一种用于制备破伤风毒素的培养基及其应用制造技术

本发明专利技术公开了一种用于制备破伤风毒素的培养基及用其制备破伤风毒素的方法，所述的培养基中含有酵母来源的有机氮源，并且培养基的有机氮源中动物来源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<50％。本发明专利技术的培养基避免了引入疯牛病等动物源疾病的风险，并且可满足菌种复苏和种子培养，产毒也远高于现行标准的要求；利用此培养基制备破伤风毒素操作简单，成本低，利于工业化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物
，具体涉及一种用于制备破伤风毒素的培养基及应用其进行种子培养发酵制备破伤风毒素。
技术介绍
破伤风是由破伤风梭状芽胞杆菌引起的高死亡率的疾病，全球发病率不易确定，但估计每年40万到100万人感染破伤风。医学上尚无证据证明有有效的治疗方案，然而对于多数人来说使用疫苗可以得到有效的保护。破伤风是一种感染性疾病，不是传染性疾病。破伤风感染于伤口，缺氧条件下产生破伤风神经毒素(简称破伤风毒素)，通过血液带入血液系统，并扩散到全身神经途径，机体吸收进入神经系统，并作用于中枢神经系统，抑制神经递质释放，阻断神经与肌肉间信息传递，产生肌肉强直性与阵发性痉挛，形成牙关紧闭，角弓反张等症状。破伤风类毒素的使用有效的降低了该病的发病率，我国自破伤风预防接种以来，100％免疫者达到保护水平以上，其中80％以上的人在10-15年后抗体水平滴度依然在保护水平以上。破伤风一般使用含有牛心浸液或酪蛋白的培养基，增大了朊病毒性疾病(如疯牛病)的风险，且牛心浸液等原料需要每次制备，稳定性差，不利于规模化生产。US6558926B1公开了一种使用非动物来源的培养基来代替动物源培养基对破伤风梭菌(C.tetani)进行培养，并具体公开使用植物来源的培养基，特别是豆基来源培养基能够代替动物及来源培养基。在该专利中还披露了，在豆基来源培养基中添加酵母培养基会对破伤风毒素的产生起到抑制作用。该方法培养破伤风梭菌产毒周期长，产毒不稳定并且产量低，不能满足工业化要求。为克服现有技术的缺陷，本专利技术公开了一种破伤风梭菌的培养基及其在发酵制备破伤风毒素中的应用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种用于制备破伤风毒素的培养基，解决了制备破伤风毒素时产毒周期长，产毒产量低，不能满足现行标准要求的缺陷。本法专利技术另一目的在于提供一种利用此培养基制备破伤风毒素的方法，该方法操作简单，取材容易，成本低，利于工业化生产。因此，本专利技术一方面公开了一种用于制备破伤风毒素的培养基，所述的培养基中含有酵母来源的有机氮源，并且培养基的有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<50％。本专利技术中所述的酵母来源的有机氮源选自酵母粉、酵母水解物、酵母浸出物等中的一种或两种以上。优选的，所述的酵母来源的氮源选自酵母水解物、酵母浸出物中的一种或两种。更优选的，所述的酵母来源的氮源选自酵母浸出物。本专利技术所述的动物来源的有机氮源是指任何制备原料来源于动物的有机氮源。优选的，所述的动物来源的有机氮源选自牛心浸液、牛肉蛋白胨、牛肉膏、鱼粉等中的一种或两种以上。优选的，所述的动物来源的有机氮源选自牛心浸液、牛肉蛋白胨中的一种或两种。本专利技术所述的植物来源的有机氮源是指任何制备原料来源于植物的有机氮源。优选的，所述的植物来源的有机氮源选自黄豆饼粉、大豆蛋白胨、玉米浆中的一种或两种以上。优选的，所述的植物来源的有机氮源选自大豆蛋白胨。本专利技术中培养基的有机氮源中动物来源的有机氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<50％。US6558926B1对含有Hy-soy(植物来源的有机氮源)和Hy-yest(动物来源的有机氮源)进行了实验，其中Hy-soy在有机氮源中的质量百分比均≥50％，并认为Hy-soy培养基比Hy-soy与Hy-yest的混合培养基具有更高的毒素产量。然而，本专利技术惊奇的发现，当提高酵母来源的有机氮源，减少动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源的含量，破伤风毒素的产量将会明显提高。因而，优选的，本专利技术中培养基的有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<40％，优选的，本专利技术中培养基的有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<30％，更为优选的，培养基的有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分<10％，更为优选的，培养基的有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<5％，更为优选的，本专利技术培养基有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<2％，更为优选的，本专利技术培养基有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<1％。最为优选的，即本专利技术培养基有机氮源中有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比基本上为0。本专利技术所述的培养基中酵母来源的有机氮源含量为5-25g/L，优选的，酵母来源的有机氮源含量为7.5-15g/L，更为优选的，酵母来源的有机氮源含量为10g/L。本专利技术所述的培养基中还可以含有用于发酵培养的物质，用以维持菌种的生长发酵。在本专利技术的具体实施方式中，所述的培养基中还含有碳源，所述的碳源可以为本领域常用的碳源物质。在本专利技术的具体实施方式中，所述的培养基中含有葡萄糖和/或甘油。优选的，所述的培养基中含有葡萄糖含量为0.5-20g/L，更优选的，所述的培养基中含有葡萄糖含量为1-7g/L，最优选的，所述的培养基中含有葡萄糖含量为1-5.5g/L。在本专利技术的具体实施方式中，所述的培养基中还含有甘油，优选的，所述的培养基中甘油的含量为10-150ml/L，更为优选的，所述的培养基中甘油的含量为30-90ml/L，最为优选的，所述的培养基中含有甘油含量为60ml/L。本专利技术所述的培养基中还含有无机盐和/或微量元素。在本专利技术的具体实施方式中，所述的微量元素为生物素和/或尿嘧啶。优选的，所述的培养基中含有生物素5-20μg/L，更优选的，所述的培养基中含有生物素8-15μg/L，最优选的，所述的培养基中含有生物素10μg/L。优选的，所述的培养基中含有尿嘧啶5-20μg/L，更优选的，所述的培养基中含有尿嘧啶10-15.5μg/L，最优选的所述的培养基中含有尿嘧啶12.5μg/L。在本专利技术的具体实施方式中，所述的微量元素为乙酸钠、磷酸二氢钾、十二水合磷酸氢二钠中的一种或两种以上的组合。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述的培养基中含有结晶乙酸钠2-8g/L，优选的，所述的培养基中含有结晶乙酸钠3-7g/L，更优选的，所述的培养基中含有结晶乙酸钠5g/L。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述的培养基中含有磷酸二氢钾0.5-1.5g/L，优选的，所述的培养基中含有磷酸二氢钾0.8-1.3g/L，更优选的，所述的培养基中含有磷酸二氢钾1g/L。在本专利技术的一个具体实施方式中，所述的培养基中含有十二水合磷酸氢二钠0.5-1.5g/L，优选的，所述的培养基中含有十二水合磷酸氢二钠0.8-1.3g/L，更优选的，所述的培养基中含有十二水合磷酸氢二钠1g/L。本专利技术所述的培养基中还含有生长因子，所述的生长因子在培养基中按质量百分比含量为0.15-2％，更优选的，所述的生长因子在培养基中按质量百分比含量为0.3-1.6％，最优选的，所述的生长因子在培养基中按质量百分比含量为0.7-1.2％。在本专利技术的实施方式中，所述的生长因子包括烟草酸、胱氨酸、硫酸锌、七水合硫酸镁、硫胺素、核黄素、盐酸吡哆辛、泛酸钙、无水乙醇中的一种或两种以上的组合。所述的生长因子可以直接与培养基中的其它物质混合，也本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于制备破伤风毒素的培养基，其特征在于，所述的培养基中含有酵母来源的有机氮源，并且培养基的有机氮源中动物来源的有机氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<50％。

