本发明专利技术公开了阔叶十大功劳提取物作为唯一活性成分在制备治疗慢性炎症创伤药物中的应用，慢性炎症创伤包括慢性乳腺炎、糖尿病足、烧伤、慢性溃疡、克罗恩病任意之一引发的创伤。阔叶十大功劳提取物在医学上可接受载体或赋形剂制备成片剂、胶囊剂、注射剂、外用溶液剂、洗剂、搽剂、灌肠剂、软膏剂、糊剂、贴剂、缓释或控释制剂。阔叶十大功劳提取物的制备方法为：以植物阔叶十大功劳的茎、叶为原料，水、乙醇或含水醇类提取、过滤、浓缩至小体积，冷冻干燥后备用。本发明专利技术相对于现有技术的有益效果：(1)药物制备工艺简单、操作合理；(2)通过体内外抗炎药理实验，明确了阔叶十大功劳提取物在治疗慢性炎症伤口上的应用价值，为其临床开发提供了理论和实验基础；(3)阔叶十大功劳的经济价值研究尚属空白，开展药用及药效研究，在利用的基础上实现有效保护，可以起到迁地保护及可持续发展作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及中药
，特别涉及从天然植物阔叶十大功劳(土黄连)中提取有效部位的制备方法及其在慢性炎症创伤中的应用。
技术介绍
全球范围内，慢性炎症伤口的患者大概有200多万人，并且每年以10-15％的速度递增。慢性难愈合创面是严重危害人民健康的常见多发病，如糖尿病足溃疡、克罗恩病、肠易激综合征以及小叶性肉芽肿性乳腺炎等。由于基础疾病复杂，患病部位伴有大量炎性细胞和因子浸润，组织损伤坏死严重，同时抗生素或激素治疗疗效有限，如何加速慢性炎症伤口愈合成为近年来亟待解决的临床难题。中医药是世界解决难治性疾病的出路，对慢性炎症患者机体的免疫调节更是中医药的独特优势。近十年来，大量实验证明多种中药复方及单味药均可从抑制NF-κB信号通路、阻断活性氧自由基爆发、平衡紊乱细胞因子、抑制MAPK生长信号通路等多方面平衡患者的免疫功能，具有多环节、多靶点和整体调节的特点，如蒲公英、金银花、鱼腥草等，但同时具有抗菌、消炎和生肌功能的单味中药并不多见。阔叶十大功劳又称土黄连，性味苦、寒、无毒，入药部位主要为其叶，目前对其药理活性研究较少，更无抗炎活性灭菌活性报道。化学成分分析显示此属植物以生物碱类化学成分为主，目前已分离鉴定出25种生物碱，除小檗碱、巴马亭、药根碱三种主要生物碱外，还有四氢药根、非洲防己碱、氧化小檗碱、小檗胺、黄连碱、尖刺碱、巴芦奇、黄树皮碱、阿莫灵、水叶碱、木兰花碱、木兰胺、黄小檗灵、异紫堇定、紫堇定、紫堇块茎碱、白蓬草坡、白蓬皱褶碱、海罂粟碱、异波尔定、异蒂巴和异粉防己碱等化学成分。但土黄连的活性药效成分及其药效作用目前尚无报道。在此基础上，本专利对阔叶十大功劳的化学成分、有效部位和生物学作用进行了全面研究。
技术实现思路
本专利技术的一个目的在于提供一种阔叶十大功劳提取物的制备方法；本专利技术的另一个目的在于提供阔叶十大功劳在促进慢性炎症伤口愈合药物中的应用。本专利技术具体采用如下技术方案：阔叶十大功劳提取物在制备药物中的应用，其特征在于，阔叶十大功劳提取物作为唯一活性成分在制备治疗慢性炎症创伤药物中的应用。所述的慢性炎症创伤包括慢性乳腺炎、糖尿病足、烧伤、慢性溃疡、克罗恩病任意之一引发的创伤。所述的阔叶十大功劳提取物在医学上可接受载体或赋形剂制备成片剂、胶囊剂、注射剂、外用溶液剂、洗剂、搽剂、灌肠剂、软膏剂、糊剂、贴剂、缓释或控释制剂。所述的阔叶十大功劳提取物的制备方法为：以植物阔叶十大功劳的茎、叶为原料，水、乙醇或含水醇类提取、过滤、浓缩至小体积，冷冻干燥后备用。所述阔叶十大功劳水提取物优选60-120℃水提取1-8次，更优选提取2-5次。所述阔叶十大功劳乙醇提取物，优选10-95％乙醇提取，更优选20-80％乙醇提取，更优选40-70％乙醇提取，提取方式可以选择采用渗漉、回流、浸渍或超声提取；优选提取1-8次，更优选提取2-5次。阔叶十大功劳提取物可进一步优选上大孔树脂，先用水洗脱，后依次用浓度逐渐增大的乙醇洗脱，收集高浓度乙醇洗脱物即为阔叶十大功劳活性部位。本专利技术所述阔叶十大功劳提取物进行体外抗炎实验筛选，利用脂蛋白(LPS)诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7建立体外抗炎模型，检测炎症因子环氧化酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)、IL-1β、IL-6的生成，验证因子浓度越低，活性越高，实验结果显示本专利技术所述的阔叶十大功劳水提物及醇提物对炎症因子的表达均有抑制作用。本专利技术所述阔叶十大功劳进行分子机制实验，各剂量组对NF-κB通路的激活均有不同程度的抑制作用，能显著阻断NF-κB向细胞核内转运，从而抑制其下游炎症因子的表达。本专利技术所述阔叶十大功劳提取物进行抗菌实验，显示阔叶十大功劳提取物各剂量组对金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌具有较好的抑菌活性，对绿脓杆菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌无抑制作用。