本发明专利技术公开了一种载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂盒,属于临床体外检测试剂技术领域。本发明专利技术试剂盒包括试剂R1、试剂R2、校准品。通过在试剂R1中加入一定量的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒和在试剂R2中加入一定量的牛血清白蛋白和Kathon‑CG,有效的提高了试剂盒的稳定性和分析灵敏度,其线性范围也较好,试剂的准确度高,有利于在市场中进一步的推广使用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及临床体外检测试剂
,特别涉及一种载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂盒。
技术介绍
脂蛋白中的蛋白部分称为载脂蛋白(Apo);载脂蛋白在脂蛋白代谢中具有重要的生理功能;Apo是用ABC命名法,目前已经发现很多种类,一般分为5~7类,主要测定其ApoAI,ApoB两种;ApoAI主要由肝脏合成,小肠也可合成,它是高密度脂蛋白胆固醇(HDL-CHOL)的主要结构蛋白,占HDL-CHOL总蛋白的60%~70%,ApoAI的测定可直接反映HDL-CHOL的水平;ApoB也由肝脏合成,是低密度脂蛋白胆固醇(LDL-CHOL)的主要结构蛋白,约占LDL-CHOL总蛋白含量的97%,ApoB的测定可直接反映LDL-CHOL的水平。载脂蛋白B(ApoB)是一类在分子量、免疫性和代谢上具有多态性的蛋白质,依其分子量及所占百分比可分为B100、B48、B74、B26及少量B50;在正常情况下,以ApoB100和ApoB48较为重要;ApoB100主要分布于血浆VLDL、IDL和LDL中,占这三类脂蛋白中蛋白含量的25%、60%、95%。而ApoB48则分布于CM中,占其蛋白含量的5%。正常情况下人血清或血浆中ApoB参考范围为女性:0.75~1.50g/L,男性:0.60~1.00g/L。动脉粥样硬化主要损伤动脉内壁膜,严重累及中膜是脉管壁胆固醇酯大量堆积成粥样硬化斑块,使血管壁纤维增厚和狭窄的一种病理改变;主要侵犯大动脉和中等动脉,如主动脉、冠状动脉和脑动脉,导致某些脏器的局部供血不足,常出现心脑血管疾患,甚至有致命性损害;近年来,心血管疾病患者每年递增,每天全世界大约有5000人死于心脏疾患,其中不少人是由遗传因素决定的;目前,ApoAI和ApoB的测定做为冠心病危险指标的研究和流行病学研究逐渐增加,各医院检验科亦相继开展此项测定;ApoAI,ApoB分别被认为是动脉粥样硬化的保护因素和危险因素;测定其含量和比值对动脉粥样硬化,心血管疾病的判断和预测提供有价值的指标,具有重要的诊断和预防意义。ApoB为LDL的主要结构蛋白,ApoB浓度水平与动脉粥样硬化程度有关;在使用总胆固醇和甘油三酯来过筛冠心病的危险时,除检测脂蛋白(a)与载脂蛋白A1之外,同时检测ApoB能对各种脂蛋白失调提供更多的信息,也可以替代低密度脂蛋白胆固醇检测。人血清或血浆中载脂蛋白B与其相对应的羊抗人ApoB多克隆抗体在液体中结合,形成不溶性免疫复合物,使反应液产生浑浊,浊度高低反映样品中载脂蛋白B的含量;后者可由校准品所作的剂量/反应曲线算出;该方法是一种无需预处理样本,技术和设备要求不高,而精密度和特异性更高的分析方法。由于该方法不需要昂贵的设备,可以实现自动化,且可测定大量标本,因此受到临床广泛推广;但是普通的载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂稳定性不好,灵敏度也不高,因而限制了其在临床上的推广应用。
技术实现思路
针对现有技术存在的问题,本专利技术提供了一种载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂盒,该试剂盒与常规的试剂盒相比,稳定性比常规的检测试剂盒好,分析灵敏度高,有利于在临床上推广应用。本专利技术是通过以下措施实现的:一种载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂盒,其特征在于,它包含试剂R1、试剂R2和校准品,其中试剂R1组成为:100mmol/LpH7.5Tris缓冲液、0.1%叠氮钠(w/v)、0.1%-2%二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒(w/v);试剂R2组成为:100mmol/LpH7.5Tris缓冲液、30ml/L羊抗人ApoB抗体、20-40g/L牛血清白蛋白、0.05%Kathon-CG(v/v)。所述二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒为Fe3O4/SiO2复合纳米粒子,粒径为20-50nm。所述试剂R1和试剂R2在使用时的体积比例为R1:R2=3:1。本专利技术所使用的二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒是采用以下方法制备的:采用多元醇法制备Fe3O4纳米粒子。