一种羊肚菌菌种快速繁育方法技术

本发明专利技术公开了一种羊肚菌菌种快速繁育方法，该方法通过将传统的先生产原种再生产栽培种用于播种，改进为直接生产原种播种，去掉了原种扩繁为栽培种的环节，大大缩短了菌种制种时间，同时由于减少了种子繁殖代数，保证种子活性，其适应性和抗逆性更强，该方法能够显著缩短羊肚菌菌种的繁育周期，并且能有效提高羊肚菌菌种繁育的产量。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及食用菌栽培
，具体涉及到一种羊肚菌菌种快速繁育方法。
技术介绍
羊肚菌（Morchella）属子囊菌门（Ascomycota）、盘菌纲（Pezizimycetes）、盘菌目（Pezizales）、羊肚菌科（Morchellaceae）。因其表面呈蜂窝状，外形常为圆顶或尖顶，与羊肚颇为相似，故名为羊肚菌。羊肚菌肉质脆嫩，含有丰富的氨基酸、多糖、脂肪酸，其营养价值较高，是世界公认的珍贵食用真菌。在欧洲各地，羊肚菌以其鲜美的味道被认为是仅次于块菌的美味食用菌，北美人同样认为它是食用菌中的佳品。羊肚菌在我国最早被收载于《本草纲目》，中医以其子实体入药，因性平味甘，故具有健脾、化痰理气、益肠消食等功效。近年来，由于国内、国外市场对羊肚菌的需求日益增加，加之分布区域特定、出菇期短、天然产量有限以及过度采摘，呈现产量逐年下降趋势。市场价格也因此居高不下。目前我国已实现部分羊肚菌菌株人工栽培，每亩产量一般在100～200公斤，但是由于菌种的获取方法极不规范，菌种生产周期较长，加之对羊肚菌生活史周期尚未完全明了，导致菌种产量不稳定，甚至有绝收的现象出现。
技术实现思路
为了解决上述技术问题，本专利技术提供一种羊肚菌菌种快速繁育方法，该方法能够显著缩短羊肚菌菌种的繁育周期，并且能有效提高羊肚菌菌种繁育的产量。本专利技术通过下述技术方案实现：一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种菇选择：选取菇柄长1～2厘米、菇帽长3～4厘米、纹路清晰、褶皱紧密的羊肚菌种菇连根拔除，清除杂质后摊晾至含水量为60～70%，以提高组织分离可操作性，降低细菌感染的几率；（2）无糖培养基制备：将土豆去皮后切成0.9～1.1cm3的颗粒，称取200份，加水煮沸18～20分钟，趁热过滤后取滤液，向滤液中补充热水后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将步骤（1）中的种菇、无糖培养基和分离器具灭菌后，切开种菇菌盖，铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内，16～18℃培养4～6天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝，7～8天后待菌丝长到直径1.5～2cm的菌落时即可提纯；（4）接种：从步骤（3）所得无糖培养基中挑取4～5mm见方大的培养基2块，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，每个三角瓶可接20～30支，16～18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝，9～10天菌丝即可长满试管；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成0.9～1.1cm的片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，一支试管能够接6～8瓶原种，温度16～18℃、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即可吃料，5～7天菌丝即可封面；（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动8～10次，使长有菌丝的麦粒均匀分布在菌种瓶中，继续培养3～5天，菌种瓶中可见大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量380～410瓶。其中，步骤（4）中所述提纯培养基的制备方法如下：取20份黄豆打磨成豆浆后加入葡萄糖20份、琼脂粉20份、KH2P041.5份、MgSO41.5份、酵母膏1份充分溶解，调节PH值为7，采用20mm×200mm的玻璃试管，每个玻璃试管装入试管高度1/5的溶液，用试管塞封口，灭菌后摆放倾斜，冷却后即得提纯培养基。步骤（5）中所述原种培养基的制备方法如下：1）选用当年无虫优质麦粒60份，提前48小时加水浸泡，同时加入石灰1份，浸泡至无白心时捞出沥干水分备用；2）取木屑30份提前备好用水淋透，自然堆放至棕黄色备用；3）将上述步骤中制备好的麦粒、木屑以及草炭土8份、石膏1份混合均匀后装入750ml菌种瓶，装瓶时装至瓶身2/3处即可，种瓶上下松紧一致，最后用棉花或者塑料薄膜封口。在原种培养基中，麦粒富含淀粉和灰分营养更易于菌丝吸收，木屑增加培养基透气性，易于菌丝生长，草炭土含大量腐殖酸和微量元素增加菌丝活力，能够有效促进菌核形成，利于羊肚菌菌丝的快速生长。羊肚菌属于子囊菌，其生长过程较为复杂，且生长过程中，子囊、菌丝体、子实体形态大小会发生较大变化，其次，不同种的羊肚菌菌种具有不同的培养条件，其生长速度、生长习性、菌核发育、菌丝和菌核的颜色等都有明显的差异。目前羊肚菌菌种的获取方法各式各样，如组织分离、孢子分离、菌土分离等导致品种退化非常严重。以上原因导致目前羊肚菌菌种生产的周期长、产量不稳定，甚至绝收，难以满足市场供应。本专利技术的菌种生产由传统的先生产原种再生产栽培种用于播种，改进为直接生产原种播种，去掉了原种扩繁为栽培种的环节，菌种繁育时间缩短了24～25天，进一步地，改进接种方式，接种方式由1个点位接种改进为2个点位接种，将菌种在试管内的提纯培养基生长的时间由10天缩短到6天，再通过改变原种培养方式，将传统的静置培养改为摇瓶培养，使得原种培养时间缩短5天以上。因此，本专利技术的羊肚菌菌种繁育方法有效将传统的70天缩短到33～36天，大大提升了菌种制种效率，适合在羊肚菌栽培中推广。本专利技术直接采用原种播种，由于减少了种子繁殖代数，避免菌种由于扩繁导致的退化和衰弱，保证了种子活性，其适应性和抗逆性更强，利于羊肚菌播种后的快速生长发育，提高产量。与传统的分离培养基相比，本专利技术采用了不含葡萄糖的无糖培养基，由于羊肚菌菌丝由组织块的再生萌发长成，能够快速附着在培养基表面，而杂菌菌丝必须由芽孢萌发长成，芽孢在无糖培养基表面由于养分不够很难萌发，减少了杂菌滋生的机会，因而无糖培养基能够避免菌种被杂菌污染，使羊肚菌更易存活生长，提高菌种分离的成活率，提高羊肚菌菌种的产量，为做羊肚菌品种的分类鉴定及品种选育奠定了基础。本专利技术通过将菌种分离容器由试管改进为三角瓶，将菌种繁殖数量由8～10支增加到25～30支，大大提高了原种的产量，利于大范围播种。本专利技术与现有技术相比，具有如下的优点和有益效果：（1）本专利技术的菌种生产由传统的先生产原种再生产栽培种用于播种，改进为直接生产原种播种，去掉了原种扩繁为栽培种的环节，大大缩短了菌种制种时间，同时由于减少了种子繁殖代数，保证种子活性，其适应性和抗逆性更强；（2）通过改进接种方式、改变原种培养方式有效将菌种培养时间缩短9天以上，同时本专利技术直接采用原种播种，因而整个菌种繁育方法由传统的70天缩短到33～36天；（3）通过将菌种分离容器由试管改进为三角瓶，提纯培养时菌种繁殖数量由8～10支增加到25～30支，大大提高了繁育出的菌种的产量。具体实施方式为使本专利技术的目的、技术方案和优点更加清楚明白，下面结合实施例，对本专利技术作进一步的详细说明，本专利技术的示意性实施方式及其说明仅用于解释本专利技术，并不作为对本专利技术的限定。实施例1一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种菇选择：采集当地人工种植或野生的羊肚菌，选取菇柄长1～2厘米、菇帽长3～4厘米、纹路清晰、褶皱紧密、菇型匀称、无虫无病虫害的羊肚菌，采菇时将种菇整连根拔除，去掉多余泥土和杂质，用纸质采样袋密封，摊晾至含水量60%备用；（2）无糖培养基制备：取淀粉含量高的土豆，去皮后切成0.9cm3的颗粒，称取200g，加水1000ml本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种菇选择：选取菇柄长1～2厘米、菇帽长3～4厘米、纹路清晰、褶皱紧密的羊肚菌种菇连根拔除，清除杂质后摊晾至含水量为60～70%备用；（2）无糖培养基制备：土豆去皮后切成颗粒，称取质量份数为200份的土豆颗粒，加水煮沸18～20分钟，趁热过滤取滤液，向滤液中补充热水后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，再趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将步骤（1）中的种菇，无糖培养基和分离器具灭菌后，切开种菇菌盖，铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内，16～18℃培养4～6天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝，7～8天后待菌丝长到直径1.5～2cm的菌落时即可提纯；（4）接种：从步骤（3）所得无糖培养基中挑取2块培养基，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，16～18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝，9～10天菌丝即可长满试管；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，温度16～18℃、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即吃料，5～7天菌丝即可封面；（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动8～10次，使菌丝均匀分布在菌种瓶中，继续培养3～5天，菌种瓶中有大量黄色菌核产生，即可下地播种，每亩用种量380～410瓶。...

