本发明专利技术公开了一种用于抑制孤儿核受体Nur77基因的siRNA分子，由如下序列的正义链和反义链组成：正义链：5’‑GGUGAAGGAAGUUGUCCGANn‑3’(SEQ ID NO:1)，反义链：5’‑UCGGACAACUUCCUUCACCNn‑3’(SEQ ID NO:2)。其中，正义链和反义链中的N相同或者不同，并且各自独立地是胞嘧啶C、尿嘧啶U、鸟嘌呤G、腺嘌呤A、脱氧胞嘧啶dC、脱氧鸟嘌呤dG、脱氧腺嘌呤dA或脱氧胸腺嘧啶dT；n代表N的个数，n是0、1或2。本发明专利技术的siRNA分子可用于制备抑制移植血管再狭窄的药物。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于生物医药领域，具体涉及一种用于抑制孤儿核受体Nur77的双链siRNA分子、及其在抗血管再狭窄方面的应用。
技术介绍
冠状动脉旁路移植术(Coronaryarterybypassgrafting，CABG)是目前治疗冠状动脉硬化等严重心血管疾病的重要方法，其中自体静脉如大隐静脉等由于解剖表浅、来源较多等因素，往往成为首选移植物。然而术后移植静脉内膜的增生，管腔的再狭窄甚至闭塞都严重影响了手术的远期疗效。大量临床和实验表明：静脉桥移植物1年和5年的通畅率分别为85％、78％，而10年后的通畅率仅为50％。因此，如何抑制移植血管内膜的增生，减少血管再狭窄是目前CABG急需解决的问题。近些年的研究表明，移植静脉桥再狭窄的机制主要是以内膜异常增厚为病理基础的，而血管内膜的增厚往往与多种因素有关，比如：手术中对移植血管的机械损伤、牵拉；术后血管平滑肌细胞(VSMC)的异常增殖、迁移；动脉血流冲击引起的血管张力的改变；巨噬细胞以及各类生长因子、化学因子等刺激，均会导致移植血管内膜及中膜的增厚。这些因素几乎都会刺激血管平滑肌细胞由静止表型转化为活动的增殖性表型，因此平滑肌细胞对于影响自体静脉移植远期的效果有着举足轻重的作用。研究表明，细胞核受体(Nuclearreceptor，NR)是在生物中广泛分布的一类受体超家族，其主要包括类固醇激素受体、维生素D受体、甲状腺激素、维甲酸受体以及孤儿核受体(orphannuclearreceptor，ONR)。其中，NR4A家族是近些年来发现的孤儿核受体中的一类，其属于立刻早期基因并且尚未发现明确的配体，主要通过蛋白表达和翻译后修饰对其活性进行调控，NR4A家族主要包括三个亚家族：Nur77(TR3、NGFI-B)，NOR-1以及Nurr-1。大量实验结果显示，Nur77在动脉粥样病变、移植血管内膜和中膜的平滑肌细胞、巨噬细胞以及内皮细胞中均有较高的表达。孤儿核受体Nur77/TR3是1988年Milbrandt等人通过神经生长因子诱导大鼠的嗜铬细胞瘤细胞系PC12所发现的，其参与体内众多因子的转录调控。Nur77可以与反应元件序列TGATATTTX6AAATTGCCA结合为二聚体，又可以与AAAGGTCA直接结合为单体。国外早些年的研究发现，Nur77可能参与了众多细胞凋亡的过程，例如，在鼠胸腺细胞发育过程中，Nur77似乎参与了对未成熟T细胞阴性选择的过程。同样，在人的肿瘤细胞中亦发现，Nur77/TR3参与诱导处理后的细胞凋亡。近些年来的实验发现，血清、LPS、TNF-α以及PDGF等均可诱导平滑肌细细胞和巨噬细胞中Nur77的表达，分别结扎野生型和过表达Nur77小鼠的颈总动脉4周，结果发现前者血管内膜增生显著低于后者，同时在粥样硬化的患者血管中发现高表达Nur77的巨噬细胞和平滑肌细胞，因此，部分学者认为Nur77参与了巨噬细胞的脂质沉积并且抑制了巨噬细胞向泡沫细胞的转变。与巨噬细胞一样，血管平滑肌细胞亦参与了血管狭窄的病变。平滑肌细胞具有两种表型：静止型以及活动型。生理情况下，平滑肌细胞处于静止状态，而当局部炎症或是各种化学炎症因子或者血管损伤刺激后，平滑肌细胞表型发生转变，传统的观点认为平滑肌细胞的增殖和迁移以及细胞外基质的合成是血管再狭窄的重要机制。上述研究预示，抑制Nur77表达或许能够防止血管再狭窄的发生。因此，开发出能够抑制Nur77基因表达的药物对于冠状动脉旁路移植术具有重要意义。RNA干扰(RNAinterference,RNAi)技术开辟了一个全新的治疗领域，RNAi在医药领域有广阔的应用前景，如抗病毒、抗肿瘤和抗炎症等。RNA干扰(RNAinterference,RNAi)是1998年首次报道的一种转录后的基因沉默效应，是指在生物体细胞内，外源性或内源性的双链RNA识别有同源序列的mRNA，对其特异性切割，从而阻断其翻译的过程(Nature.1998,391:806-811)。RNAi发挥基因沉默作用的机制是：长dsRNA进入细胞后，被Dicer酶结合并切割。Dicer酶的切割产物通常是长度为20-25bp，且在每个链的3’末端有2个核苷酸悬垂的小干扰RNA(smallinterferingRNA，siRNA)。