一种红山樱粉彩组培快速繁殖方法技术

本发明专利技术公开了一种红山樱‘粉彩’组培快速繁殖方法，包括以下步骤：A叶片、茎段灭菌，B不定芽诱导及增殖，C抗褐化试验，D愈伤组织诱导及增殖，E愈伤组织分化丛芽试验，F壮苗及生根培养；采用植物组织培养的方法繁殖‘粉彩’，受外界影响较小，节约育苗占地，降低成本，并且保存了母体的全部优良性状及遗传稳定性。这种快速的繁殖方法在短期内可以进行大量的试管苗规模化、工厂化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及植物无性繁殖
，尤其涉及一种红山樱‘粉彩’组培快速繁殖方法。
技术介绍
带芽茎段是目前使用最多的离体快繁外植体，众多试验表明樱花以茎段或芽心为外植体时可成功的诱导出丛生芽。愈伤培养是组织培养中非常常见并且也是重要的环节。任何外植体均可以通过愈伤组织培养诱导出芽和根。当外植体为叶片、叶柄、花瓣、花柄、子房等只能通过愈伤组织途径培养，很难直接诱导出丛芽，这可能与外植体的基因型、生理状态、生长调节剂配比、培养条件、继代周期等方面有关，仍需要进一步深入研究。尤其是褐化、污染、玻璃化是组织培养再生体系建立过程中常见的问题。‘粉彩’(Cerasusjamasakura‘Fencai’)为蔷薇科樱属红山樱种系的一个，具有极大的观赏价值，但目前存在繁殖障碍，市场无商品苗提供。
技术实现思路
专利技术目的：针对现有技术中存在的不足，本专利技术的目的是提供一种红山樱‘粉彩’组培快速繁殖方法，建立‘粉彩’的再生体系，获得优质的‘粉彩’种苗。技术方案：为了实现上述专利技术目的，本专利技术采用的技术方案如下：1、一种红山樱‘粉彩’组培快速繁殖方法，包括以下步骤：1)剪取春季‘粉彩’健壮嫩枝，去除叶片，剪成2～3cm带芽茎段，洗净消毒，放入配方为1/4MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基中，培养一周后诱导出丛芽；2)将茎段基部不带愈伤组织的丛芽直接转移到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+TDZ0.5mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基中进行增殖；3)丛芽茎段在配方为MS+6-BA1mg/L+NAA0.05mg/L+GA5～7mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基中进行壮苗，当不定芽长到2～3cm时，转入1/2MS+NAA0.8mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基中生根，培养30d；4)将生长健壮的幼苗在自然光下带盖炼苗3～4d，洗净培养基，移至细沙：珍珠岩：蛭石(1:1:1)的基质中，保持稳定的温湿度和透气性，每隔7d对幼苗进行一次1000倍多菌灵喷雾消毒。2、一种红山樱‘粉彩’组培快速繁殖方法，包括以下步骤：1)摘取春季‘粉彩’展叶期鲜嫩叶片，洗净消毒，无菌条件下剪去叶脉及叶柄，在叶背划出2～3处创伤，接种于配方为MS+6-BA0.5mg/L+NAA1.5mg/L+2,4-D2mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L或MS+6-BA1mg/L+NAA1mg/L+2,4-D2mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的启动培养基上培养，直至培育出愈伤组织；2)将愈伤组织转移到MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+ZT1.0mg/L+Vc20mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基上增殖培养，每15d继代一次；3)将增殖后的愈伤组织转移至MS+6-BA0.2～0.3mg/L+NAA0.1～0.3mg/L+TDZ0.1～0.3mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基上诱导分化。步骤1)中洗净消毒的方法为：自来水冲洗1～2h，75％酒精浸泡30s，无菌水冲洗3～5次，0.1％HgCl2消毒5min，再用无菌水冲洗5～6次。步骤2)中，丛芽增殖培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.5mg/L+ZT1.0mg/L+Vc20mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L。有益效果：与现有的技术相比，本专利技术的‘粉彩’组培快速繁殖方法，有效建立出‘粉彩’的再生体系，能快速高效的获得优质种苗，解决了实生苗生长周期长的问题，为工厂化育苗缩短了时间、提高了效率、降低了成本，同时保留了母本的优良性状。研究中发现丛芽诱导效率较高，最高可达95.00％、增殖量大，生长旺盛，成功实现了无菌苗的大量培育，得出了较佳的培育体系；愈伤组织的诱导及分化还需要进一步的研究。附图说明图1是茎段诱导图；图2是丛芽增殖图；图3是茎段生根图；图4是愈伤诱导图；图5是愈伤分化图。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术做进一步的说明。实施例1一种红山樱‘粉彩’组培快速繁殖方法，包括以下步骤：1)茎段芽诱导培养：不定芽诱导：剪取春季‘粉彩’健壮嫩枝，去除叶片，剪成2～3cm带芽茎段洗净消毒，结果表明：0.1％HgCl2消毒时间为5min时较佳。无菌茎段接种到以MS、1/2MS、1/4MS为基本培养基，以6-BA和IBA为激素组合的启动培养基中。结果如表1所示，表明：1/4MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L的组合出芽率最高，为95.00％，出芽时间最短，约7d；如图1所示。而MS+6-BA0.5mg/L+IBA0.01mg/L的组合出芽率最低，为45.00％，出芽时间超过10d。表1启动培养结果2)丛芽增殖培养：将生长健壮的丛芽块作为外植体进行丛芽增殖，以MS为基本培养基，以6-BA(0.1、0.5、1.0mg/L)+NAA(0.02、0.05、0.08、0.10mg/L)组合的12组培养基和6-BA(0.5、1.0、1.5mg/L)+IBA(0.01、0.05、0.10、0.20mg/L)组合的12组培养基以及6-BA(0.5、1.0mg/L)+NAA(0.05、0.10mg/L)+TDZ(0.1、0.5mg/L)组合的8组培养基中进行丛芽增殖试验。统计丛芽增殖系数及生长情况。结果如表2、表3、表4所示，表明：6-BA+NAA+TDZ的激素组合丛芽增殖时间最短，为10d，增殖系数最高，其中MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.1mg/L+TDZ0.5mg/L的培养基丛芽增殖系数最高，为5.27，且增殖快，丛芽密集，生长良好，但芽段略细弱(如图2所示)；6-BA+IBA的激素组合丛芽增殖时间最长，为20d，但苗都较为健壮，其中MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.1mg/L的培养基丛芽增殖系数最高，为2.99，丛芽增殖速度一般；6-BA+NAA的激素组合丛芽增殖时间介于前两者之间，为16d，其中MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L的培养基丛芽增殖效果最好，增殖系数为3.15，略有愈伤，丛芽较密集，生长健壮。表2丛芽增殖结果表3丛芽增殖结果表4丛芽增殖结果3)壮苗及生根培养：将小苗培养在壮苗及生根培养基中，以MS为基本培养基，添加6-BA1.0mg/L，NAA0.05mg/L，GA(0、0.5、1.0、2.0、5.0、7.0、10.0mg/L)3种激素，共设置7个处理进行壮苗试验。结果如表5所示，确定MS+6-BA1mg/L+NAA0.05mg/L+GA5～7mg/L培养基壮苗效果理想。表5壮苗结果以1/4MS、1/2MS、3/4MS和MS为基本培养基的生根率分别为50.00％、63.33％、60.00％、46.67％。采用1/2MS培养基添加NAA(0、0.2、0.5、0.8、1.0mg/L)+IBA(0、0.2、0.5、0.8、1.0mg/L)进行交叉对比试验，发现NAA适合作为生根诱导激素，浓度为0.8mg/L时，生根本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种红山樱‘粉彩’组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：1）剪取春季‘粉彩’健壮嫩枝，去除叶片，剪成2~3 cm带芽茎段，洗净消毒，放入配方为1/4MS+6‑BA 1.0 mg/L+IBA 0.01 mg/L+琼脂3.3 g/L+蔗糖30 g/L的培养基中，培养一周后诱导出丛芽；2）将茎段基部不带愈伤组织的丛芽直接转移到MS+6‑BA 0.5 mg/L+NAA 0.05 mg/L+琼脂3.3 g/L+蔗糖30 g/L的培养基中进行增殖，培养出小苗；将小苗在配方为MS+6‑BA 1 mg/L+NAA 0.05 mg/L+GA 5~7 mg/L+琼脂3.3 g/L+蔗糖30 g/L的培养基中进行壮苗，当不定芽长到2~3 cm时，转入1/2MS+NAA 0.8 mg/L+琼脂3.3 g/L+蔗糖30 g/L的培养基中生根培养；4）将生长健壮的幼苗在自然光下带盖炼苗3~4 d，洗净培养基，移栽至基质中，保持稳定的温湿度和透气性，定期对幼苗进行喷雾消毒处理。

