一种磷脂酰乙醇胺的制备方法技术

本发明专利技术公开了一种磷脂酰乙醇胺的制备方法，包括以下步骤：（1）选取粗卵磷脂，加入乙醇溶液于70~80℃搅拌萃取5~10h后，减压蒸干溶剂，得萃取浓缩物，在萃取浓缩物中加入水搅拌乳化均匀，得乳化液；（2）在乳化液中加入酶液，所述酶液为含有盐酸乙醇胺的磷脂酶D溶液，调节pH值为6.5~7.5，混匀后调节温度为30~40℃反应20~30h，得反应液；（3）在反应液中加入有机溶剂萃取分层，选取有机相用水洗涤后，真空浓缩有机相，得浓缩物，在浓缩物中加入无水乙醇加热溶解后降温重结晶，分离出无水乙醇不溶物，干燥即得到磷脂酰乙醇胺。该制备方法工艺简洁，成本和能耗较低，安全，易于实现工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于磷脂
，具体涉及一种磷脂酰乙醇胺的制备方法。
技术介绍
磷脂酰乙醇胺（PE）是一类重要的磷脂类化合物，亦称脑磷脂，在生物界所存在的磷脂中，其含量仅次于磷脂酰胆碱（PC）,由于其特殊的生理作用而备受关注，其早起应用于食品工业领域，随着研究的不断深入，其功能及应用范围也随之不断扩大，尤其是高纯度的磷脂酰乙醇胺更是逐渐被应用于药物制剂领域，可用作药物制剂的乳化剂和脂质体制备的辅料，还可用于调节线粒体功能紊乱，治疗抑郁症和焦躁症等功能。现有报道的关于磷脂酰乙醇胺有动植物提取结合柱层析法，化学合成法以及酶催化法。动植物提取法如专利CN201410841454.1、CN10038618C以及CN201510395419.6所公开的方法得到的天然磷脂酰乙醇胺含量较低，且有机溶剂用量大，工艺繁琐，纯化所需的填料量大，成本高昂，而人工合成磷脂酰乙醇胺如专利CN201210430649.8及CN201010137564.1，其工艺在实际生产中因产率低而难以实现，且工艺中因使用三氯氧磷，三氯化磷及叠氮化钠等有毒物质而不宜考虑，此外酶法催化法具有条件温和，工艺简单易操作以及价格成本较低等优势，但研究尚不够深入。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种磷脂酰乙醇胺的制备方法，该制备方法工艺简洁，成本和能耗较低，安全，易于实现工业化生产。本专利技术的上述目的是通过以下技术方案来实现的：一种磷脂酰乙醇胺的制备方法，包括以下步骤：（1）选取粗卵磷脂，加入乙醇溶液于70~80℃搅拌萃取5~10h后，减压蒸干溶剂，得萃取浓缩物，在萃取浓缩物中加入水搅拌乳化均匀，得乳化液；（2）在乳化液中加入酶液，所述酶液为含有盐酸乙醇胺的磷脂酶D溶液，调节pH值为6.5~7.5，混匀后调节温度为30~40℃反应20~30h，得反应液；（3）在反应液中加入有机溶剂萃取分层，选取有机相用水洗涤后，真空浓缩有机相，得浓缩物，在浓缩物中加入无水乙醇加热溶解后降温重结晶，分离出无水乙醇不溶物，干燥即得到磷脂酰乙醇胺。在上述磷脂酰乙醇胺的制备方法中：步骤（1）中所述的粗卵磷脂优选来源于大豆或者葵花籽。步骤（1）中所述乙醇溶液中乙醇的体积百分含量优选为90~100%，当乙醇的体积百分含量为100%时，为无水乙醇，其与粗卵磷脂的体积比为1：4~8mL。步骤（1）中所述水为纯净水，其与萃取浓缩物的用量关系优选为1g：4~7.5mL。步骤（2）中酶液与步骤（1）中水的用量关系优选为：1:1~2。