双吲哚-三肽衍生物,其合成,抗血栓活性和制备抗血栓剂的应用制造技术

本发明专利技术公开了下式Leu-Asp-Val修饰的双吲哚乙酸，即2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp-ValA-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷，公开了它的合成，公开了它的抗血栓活性，因而本发明专利技术公开了它作为抗血栓抑制剂的临床应用前景。

【技术实现步骤摘要】
专利
本专利技术涉及Leu-Asp-Val修饰的双吲哚乙酸，即2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp-ValA-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷，涉及它的合成，涉及它的抗血栓活性，因而本专利技术涉及它作为抗血栓抑制剂的临床应用前景。本专利技术属于生物医药领域。
技术介绍
吲哚乙酸的衍生物吲哚美辛(Indomethacin)除具有抗炎以及解热镇痛作用外，还可以通过抑制血栓素TXA2的合成而抑制血小板的聚集。我们的前期专利技术披露，通式II的双吲哚衍生物(式中AA为氨基酸残基)在1nml/kg口服剂量下具有抗血栓活性。在急性毒性研究中，专利技术人发现剂量通式II的双吲哚衍生物的不能溶解。在通式II的双吲哚衍生物的代谢研究中，专利技术人发现大鼠的粪便中含较高量通式II的双吲哚衍生物。这些发现使专利技术人认识到，提高双吲哚衍生物的生物利用度至关重要。经过3年摸索，终于发现将通式II的乙基用3-羟基-4-甲氧基苯基代替，乙酰-AA用乙酰-Leu-Asp-Val替代可以达到改善生物利用度的目标。于是，专利技术人提出来本专利技术。
技术实现思路
本专利技术的第一个内容是提供下式Leu-Asp-Val修饰的双吲哚乙酸，即2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp-ValA-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷。本专利技术的第二个内容是提供2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp-ValA-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷的合成方法，该方法包括：(1)吲哚乙酸在乙醇中经浓硫酸催化，与异香草醛进行Pictet-Spengler缩合，生成2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酸乙酯-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷；(2)2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酸乙酯-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷在NaOH溶液(4N)中皂化反应生成2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酸-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷；(3)按照标准接肽方法制备Leu-Asp(OBzl)-Val-OBzl；(4)2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酸-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷与Leu-Asp(OBzl)-Val-OBzl偶联得到2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp(OBzl)-Val-OBzl-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷；(5)2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp(OBzl)-Val-OBzl-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷在甲醇中Pd/C催化氢解生成2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp-Val-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷。本专利技术的第三个内容是评价2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp-Val-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷的抗栓活性。附图说明图12，2’-双(1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp-Val-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷的合成路线.i)HOBt，DCC，NMM；ii)2NNaOH；iii)4N氯化氢-乙酸乙酯溶液；iv)Pb/c，H2，甲醇。具体实施方式为了进一步阐述本专利技术，下面给出一系列实施例。这些实施例完全是例证性的，它们仅用来对本专利技术进行具体描述，不应当理解为对本专利技术的限制。实施例1制备2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酸乙酯-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷(1)1g(5.71mmol)吲哚-3-乙酸溶于40ml无水乙醇，滴加1ml浓硫酸，活化20min。加500mg(3.29mmol)3-羟基4-甲氧基苯基醛，室温反应6h，减压浓缩至干。柱层析纯化(石油醚/丙酮＝9/1-5/1)，得到870mg(57％)标题化合物，为淡黄色糖浆。ESI/MS(m/e)：541[M+H]+；1HNMR(300MHz，CDCl3)：δ＝8.40(s，2H)，7.55(m，2H)，7.34(m，2H)，7.13(m，4H)，6.78(m，3H)，6.15(m，1H)，4.18(m，4H)，3.83(s，3H)，3.56(m，4H)，1.30(m，6H)。实施例2制备2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酸-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷(2)200mg(0.37mmol)2，2’-双(1H-吲哚-3-乙酸乙酯-2-基)-(3-羟基-4-甲氧基苯基)-甲烷(1)溶于5ml丙酮，4NNaOH调pH＝12。室温反应6h。冰浴下用饱和KHSO4调pH＝7，减压浓缩除去丙酮后，用饱和KHSO4调pH＝2，水层用50ml乙酸乙酯萃取3遍，合并乙酸乙酯层，用饱和NaCl洗至中性，无水Na2SO4干燥。减压过滤，滤液减压浓缩至干，得到172mg(98％)标题化合物，为紫色粉末。ESI/MS(m/e)：483[M-H]-；1HNMR(300MHz，DMSO-d6)：δ＝8.40(s，2H)，7.55(m，2H)，7.34(m，2H)，7.13(m，4H)，6.78(m，3H)，6.15(m，1H)，3.83(s，3H)，3.56(m，4H)。实施例3制备Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl将808mg(2.5mmol)Boc-Asp(OBzl)溶于20ml无水THF中，冰浴下加入338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC，活化30min。往里加558mg(2.3mmol)HCl·Val-Obzl，用N-甲基吗啉调节反应液pH至9，室温反应8h，原料点消失。滤除DCU，减压浓缩得到的油状物用乙酸乙酯溶解，依次用40ml饱和NaHCO3溶液洗3次，40ml饱和NaCl溶液洗3次，40ml饱和KHSO4洗3次，40ml饱和NaCl溶液洗3次，40ml饱和NaHCO3洗3次，40ml饱和NaCl溶液洗3次，乙酸乙酯层用Na2SO4干燥12h，滤除Na2SO4，滤液减压浓缩，得到1.12g(93％)标题化合物，为无色油状液体。ESI-MS(m/z)：512.4[M+H]+。实施例4制备HCl·Asp(OBzl)-Val-OBzl将1.28g(2.5mmol)Boc-Asp(OBzl)-Val-OBzl溶于少量的干燥乙酸乙酯中，冰浴下加入15ml氯化氢-乙酸乙酯溶液(4N)搅拌3h，原料点消失后减压浓缩，残留物用无水乙醚析晶，得到的目标化合物化合物直接用于下步反应。实施例5制备Boc-Leu-Asp(OBzl)-Val-OBzl将575mg(2.5mmol)Boc-Leu溶于20mL无水THF中，冰浴下加入338mg(2.5mmol)HOBt和619mg(3mmol)DCC，反应液活化30min。往里加入1.03g(2.3mmol)HCl·Asp(OBzl)-Val-OBzl，用N-甲基吗啉调反应液pH至9，室温搅拌8h。原料点消失后滤除DCU，减压浓缩得到的油状物用100mL乙酸乙酯溶解，依次用40ml饱和NaHCO3洗3次，40ml饱和NaCl溶液洗3次，40ml饱和KHSO4洗3次，40ml饱和NaCl溶液洗3次，40ml饱和NaHCO3洗3次，40ml饱和NaCl溶液洗3次，乙酸乙酯层用Na2本文档来自技高网...

