STAT1在作为卵巢癌治疗靶点中的用途制造技术

本发明专利技术涉及STAT1在作为卵巢癌治疗靶点中的用途。本发明专利技术通过实验证实了STAT1和TGF‑β受体(ALK1、ALK5、TβRⅡ)直接结合，过表达STAT1后可促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭，敲低STAT1后可抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭，因此，针对卵巢癌STAT1高表达的病人给予降低STAT1的处理，存在潜在治疗效果。STAT1信号通路是和TGF‑β1信号通路相互作用影响卵巢癌的增殖、迁移和侵袭能力，STAT1是一种潜在的治疗卵巢癌的新型靶点，具有很强的临床应用价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物医学
，具体地说，涉及STAT1在作为卵巢癌治疗靶点中的用途。
技术介绍
卵巢癌(Ovariancancer)是女性生殖器官常见的恶性肿瘤之一，由于卵巢的胚胎发育、组织解剖及内分泌功能较复杂，早期症状不明显，术前鉴别卵巢肿瘤的组织类型及良恶性也相当困难。卵巢癌的病因不明确，可能与以下几个方面有关：癌症发病外部因素(包括化学、物理、生物等致癌因子)；癌症发病内部因素(包括免疫功能、内分泌、遗传、年龄、精神因素等)，以及饮食营养失调和不良生活习惯等。多发生于围绝经期的妇女。35岁以上者多为卵巢上皮性癌，而青年及幼年女性多为生殖细胞类恶性肿瘤。卵巢癌的发病率仅次于子宫颈癌和子宫体癌而列居第三位，对妇女生命造成严重威胁。因此研究卵巢癌发生发展机制和治疗靶点是卵巢癌相关研究中的热点，对于该疾病的预防和治疗意义重大。STAT1是信号转导与转录激活子(SignalTransducerandActivatorofTranscription，STAT)家族的成员之一，是细胞因子/生长因子信号转导中重要的胞质转录因子，主要受干扰素的激活，细胞因子可促进STAT1酪氨酸及丝氨酸位点的磷酸化，入核后形成同/异二聚体激活下游基因的表达。STAT1有两个亚型，包括全长STAT1α(含磷酸化位点Tyr701和Ser727)(有C-末端反式激活区)和剪辑变体STAT1β(含磷酸化位点Ser727)。STAT1可参与调节免疫系统、细胞分化、肿瘤、细胞生长以及细胞凋亡等生理过程，在多种肿瘤中发挥抑制作用，也有报道STAT1在肿瘤中发挥促进作用。TGF-β信号传导通路是一个包含众多成员的多功能细胞因子大家族，根据配体分子激活的不同的下游特异性通路可以分为TGF-β/Activin/Nodal和BMP/GDF/MIS两个亚家族通路。该信号通路的激活首先是TGF-βs配体分子与受体结合，从而使受体TβRs磷酸化，磷酸化的TβR-I直接作用于底物Smads蛋白，活化的Smads就将配体与受体作用的信号从细胞膜、胞浆传递到细胞核内，再与其他核内因子协同激活或者抑制靶基因的转录。TGF-β信号传导通路就是通过调节细胞的生长、增殖、分化、迁移和凋亡等过程，在组织与器官的发生和形成(胚胎发育、骨骼等器官形成)、机体的免疫反应等生物过程中发挥重要的功能。目前在卵巢癌中STAT1信号通路和TGF-β1信号通路如何影响卵巢癌的发生发展，以及二者之间的相互作用还未见报道。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术中的不足，提供一种STAT1以及TGF-β受体的新用途。第一方面，本专利技术提供了STAT1的抑制剂在制备治疗卵巢癌的药物中的应用。第二方面，本专利技术提供了STAT1的抑制剂在制备抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和/或侵袭的试剂中的应用。所述的抑制剂选自以STAT1α或STAT1β蛋白或它们的转录本为靶序列、且能够抑制其蛋白表达或基因转录的小干扰RNA、dsRNA、shRNA、微小RNA、反义核酸；或能表达或形成所述小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。第三方面，本专利技术提供了ALK1、ALK5或TβRⅡ的抑制剂在制备治疗卵巢癌的药物中的应用。第四方面，本专利技术提供了ALK1、ALK5或TβRⅡ的抑制剂在制备抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和/或侵袭的试剂中的应用。