本发明专利技术涉及用于诊断自然反复流产的microRNA标志物。具体地，本发明专利技术涉及可用于区分自然反复流产组织及正常组织的microRNA标志物hsa‑miR‑3074。经检验证明，该特异性的microRNA标志物可非常有效地诊断和/或预测自然反复流产。本发明专利技术还涉及标志物microRNA hsa‑miR‑3074的应用及用于检测自然反复流产的试剂盒。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物技术和医学领域。具体地说，本专利技术涉及hsa-miR-3074-5p基因在鉴别RM病理妊娠的方法和应用。
技术介绍
人类正常妊娠的建立和维持需要经历胚胎植入、胎盘形成、胚胎发育等一系列重要环节，受到多层面不同系统的协同调控，其中任一环节障碍均会导致自然流产等不良妊娠结局。2005年，人类生殖和胚胎学协会(ESHRE，EuropeanSocietyofHumanReproductionandEmbryology)将“流产”定义为：(1)尿妊娠试验阳性或者血HCG水平升高，但超声或组织学未能确认妊娠的情况为“生化流失”，一般发生于妊娠6周之前；(2)当超声或组织学能够确认为宫内妊娠时，称之为“临床流产”，又可细分为早期流产(妊娠12周之前)与晚期流产(妊娠12周到22周之间)。据估计，人类妊娠中生化流失率达60％；早期临床妊娠流产率达15％，并且与年龄显著相关，在20-24岁时临床流产率为10％，而40-44岁时，流产率达51％；晚期流产率一般在4％。反复自然流产(recurrentspontaneousmiscarriages，RSM)又称为RM(recurrentmiscarriages)或者是RPL(recurrentpregnancyloss)，是指与同一性伴侣连续发生2次及2次以上的妊娠第20周之前的自然流产，在妊娠期妇女中的发病率约为1-2％。RSM病因复杂，涉及遗传、生殖内分泌、生殖道解剖、感染及女性自身免疫等诸多方面，虽然已有大量研究聚焦于这个领域，但仍有半数以上原因不明。而临床上对于如何鉴定以及预测RM的发生的研究，仍是空白。miRNA是一类在真核生物体内广泛表达的非编码RNA分子，多由21-25个核苷酸组成，通过与靶基因转录产物mRNA的3′-UTR互补结合，抑制其翻译过程而调控靶基因的表达。目前人类成熟miRNAs的统计量已达2578个(miRBase20.0)，调控着近50％的蛋白编码基因。miRNA的表达具有组织特异性及时序性(即只在特定的组织和发育阶段表达)，这就意味着其在细胞生长和发育过程中起多种调节作用，包括：细胞增殖、凋亡、代谢、维持干细胞多能性及分化等。已有研究发现，miRNA可能参与调控胚胎的发育和选择、子宫内膜容受性的形成、母胎界面的血管重铸和免疫功能调节等，而上述的这些生物过程均与人妊娠的建立有密切关系，因此有理由相信miRNA在妊娠建立过程中具有重要作用。虽然其确切的作用机制有待阐明，但miRNA作为鉴别RM的候选分子在临床应用上具有广阔前景意见显露出来。综上所述，从现有的研究可以看出，目前人们对RM的鉴别以及预测方法知之甚少。因此，本领域急需能够用于RM鉴别和预测的分子，为RM发病机制的研究及其生物标志分子的筛选鉴定提供新的途径。
技术实现思路
本专利技术提供了miRNA-3074与反复自然流产之间的相关性及其应用。本专利技术第一方面，提供了miRNA-3074或其检测试剂的用途，用于制备判断反复自然流产(recurrentspontaneousmiscarriages，RSM)的试剂盒。在另一优选例中，所述miRNA-3074来源于哺乳动物，优选为小鼠、大鼠或人。在另一优选例中，所述miRNA-3074包括miRNA-3074-3p或miRNA-3074-5P，优选为miRNA-3074-5p。在另一优选例中，所述的试剂盒含有miRNA-3074作为阳性对照。在另一优选例中，所述的判断包括预先判断。在另一优选例中，所述检测试剂盒的检测样本包括血液或组织。在另一优选例中，所述的组织包括绒毛组织或蜕膜组织。在另一优选例中，所述miRNA-3074的序列如SEQIDNO.:1所示。在另一优选例中，所述的检测试剂包括引物、反义核酸、探针或芯片。本专利技术第二方面，提供了一种miRNA芯片，所述的miRNA芯片包括：固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针特异性地对应于miRNA-3074。在另一优选例中，所述的寡核苷酸探针含有：互补结合区；和/或与固相载体相连的连接区。本专利技术第三方面，提供了一种试剂盒，所述的试剂盒含有miRNA-3074或其检测试剂，和说明书，所述的说明书中注明所述的试剂盒用于判断反复自然流产。在另一优选例中，所述的使用说明书注明以下内容：当所检测的样本中，miRNA-3074的表达量E1与对照基因表达量E0之比E1/E0≥2，则提示该检测样本为反复自然流产样本。