【技术保护点】
下式的Leu‑Asp‑Val修饰的双吲哚乙酸，即2，2’‑双‑1H‑吲哚‑3‑乙酰‑Leu‑Asp‑ValA‑2‑基‑3‑羟基‑4‑甲氧基苯基‑甲烷

【技术特征摘要】
1.下式的Leu-Asp-Val修饰的双吲哚乙酸，即2，2’-双-1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp-ValA-2-基-3-羟基-4-甲氧基苯基-甲烷2.权利要求1的Leu-Asp-Val修饰的双吲哚乙酸，即2，2’-双-1H-吲哚-3-乙酰-Leu-Asp-ValA-2-基-3-羟基-4-甲氧基苯基-甲烷的制备方法，该方法包括：(1)吲哚乙酸在乙醇中经浓硫酸催化，与异香草醛进行Pictet-Spengler缩合，生成2，2’-双-1H-吲哚-3-乙酸乙酯-2-基-3-羟基-4-甲氧基苯基-甲烷；(2)2，2’-双-1H-吲哚-3-乙酸乙酯-2-基-3-羟基-4-甲氧基苯基-甲烷在4NNaOH溶液中皂化反应生成2，2’-双-1H-吲哚-3-乙酸-2-基-3-羟基-4-甲氧基苯基-甲烷；(3)按照标准接肽方法制备Le...

【专利技术属性】
技术研发人员：彭师奇，赵明，王玉记，吴建辉，信心，
申请(专利权)人：首都医科大学，
类型：发明
国别省市：北京;11