取一定的乙酰丙酮铁和三甘醇加入到回流加热反应装置中,在磁力搅拌和Ar气保护的条件下,将装置缓慢加热至沸腾,并保持回流一段时间。冷却后向反应溶液中加入乙酸乙酯使生成的四氧化三铁纳米粒子产生絮凝,磁性分离黑色产物,清洗数次,分散到乙醇中,即得到稳定的Fe3O4纳米粒子乙醇胶体溶液。之后将所得Fe3O4纳米粒子采用Stober水解法制得SiO2包覆的Fe3O4纳米粒子。所得Fe3O4/SiO2复合纳米粒子的粒径为20-50nm。本专利技术所使用的校准品为久峰润达生物技术有限公司生产的APOB校准品。本专利技术的试剂盒在具有双试剂功能的自动生化分析仪上进行,其具体使用方法如图4所示:加入生理盐水、样本或校准品4μl,之后再加入R1试剂450μl预孵育5min后读取吸光度A1,之后再加入150μl的试剂R2反应5min后,读取吸光度A2,并计算ΔA。本专利技术的有益效果:本专利技术提供的载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂盒,通过在试剂R1中加入二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒,该磁性纳米颗粒在静电吸附的作用下与羊抗人APOB抗体结合,从而使抗体在磁性纳米颗粒上形成凝集,大大的提高了试剂的分析灵敏度;同时在试剂R2中加入牛血清白蛋白,解决了抗体在稀溶液中不稳定这一难题,在试验中它能使抗体稳定,且相对地中性,但不会影响抗体的性质,而Kathon-CG是一种新型高效环保型广谱杀菌剂、防腐剂,在该试剂盒中使用Kathon-CG有效解决了BSA长时间保存易发霉的缺点,因此BSA与Kathon-CG共同作用有效地增强了试剂盒的稳定性,却不会对试剂的准确度产生影响,有利于该试剂在市场中进一步的推广。附图说明图1实施例2准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性;图2实施例3准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性;图3实施例4准确度验证实验检测结果与对照组检测结果相关性;图4具体使用方法;图5实施例1-4线性相关验证实验检测结果;图6稳定性验证实验检测结果;图7分析灵敏度实验结果。具体实施方式为了更好的理解本专利技术,下面结合具体实施例来进一步详细说明。实施例1一种常规的载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。其中试剂R1组成为:pH7.5Tris缓冲液100mmol/L叠氮钠0.1%(w/v)聚乙二醇60000.5%(v/v);试剂R2组成为:pH7.5Tris缓冲液100mmol/L羊抗人APOB抗体30ml/L。本实施例描述的试剂盒,在使用时,其测定方法是采用具有双试剂功能的东芝120自动分析仪,操作如下:加入生理盐水、样本或校准品4μl,之后再加入R1试剂450μl预孵育5min后读取吸光度A1,之后再加入150μl的试剂R2反应5min后,读取吸光度A2,并计算ΔA。本实施例所使用的校准品为久峰润达生物技术有限公司生产的APOB校准品。实施例2一种载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂盒,它包括试剂R1、试剂R2、校准品。其中试剂R1组成为:pH7.5Tris缓冲液100mmol/L叠氮钠0.1%(w/v)聚乙二醇60000.5%(v/v)二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒0.1%(w/v);试剂R2组成为:pH7.5Tris缓冲液100mmol/L羊抗人APOB抗体30ml/L牛血清白蛋白本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂盒,其特征在于,它包含试剂R1、试剂R2和校准品,其中试剂R1组成为:100mmol/L pH7.5 Tris缓冲液、0.1%叠氮钠(w/v)、0.1%‑2%二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒(w/v);试剂R2组成为:100mmol/L pH7.5Tris缓冲液、30ml/L羊抗人ApoB抗体、20‑40g/L 牛血清白蛋白、0.05% Kathon‑CG(v/v)。
【技术特征摘要】
1.一种载脂蛋白B免疫比浊法检测试剂盒,其特征在于,它包含试剂R1、试剂R2和校准品,其中试剂R1组成为:100mmol/LpH7.5Tris缓冲液、0.1%叠氮钠(w/v)、0.1%-2%二氧化硅包覆的磁性纳米颗粒(w/v);试剂R2组成为:100mmol/LpH7.5Tris缓冲液、30ml/L羊抗人Apo...
【专利技术属性】
技术研发人员:甘宜梧,谭柏清,董雯,李静,王慧娟,
申请(专利权)人:山东博科生物产业有限公司,
类型:发明
国别省市:山东;37
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