一种改良型EMSA试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及改良型EMSA试剂盒，包含盒体和位于盒体内的海绵垫，海绵垫上开设有容器孔，所述容器孔内放置装有试剂或探针的EP管，装有探针的EP管包含第一探针EP管、第二探针EP管和第三探针EP管，所述第一探针EP管内装有野生型生物素标记探针，第二探针EP管内装有野生型未标记竞争探针，第三探针EP管内装有突变型未标记竞争探针。本实用新型专利技术改良型EMSA试剂盒简化了EMSA实验操作流程，提高探针特异性，使EMSA实验变得简单方便。

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及生物
，具体涉及一种改良型EMSA试剂盒。
技术介绍
凝胶迁移或电泳迁移率检测(Electrophoreticmobilityshiftassay，EMSA)是研究启动子结合蛋白的经典方法，是一种用于定性和定量分析核酸蛋白相互作用的技术。EMSA基本过程是将32P或33P标记或非放射性标记的包含特异的DNA位点的DNA片段与DNA结合蛋白共同孵育后进行电泳分析，蛋白-DNA复合物通过EMSA与游离DNA分离开来，蛋白质阻碍与其所结合的DNA片段的移动性。因此，游离DNA比DNA-蛋白质复合物移动的更快，凝胶的图像可以揭示游离和结合的标记的DNA的位置。EMSA不仅简单、迅速、灵敏度高；且可以用竞争性试验来评价蛋白和核酸结合的特性。目前，EMSA可以用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白，并可通过加入特异性抗体来检测特定的蛋白质，EMSA还可以结合蛋白双向电泳及质谱技术进行未知蛋白的鉴定分析。随着EMSA技术的不断完善，其在生命科学研究及医学领域中扮演的角色愈加重要。JiangX等用EMSA方法证明了AP1能够结合在启动子的功能区域，并且调控LoVo细胞的PPARdelta的表达(Jiang,X.,etal.,TranscriptionfactorAP1bindsthefunctionalregionofthepromoterandregulatesgeneexpressionofhumanPPARdeltainLoVocell.TumourBiol,2013.6(34):p.3619-3625)。Katanin是参与微管切断ATP酶家族成员的蛋白质，它的两种异源二聚体结构由KATNA1和KATB1编码，而Elk1能够与微管相互作用，SelcukE等用EMSA方法证明Elk1能够结合KATB1启动子，调控其表达(Selcuk,E.,D.CanbazandA.Et,Katanin-p80genepromotercharacterizationandregulationviaElk1.PLoSOne,2013.7(8):p.e69423)。凝胶阻滞电泳分析显示青蒿素激活PXR与CYP3A4DNA结合的能力，表明CYP3A4的诱导是由青蒿素通过PXR的活化所介导(Hu,D.,etal.,Artemisininprotectsagainstdextransulfate-sodium-inducedinflammatoryboweldisease,whichisassociatedwithactivationofthepregnaneXreceptor.EurJPharmacol,2014(738C):p.273-284)。现如今的研究中，EMSA探针主要是合成生物素标记的单链探针，再通过变性、复性实验得到的双链探针。如KimJR等运用生物公司合成的3’末端被生物素标记的正、反单链EMSA探针，并在室温下复性得到双链探针(Kim,J.,S.MathewandP.Mathew,Blimp-1/PRDM1regulatesthetranscriptionofhumanCS1(SLAMF7)geneinNKandBcells.Immunobiology,2015.221(1):p.31-39)。又如GrycováA等、HsuFT等亦分别通过设计合成包含转录因子结合位点的单链EMSA探针，之后通过低温复性得到双链探针，进而开展凝胶迁移率实验(Aneta,G.,D.AnetaandD.Zdenek,Impuritiescontainedinantifungaldrugketoconazolearepotentactivatorsofhumanarylhydrocarbonreceptor.TOXICOLOGYLETTERS,2015.239(2):p.67-72；Hsu,F.,B.ChangandC.John,SynergisticEffectofSorafenibandRadiationonHumanOralCarcinomainvivo.SCIENTIFICREPORTS,2015.5)。上述EMSA探针的合成方法具有3点较明显的缺点：(1)通过复性得到的双链探针的比例难以保证，容易造成实验结果的假阴性；(2)复性不彻底的单链探针的显影亮度远高于蛋白-DNA复合物结合条带的显影亮度，造成假阴性，且双链探针比例较低影响阳性结果的显影；(3)需要合成大量的单链探针，成本较高。为了克服现有EMSA探针制备方法存在的缺陷，本申请的申请人在公开号为CN105506150A的中国专利技术专利申请中公开了一种EMSA方法及其探针和该探针的制备方法。该方法不采用传统的两条单链探针复性得到双链探针的方法，而是由单链探针PCR制得双链探针，不会出现由于复性不彻底造成的假阴性，也克服了单链自由探针带来的显影误差。但是，EMSA方法过程中需要多种试剂和探针，现有EMSA试剂盒不适用于这种改良型的EMSA方法。
技术实现思路
有鉴于此，有必要针对现有技术中的不足，提供一种改良型EMSA试剂盒。一种改良型EMSA试剂盒，包含盒体和位于盒体内的海绵垫，海绵垫上开设有容器孔，所述容器孔内放置装有试剂或探针的EP管，装有探针的EP管包含第一探针EP管、第二探针EP管和第三探针EP管，所述第一探针EP管内装有野生型生物素标记探针，第二探针EP管内装有野生型未标记竞争探针，第三探针EP管内装有突变型未标记竞争探针。优选地，所述容器孔有两组，第一组容器孔内放置封闭液EP管、洗涤液EP管和平衡液EP管，第二组容器孔内放置结合缓冲液EP管、蓝色上样缓冲液EP管、无色上样缓冲液EP管、第一探针EP管、第二探针EP管、第三探针EP管、装有Buffer1的EP管、装有Buffer2的EP管、装有PMSF的EP管、装有DTT的EP管和装有proteaseinhibitorcocktail的EP管。优选地，所述第一组容器孔位于海绵垫的中部及左部，所述第二组容器孔位于海绵垫的右部。优选地，所述第一组容器孔位于海绵垫的中部，所述第二组容器空位于海绵垫的两端。优选地，所述第一组容器孔包含6个容器孔，分为2或3排；所述第二组容器孔包含11个容器孔，分为2-4排。优选地，每个容器孔旁标有编号，其内EP管上标有相同的编号。优选地，所述第一组容器孔用于放置50mL的EP管，所述第二组容器孔用于放置1mL的EP管。优选地，所述封闭液EP管、洗涤液EP管和平衡液EP管各有两管；所述结合缓冲液EP管、蓝色上样缓冲液EP管、无色上样缓冲液EP管、第一探针EP管、第二探针EP管、第三探针EP管、装有Buffer1的EP管、装有Buffer2的EP管、装有PMSF的EP管、装有DTT的EP管和装有proteaseinhibitorcocktail的EP管各一管。优选地，所述结合缓冲液EP管内装有10×结合缓冲液，所述蓝色上样缓冲液EP管内装有10×蓝色上样缓冲液，所述无色上样缓冲液EP管内装有10×无色上样缓冲液，所述装有DTT的EP管内装有200×DTT，所述装有proteaseinhibitorcocktail的EP管内装有100×proteaseinhibi本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种改良型EMSA试剂盒，其特征在于：包含盒体和位于盒体内的海绵垫，海绵垫上开设有容器孔，所述容器孔内放置装有试剂或探针的EP管，装有探针的EP管包含第一探针EP管、第二探针EP管和第三探针EP管，所述第一探针EP管内装有野生型生物素标记探针，第二探针EP管内装有野生型未标记竞争探针，第三探针EP管内装有突变型未标记竞争探针。