【技术特征摘要】
1.一种红山樱‘粉彩’组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：1）剪取春季‘粉彩’健壮嫩枝，去除叶片，剪成2~3cm带芽茎段，洗净消毒，放入配方为1/4MS+6-BA1.0mg/L+IBA0.01mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基中，培养一周后诱导出丛芽；2）将茎段基部不带愈伤组织的丛芽直接转移到MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.05mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基中进行增殖，培养出小苗；将小苗在配方为MS+6-BA1mg/L+NAA0.05mg/L+GA5~7mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基中进行壮苗，当不定芽长到2~3cm时，转入1/2MS+NAA0.8mg/L+琼脂3.3g/L+蔗糖30g/L的培养基中生根培养；4）将生长健壮的幼苗在自然光下带盖炼苗3~4d，洗净培养基，移栽至基质中，保持稳定的温湿度和透气性，定期对幼苗进行喷雾消毒处理。2.一种红山樱‘粉彩’组培快速繁殖方法，其特征在于，包括以下步骤：摘取春季‘粉彩’展叶期鲜嫩叶片，洗净消毒，无菌条件下剪去叶脉及叶柄，在叶背划出2~3处创伤，接种于配方为MS+6-BA0.5mg/L...

【专利技术属性】
技术研发人员：张开文，王贤荣，伊贤贵，段一凡，王华辰，从睿，谢梦梦，
申请(专利权)人：南京林业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32