本专利技术优点在于：本专利技术通过实验证实了STAT1和TGF-β受体(ALK1、ALK5、TβRⅡ)直接结合，过表达STAT1后可促进卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭；敲低STAT1后可抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和侵袭。因此，针对卵巢癌STAT1高表达的病人给予降低STAT1的处理，存在潜在治疗效果。所以STAT1信号通路和TGF-β1信号通路相互作用影响卵巢癌的增殖、迁移和侵袭能力，STAT1是一种潜在的治疗卵巢癌的新型靶点，具有很强的临床应用可能性。附图说明图1.STAT1和TGF-β受体结合。图2.WST-1方法检测细胞的增殖。质粒(A)或siRNA(B)转染卵巢癌细胞后WST-1方法检测OVCAR-3和SK-OV-3细胞的增殖(*P<0.05)。图3.质粒(A和B)和siRNA(C和D)转染后的细胞划痕实验(*P<0.05)。图4.质粒(A和B)和siRNA(C和D)转染后的Transwell侵袭实验(*P<0.05)。具体实施方式下面结合附图对本专利技术提供的具体实施方式作详细说明。实施例1STAT1和TGF-β受体结合形成复合体STAT1α-myc质粒：目的片段(GenBankaccession#NM_007315)插入到pcDNA4/TO/myc-His(B)vector(Invitrogen，Catalogno.V1030-20)KpnI和SacII位点之间。STAT1β-myc质粒：目的片段(GenBankaccession#NM_139266)插入到pcDNA4KpnI和SacII位点之间。ALK1-HA、ALK5-HA、TβRII-HA质粒：构建参考XuG,Barrios-RodilesM,JerkicM,TurinskyAL,NadonR,VeraS,etal.Novelproteininteractionswithendoglinandactivinreceptor-likekinase1:potentialroleinvascularnetworks.MolCellProteomics2014,13(2):489-502.STAT1α-myc和ALK1-HA、ALK5-HA或TβRII-HA质粒共转染293T细胞，质粒转染试剂盒是DNA18TransfectionReagent(GBClifetech,Miami,FL,USA)，共转染浓度分别是2μg/ml，293T细胞培养在附加10％血清的DMEM培养基中。48h后，免疫共沉淀(IP)实验检测(抗-myc抗体)STAT1α和受体的相互作用，免疫印迹(IB)实验检测受体(图1A上)，反之，IP检测受体(抗-HA抗体)和STAT1α的相互作用，IB检测STAT1(图1A下)。IB检测STAT1α受体和β-Actin(图1B)。STAT1β-myc和ALK1-HA、ALK5-HA或TβRII-HA质粒共转染293T细胞，48h后，IP检测STAT1β(抗-myc抗体)和受体的相互作用，IB检测受体(图1C上)，或IP检测受体(抗-HA抗体)和STAT1β的相互作用，IB检测STAT1β(图1C下)。IB检测STAT1β受体和β-Actin(图1D)。IP实验揭示，STAT1α或STAT1β能直接和ALK1、ALK5或TβRⅡ相结合形成复合体(图1A和图1C)。实施例2STAT1对卵巢癌细胞株增殖的影响过表达实验中(图2A)，用载体pcDNA4和质粒pSTAT1α-myc或pSTAT1β-myc转染卵巢癌细胞OVCAR-3和SK-OV-3，质粒转染试剂盒是DNATransfectionReagent(GBClifetech,Miami,FL,USA)，共转染浓度分别是2μg/ml，siRNA转染试剂盒为tremeGENEsiRNAtransfectionreage本文档来自技高网...

【技术保护点】
STAT1的抑制剂在制备治疗卵巢癌的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.STAT1的抑制剂在制备治疗卵巢癌的药物中的应用。2.STAT1的抑制剂在制备抑制卵巢癌细胞的增殖、迁移和/或侵袭的试剂中的应用。3.根据权利要求1或2所述的应用，所述的抑制剂选自以STAT1α或STAT1β蛋白或它们的转录本为靶序列、且能够抑制其蛋白表达或基因转录的小干扰RNA、d...

【专利技术属性】
技术研发人员：许国雄，田晓玲，管文彩，
申请(专利权)人：复旦大学附属金山医院，
类型：发明
国别省市：上海;31