本专利技术所述阔叶十大功劳提取物进行血管新生实验，显示阔叶十大功劳提取物各剂量组能显著促进人血管内皮细胞增殖活性，促进其迁移和成管能力，并能促进成纤维细胞分泌I型和III型胶原，鸡主动脉环实验也表明其在体内也具有促进血管新生能力。本专利技术所述阔叶十大功劳提取物进行体内临床个体实验，显示阔叶十大功劳提取物能够抑制乳腺炎性创面细菌生长、消除炎症、缓解炎症引起的红肿热痛现象，患者无任何不适，而且同时能够促进新生肉芽组织生长，促进炎症创口愈合。综上，本专利技术相对于现有技术的有益效果：(1)药物制备工艺简单、操作合理；(2)通过体内外抗炎药理实验，明确了阔叶十大功劳提取物在治疗慢性炎症伤口上的应用价值，为其临床开发提供了理论和实验基础；(3)阔叶十大功劳的经济价值研究尚属空白，开展药用及药效研究，在利用的基础上实现有效保护，可以起到迁地保护及可持续发展作用。阔叶十大功劳分布广泛，适应性强，一旦得到利用，可以规模化种植，其植物资源大大丰富，也可以增加农民的经济收益。附图说明图1：阔叶十大功劳提取物的体外抗炎活性实验。图2：阔叶十大功劳提取物的体内外促血管新生实验。具体实施方式结合具体实施方式对本专利技术作进一步详细描述，但本专利技术的内容并不仅仅限于所列举的实施方式。实施例1.阔叶十大功劳的制备阔叶十大功劳茎叶100g，用十倍水(W/V)煎煮提取2次，每次1小时，合并两次提取液，减压浓缩，冷冻干燥后得粗提物12.3g。阔叶十大功劳茎叶100g，用10倍量60％(W/V)乙醇回流提取2次，每次1小时，合并两次提取液，减压浓缩，冷冻干燥后得粗提物13.7g。采用HPLC技术对阔叶十大功劳提取物进行成分分析，分离柱为UltimateAQ-C18(250mm×4.6mm,5μm)，分离液由乙腈(A)和水(B)组成，分离方案为5％-8％Aat0-5min,8％-14％Aat5-30min,14％-50％Aat30-55min,50％-90％Aat55-60min，于250nm处观察化学指纹图谱。采用小檗碱作为标准品，其浓度在阔叶十大功劳中为0.014-0.018mg/ml。同时我们采用LC-MS技术鉴定了其中3个主峰的化学性质，经测定其分别为绿原酸、药根碱和木兰花碱。实施例2阔叶十大功劳提取物细胞毒性实验MTT法是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜(DMSO)能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在540-720nm处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛应用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞毒性实验以及肿瘤放射敏感性测定等。它的特点是灵敏度高、经济。而巨噬细胞是重要的炎症因子分泌细胞、其细胞功能与炎症密切相关。实验样品为阔叶十大功劳的水提物及60％乙醇提取物，阳性对照药为脂蛋白(LPS)，按照浓度梯度依次添加。取对数生长期状态良好的小鼠巨噬细胞Raw264.7接种于96孔板中，加入受试药物，分别培养48小时。将5mg/mlMTT加入96孔板中，每孔10μl，培养箱中反应4小时，吸去上清液，加入DMSO，每孔100μl，振摇5min，用酶标仪测定每孔吸光度值，测定波长570m，计算下拨抑制率。实验结果显示阳性药本文档来自技高网...
【技术保护点】
阔叶十大功劳提取物在制备药物中的应用，其特征在于，阔叶十大功劳提取物作为唯一活性成分在制备治疗慢性炎症创伤药物中的应用。
【技术特征摘要】
1.阔叶十大功劳提取物在制备药物中的应用，其特征在于，阔叶十大功劳提取物作为唯一活性成分在制备治疗慢性炎症创伤药物中的应用。2.根据权利要求1所述的阔叶十大功劳提取物在制备药物中的应用，其特征在于，慢性炎症创伤包括慢性乳腺炎、糖尿病足、烧伤、慢性溃疡、克罗恩病任意之一引发的创伤。3.根据权利要求1或2所述的阔叶十大功劳提取物在制备药物中的应用，其特征在于，阔叶十大功劳提取物在医学上可接受载体或赋形剂制备成片剂、胶囊剂、注射剂、外用溶液剂、洗剂、搽剂、灌肠剂、软膏剂、糊剂、贴剂、缓释或控释制剂。4.根据权利要求1所述的阔叶十大功劳提取物在制备药物中的应用，其特征在于，阔叶十大功劳提取物的制备方法为：以植物阔叶十大功劳的茎、叶为原料，水、乙醇或含水醇类提取、过滤、浓缩至小体积，冷冻干燥后备用。5.根据权利要求4所述的阔...
【专利技术属性】
技术研发人员：林毅，王志宇，司徒红林，王能，
申请(专利权)人：广东省中医院，
类型：发明
国别省市：广东;44
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