步骤（2）中所述酶液中盐酸乙醇胺的用量优选为粗卵磷脂总质量的1~3倍，所述磷脂酶D溶液中磷脂酶D的酶活优选为5-6U/mL。步骤（3）中所述的有机溶剂优选为二氯甲烷或环己烷，其与反应液的体积比优选为1~3：1。步骤（3）中浓缩物与无水乙醇的用量关系优选为1g：7~10mL。步骤（3）中加热溶解温度优选为50~60℃，降温重结晶时的温度优选为0~10℃，时间优选为5~8h。步骤（3）中所述磷脂酰乙醇胺的质量百分含量大于60%。本专利技术具有以下优点：（1）本专利技术所用的原料为粗卵磷脂，因而价格低廉；（2）本专利技术磷脂酰乙醇胺的制备方法整体工艺简洁，条件温和，整体成本较低，易于实现工业化，制得的磷脂酰乙醇胺含量60%以上，纯度较高；（3）本专利技术磷脂酰乙醇胺的制备方法中原料先经过简单的预先纯化，再进行后续酶促反应和纯化，工艺简洁，能耗较低，原料无毒，易于实现工业化生产，对我国磷脂工业，保健食品以及药品工业都将具有重要意义。具体实施方式实施例1下面将结合具体的实施方式进一步说明本专利技术，但本专利技术要求保护的范围并不局限与下列实施方式。实施例1将100毫升（120克）粗大豆卵磷脂于400毫升92%（体积百分含量）的乙醇溶液70℃搅拌萃取5小时，减压蒸干乙醇萃取液得到60克浓缩物，往60克萃取液浓缩物加入240毫升的纯净水搅拌乳化均匀，随后加入240毫升含磷脂酶D和盐酸乙醇胺的酶液，其中酶液中盐酸乙醇胺的质量120克，酶液中磷脂酶D的酶活为5U/mL，调节pH为6.5。混合乳化物和酶液，于30℃反应20小时。反应完毕后往反应体系中加入480毫升环己烷萃取分层，环己烷层用适量水洗涤，真空浓缩有机相得环己烷浓缩物110克，加入无水乙醇770毫升于50℃加热溶解，随后体系于0℃保持5小时，分离出无水乙醇不溶物，真空干燥得到磷脂酰乙醇胺共12克，含量经HPLC法测定为61%。实施例2将100毫升（110克）粗葵花籽卵磷脂于400毫升体积95%（体积百分含量）乙醇溶液70℃搅拌萃取5小时，减压蒸干乙醇萃取液得到65克浓缩物，往65克萃取液浓缩物加入260毫升的纯净水搅拌乳化均匀，随后加入130毫升含磷脂酶D和盐酸乙醇胺的酶液，其中酶液中盐酸乙醇胺的质量120克，酶液中磷脂酶D的酶活为5U/mL，调节pH为6.5。混合乳化物和酶液，于30℃反应20小时。反应完毕后往反应体系中加入1040毫升环己烷萃取分层，环己烷层用适量水洗涤，真空浓缩有机相得环己烷浓缩物100克，加入无水乙醇700毫升于50℃加热溶解，随后体系于0℃保持5小时，分离出无水乙醇不溶物，真空干燥得到磷脂酰乙醇胺共10克，含量经HPLC法测定为62%。实施例3将200毫升（240克）粗大豆卵磷脂于1600毫升90%乙醇溶液80℃搅拌萃取10小时，减压蒸干乙醇萃取液得到120克，往萃取液浓缩物加入880毫升纯净水搅拌乳化均匀，随后加入880毫升含磷脂酶D和盐酸乙醇胺的酶液，其中酶液中盐酸乙醇胺的质量为原料质量的为720克，酶液中磷脂酶D的酶活为6U/mL，调节pH为7.5。混合乳化物和酶液，于40℃反应30小时。反应完毕后往反应体系中加入1760毫升二氯甲烷萃取分层，有机相用适量水洗涤，真空浓缩有机相得二氯甲烷浓缩物180克，加入1800毫升无水乙醇于60℃加热溶解，随后体系于0℃保持8小时，分离出无水乙醇不溶物，真空干燥得到磷脂酰乙醇胺16克，含量经HPLC法测定为64%。