎牛血清(fetalbovineserum，FBS)的DMEM-L培养基冲洗骨髓腔，并将冲洗下的组织接种于25cm2的培养瓶中。培养条件：37℃，5％CO2，饱和湿度。(4)接种后第二天换新鲜培养基，之后每2～3天换液一次。在倒置相差显微镜观察细胞形态。2.1.2rBMSCs本文档来自技高网...

【技术保护点】
铜在制备钙化抑制剂中的用途。

【技术特征摘要】
2013.06.28 CN 20131026793281.铜在制备钙化抑制剂中的用途。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述的铜是铜离子或含铜络合物。3.根据权利要求2所述的用途，其特征在于：所述铜离子的浓度不低于0.5μM，进一步优选不低于5μM或者优选为0.5～5μM；更进一步优选地，所述铜离子的浓度为5μM。4.根据权利要求1所述的用途，其特征在于：所述钙化抑制剂用于抑制骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞。5.根据权利要求1或4所述的用途，其特征在于：所述钙化抑制剂用于降低钙含量；和/或，所述钙化抑制剂用于减少钙盐结节的形成。6.一种钙化抑制剂，其特征在于：它是以铜为活性成分，加上药学上可接受的辅料或辅助性成分制备而成的药剂；优选地，所述钙化抑制剂是肌腱钙化、软骨钙化、血管钙化抑制剂；优选地，所述铜是铜离子或含铜络合物；优选地，所述铜离子的浓度不低于0.5μM，进一步优选不低于5μM或者优选为0.5～5μM；更...

【专利技术属性】
技术研发人员：解慧琪，李顺，王旻，刘宏银，
申请(专利权)人：四川大学华西医院，
类型：发明
国别省市：四川;51