siRNA双链中的一条，一般是反义链掺入到RNA-诱导的沉默复合物中(RISC)，与互补的序列配对。RISC首先介导siRNA双链解旋，与RISC耦合的单链的siRNA以序列特异的方式与靶mRNA结合，之后由RISC的催化组分切割靶mRNA。切割靶mRNA可以抑制其翻译，最终抑制转录该mRNA的基因的表达。与传统的抑制基因表达的反义寡核苷酸技术和核酶技术相比，siRNA沉默基因表达的效果要强大数十倍至数百倍，现已被证实在多种病毒感染性疾病和肿瘤的治疗中具有极大的潜力，是理想的阻断基因表达的治疗手段。目前国际上已有数十种siRNA药物进入临床阶段。因为孤儿核受体Nur77与血管再狭窄相关，可以以Nur77基因作为标靶，开发出相应的siRNA药物，用于抑制或降低血管再狭窄的发生，达到治疗疾病的目的。
技术实现思路
因此，本专利技术的目的在于提供一种特异性靶向孤儿核受体Nur77基因的siRNA分子，其可以阻断Nur77基因的mRNA转录，阻止基因的翻译，从而根本上抑制Nur77的表达，最终达到抑制发生血管再狭窄的目的。本专利技术的技术方案包括：一种靶向孤儿核受体Nur77基因的siRNA分子，其为双链分子，由如下序列的正义链和反义链组成：正义链：5’-GGUGAAGGAAGUUGUCCGANn-3’(SEQIDNO:1)，反义链：5’-UCGGACAACUUCCUUCACCNn-3’(SEQIDNO:2)。其中，正义链和反义链中的N相同或者不同，并且各自独立地是胞嘧啶C、尿嘧啶U、鸟嘌呤G、腺嘌呤A、脱氧胞嘧啶dC、脱氧鸟嘌呤dG、脱氧腺嘌呤dA或脱氧胸腺嘧啶dT；n代表N的个数，n是0、1或2。对于上述双链RNA分子而言，优选所述N为dT，且优选n为0或2。换言之，上述双链RNA分子的主干序列为：正义链：5’-GGUGAAGGAAGUUGUCCGA-3’(SEQIDNO:3)，反义链：5’-UCGGACAACUUCCUUCACC-3’(SEQIDNO:4)。优选上述双链RNA分子由如下序列的正义链和反义链组成：正义链：5’-GGUGAAGGAAGUUGUCCGAdTdT-3’(SEQIDNO:5)，反义链：5’-UCGGACAACUUCCUUCACCdTdT-3’(SEQIDNO:6)。本专利技术的另一目的在于提供上述双链RNA分子在制备抗血管再狭窄药物中的用途。上述的抗血管再狭窄药物尤其用于抑制移植血管内膜增生。相对应地，本专利技术的再一目的在于提供一种抗血管再狭窄、尤其是用于移植血管内膜增生的药物，其包含本专利技术的双链RNA分子。优选地，上述药物是适用于注射的剂型或凝胶剂。优选地，上述药物还包含必要的佐剂。体外实验证明，本专利技术的双链RNA分子可特异性地下调孤儿核受体Nur77基因表达，达到抑制移植血管再狭窄发生的目的。所述的移植血管再狭窄尤其是指冠状动脉旁路移植术(CABG)或经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后的血管再狭窄。附图说明本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于抑制孤儿核受体Nur77基因的双链siRNA分子，由如下序列的正义链和反义链组成：正义链：5’‑GGUGAAGGAAGUUGUCCGANn‑3’(SEQ ID NO:1)，反义链：5’‑UCGGACAACUUCCUUCACCNn‑3’(SEQ ID NO:2)。其中，正义链和反义链中的N相同或者不同，并且各自独立地是胞嘧啶C、尿嘧啶U、鸟嘌呤G、腺嘌呤A、脱氧胞嘧啶dC、脱氧鸟嘌呤dG、脱氧腺嘌呤dA或脱氧胸腺嘧啶dT；n代表N的个数，n是0、1或2。
【技术特征摘要】
1.一种用于抑制孤儿核受体Nur77基因的双链siRNA分子，由如下序列的正义链和反义链组成：正义链：5’-GGUGAAGGAAGUUGUCCGANn-3’(SEQIDNO:1)，反义链：5’-UCGGACAACUUCCUUCACCNn-3’(SEQIDNO:2)。其中，正义链和反义链中的N相同或者不同，并且各自独立地是胞嘧啶C、尿嘧啶U、鸟嘌呤G、腺嘌呤A、脱氧胞嘧啶dC、脱氧鸟嘌呤dG、脱氧腺嘌呤dA或脱氧胸腺嘧啶dT；n代表N的个数，n是0、1或2。2.如权利要求1所述的双链siRNA分子，其特征在于，所述的n为0，即正义链：5’-GGUGAAGGAAGUUGUCCGA-3’(SEQIDNO:3)，反义链：5’-UCGGACAACUUCCUUCACC-3’(SEQ...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘锟，叶青，王霏，倪启超，何俊凤，
申请(专利权)人：南通大学附属医院，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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