【技术特征摘要】
1.一种改良型EMSA试剂盒，其特征在于：包含盒体和位于盒体内的海绵垫，海绵垫上开设有容器孔，所述容器孔内放置装有试剂或探针的EP管，装有探针的EP管包含第一探针EP管、第二探针EP管和第三探针EP管，所述第一探针EP管内装有野生型生物素标记探针，第二探针EP管内装有野生型未标记竞争探针，第三探针EP管内装有突变型未标记竞争探针。2.根据权利要求1所述的改良型EMSA试剂盒，其特征在于：所述容器孔有两组，第一组容器孔内放置封闭液EP管、洗涤液EP管和平衡液EP管，第二组容器孔内放置结合缓冲液EP管、蓝色上样缓冲液EP管、无色上样缓冲液EP管、第一探针EP管、第二探针EP管、第三探针EP管、装有Buffer1的EP管、装有Buffer2的EP管、装有PMSF的EP管、装有DTT的EP管和装有proteaseinhibitorcocktail的EP管。3.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述第一组容器孔位于海绵垫的中部及左部，所述第二组容器孔位于海绵垫的右部。4.根据权利要求2所述的试剂盒，其特征在于：所述第一组容器孔位于海绵垫的中部，所述第二组容器空位于海绵垫的两端。5.根据权利要求3或4所述的试剂盒，其特征在于：所述第一组容器孔包含6个容器孔，分为2或3排；所述第二组容器孔包含11个容器孔，分为2-4排。6.根据权利要求5...

【专利技术属性】
技术研发人员：王晓香，董先辉，张娟，曾健，周剑，
申请(专利权)人：广州伯信生物科技有限公司，
类型：新型
国别省市：广东;44