【技术特征摘要】
1.一种羊肚菌菌种快速繁育方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）种菇选择：选取菇柄长1～2厘米、菇帽长3～4厘米、纹路清晰、褶皱紧密的羊肚菌种菇连根拔除，清除杂质后摊晾至含水量为60～70%备用；（2）无糖培养基制备：土豆去皮后切成颗粒，称取质量份数为200份的土豆颗粒，加水煮沸18～20分钟，趁热过滤取滤液，向滤液中补充热水后加入琼脂粉，搅拌溶解后趁热转入三角瓶中灭菌，再趁热取出三角瓶放入超净工作台或者接种箱内，消毒后将无糖培养基均匀分装到平板皿中，冷却备用；（3）菌种分离：将步骤（1）中的种菇，无糖培养基和分离器具灭菌后，切开种菇菌盖，铲取小块菌肉，接入平板皿中的无糖培养基内，16～18℃培养4～6天后即可看到组织块周围长出白色稀疏纤细的菌丝，7～8天后待菌丝长到直径1.5～2cm的菌落时即可提纯；（4）接种：从步骤（3）所得无糖培养基中挑取2块培养基，放入试管内的提纯培养基的两个三分点上，16～18℃下培养1天后即可看到菌种块周围长出白色稀疏的菌丝，9～10天菌丝即可长满试管；（5）羊肚菌原种制作：将试管中长满菌丝的提纯培养基切成片段，每片段接入1瓶灭菌后的原种培养基内，温度16～18℃、湿度60%条件下培养，第2天菌丝即吃料，5～7天菌丝即可封面；（6）摇瓶：菌丝封面后，在培养室内，紧握菌种瓶，上下摇动8～10次，使菌丝均匀分布在菌种瓶中，继续培养3～5天，菌种瓶中...

【专利技术属性】
技术研发人员：杨燕，罗金洲，郭建，陈小敏，
申请(专利权)人：杨燕，
类型：发明
国别省市：四川;51