实施例4将200毫升（220克）粗葵花籽卵磷脂于1600毫升90%乙醇溶液80℃搅拌萃取9小时，减压蒸干乙醇萃取液得到125克，往萃取液浓缩物加入800毫升纯净水搅拌乳化均匀，随后加入800毫升含磷脂酶D和盐酸乙醇胺的酶液，其中酶液中盐酸乙醇胺的质量为原料质量的为600克，酶液中磷脂酶D的酶活为6U/mL，调节pH为7.5。混合乳化物和酶液，于40℃反应20小时。反应完毕后往反应体系中加入1600毫升二氯甲烷萃取分层，有机相用适量水洗涤，真空浓缩有机相得二氯甲烷浓缩物175克，加入1600毫升无水乙醇于55℃加热溶解，随后体系于5℃保持7小时，分离出无水乙醇不溶物，真空干燥得到磷脂酰乙醇胺15克，含量经HPLC法测定为63%。实施例5将100毫升（120克）粗大豆卵磷脂于600毫升体积100%乙醇溶液75℃搅拌萃取8小时，减压蒸干乙醇溶液萃取液得到60克浓缩物，往60克萃取液浓缩物加入240毫升的纯净水搅拌乳化均匀，随后加入240毫升含磷脂酶D和盐酸乙醇胺的酶液，其中酶液中盐酸乙醇胺的质量120克，酶液中磷脂酶D的酶活为5.5U/mL，调节pH为7.0。混合乳化物和酶液，于35℃反应25小时。反应完毕后往反应体系中加入960毫升环己烷萃取分层，环己烷本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是包括以下步骤：（1）选取粗卵磷脂，加入乙醇溶液于70~80℃搅拌萃取5~10h后，减压蒸干溶剂，得萃取浓缩物，在萃取浓缩物中加入水搅拌乳化均匀，得乳化液；（2）在乳化液中加入酶液，所述酶液为含有盐酸乙醇胺的磷脂酶D溶液，调节pH值为6.5~7.5，混匀后调节温度为30~40℃反应20~30h，得反应液；（3）在反应液中加入有机溶剂萃取分层，选取有机相用水洗涤后，真空浓缩有机相，得浓缩物，在浓缩物中加入无水乙醇加热溶解后降温重结晶，分离出无水乙醇不溶物，干燥即得到磷脂酰乙醇胺。

【技术特征摘要】
1.一种磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是包括以下步骤：（1）选取粗卵磷脂，加入乙醇溶液于70~80℃搅拌萃取5~10h后，减压蒸干溶剂，得萃取浓缩物，在萃取浓缩物中加入水搅拌乳化均匀，得乳化液；（2）在乳化液中加入酶液，所述酶液为含有盐酸乙醇胺的磷脂酶D溶液，调节pH值为6.5~7.5，混匀后调节温度为30~40℃反应20~30h，得反应液；（3）在反应液中加入有机溶剂萃取分层，选取有机相用水洗涤后，真空浓缩有机相，得浓缩物，在浓缩物中加入无水乙醇加热溶解后降温重结晶，分离出无水乙醇不溶物，干燥即得到磷脂酰乙醇胺。2.根据权利要求1所述的磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（1）中所述的粗卵磷脂来源于大豆或者葵花籽。3.根据权利要求1所述的磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（1）中所述乙醇溶液中乙醇的体积百分含量为90~100%，其与粗卵磷脂的体积比为1：4~8mL。4.根据权利要求1所述的磷脂酰乙醇胺的制备方法，其特征是：步骤（1）中所述水...

【专利技术属性】
技术研发人员：杜阳吉，梁丽敏，刘春风，卫娜，
申请(专利权)人：翁源广业清怡食品科技有限公司，广东省食品工业研究所，
类型：发明
国别省市：广东;44