本专利技术第四方面，提供了一种体外非诊断性的判断样本是否为反复自然流产样本的方法，包括步骤：测定所述样本中，miRNA-3074的表达量E1，并将其与与对照基因表达量E0进行比较，若E1/E0≥2，则提示该检测样本为反复自然流产样本。本专利技术第五方面，提供了一种分离的miRNA，所述的miRNA选自：(i)miRNA-3074家族的miRNA，或(ii)与miRNA-3074互补的miRNA。在另一优选例中，所述的miRNA分离自人。在另一优选例中，所述miRNA-3074包括miRNA-3074-3p或miRNA-3074-5P，优选为miRNA-3074-5p。本专利技术第六方面，提供了一种分离的或人工构建的前体miRNA，所述的前体miRNA能在人细胞内剪切并表达成本专利技术第五方面所述的miRNA。本专利技术第七方面，提供了一种分离的多核苷酸，所述的多核苷酸能被人细胞转录成前体miRNA，所述的前体miRNA能在人细胞内被剪切且表达成本专利技术第五方面所述的miRNA。在另一优选例中，所述的多核苷酸具有式I所示的结构：Seq正向-X-Seq反向式I式I中，Seq正向为能在人细胞中表达成所述的miRNA的核苷酸序列；Seq反向为与Seq正向基本上互补或完全互补的核苷酸序列；X为位于Seq正向和Seq反向之间的间隔序列，并且所述间隔序列与Seq正向和Seq反向不互补；并且式I所示的结构在转入人细胞后，形成式II所示的二级结构：式II，式II中，Seq正向、Seq反向和X的定义如上述，||表示在Seq正向和Seq反向之间形成的碱基互补配对关系。本专利技术第八方面，提供了一种判断检测对象是否患有反复自然流产的方法，包括步骤：测定所述检测对象的样本中miRNA-3074的表达量E1，并将其与与对照基因表达量E0进行比较，若E1/E0≥2，则提示所述检测对象患有反复自然流产。应理解，在本专利技术范围内中，本专利技术的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。附图说明图1显示了hsa-miR-3074-5p的成熟体碱基序列；图2显示了采用Real-timePCR鉴定RM绒毛中hsa-miR-3074-5p的表达变化；图3显示了采用Real-timePCR鉴定RM血液中hsa-miR-3074-5p的表达。具体实施方式本专利技术人经过长期而广泛的研究，通过检测反复自然流产样本血清和正常样本血清的microRNA表达谱水平，首次从中筛选出特异性的microRNA：hsa-miR-3074。经检验证明，hsa-miR-3074作为microRNA标志物可非常有效地区分反复自然流产组本文档来自技高网...
【技术保护点】
miRNA‑3074或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备判断反复自然流产(recurrent spontaneous miscarriages，RSM)的试剂盒。
【技术特征摘要】
1.miRNA-3074或其检测试剂的用途，其特征在于，用于制备判断反复自然流产(recurrentspontaneousmiscarriages，RSM)的试剂盒。2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述miRNA-3074的序列如SEQIDNO.:1所示。3.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述的检测试剂包括引物、反义核酸、探针或芯片。4.一种miRNA芯片，其特征在于，所述的miRNA芯片包括：固相载体；以及有序固定在所述固相载体上的寡核苷酸探针，所述的寡核苷酸探针特异性地对应于miRNA-3074。5.一种试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒含有miRNA-3074或其检测试剂，和说明书，所述的说明书中注明所述的试剂盒用于判断反复自然流产。6.一种体外非诊断性的判断样本是否为反复自然流产样本的方法，其特征在于，包括步骤：测定所述样本中，miRNA-3074的表达量E1，并将其与与对照基因表达量E0进行比较，若E1/E0≥2，则提示该检测样本为反复自然流产样本。7.一种分离的miRNA，所述的miRNA选自：(i)miRNA-3074家族的miRNA，或(ii)与miRNA-30...
【专利技术属性】
技术研发人员：张璇，顾艳，孙兆贵，王建梅，杨倩，王健，
申请(专利权)人：上海市计划生育科学研究所，天津医科大学第二医院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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