【技术特征摘要】
1.一种用于制备破伤风毒素的培养基，其特征在于，所述的培养基中含有酵母来源的有机氮源，并且培养基的有机氮源中动物来源的有机氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<50％。2.权利要求1所述的用于制备破伤风毒素的培养基，其特征在于，所述培养基的有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<30％。3.权利要求1所述的用于制备破伤风毒素的培养基，其特征在于，所述培养基的有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比<10％。4.权利要求1所述的用于制备破伤风毒素的培养基，其特征在于，所述培养基的有机氮源中动物来源的氮源和/或植物来源的有机氮源按质量百分比为0。5.权利要求1-4任意一项所述的用于制备破伤风毒素的培养基，所述的酵母来源的有机氮源选自酵母粉、酵母水解物、酵母浸出物等中的一种或两种以上。6.权利要求1所述的用于制备破伤风毒素的培养基，其特征在于，所述的培养基中酵母来源的有机氮源含量为5-25g/L。7.权利要求1所述的用于制备破伤风毒素的培养基，其特征在于，所述的培养基中含有葡萄糖和/或甘油，所述的培养基中葡萄糖含量为...

【专利技术属性】
技术研发人员：代帆，朱涛，史建明，常云松，宇学锋，邵忠琦，毛慧华，
申请(专利权)人：天津康希诺生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：天津;12