【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及生物化学
,具体涉及一种采用免疫竞争法、磁微粒化学发光法测定人体中甘胆酸(CG)含量的试剂盒。
技术介绍
甘胆酸(Cholyglycine,CG),是由胆酸和甘氨酸结合而成的结合型胆酸,是胆汁酸的主要成分之一。胆固醇在肝细胞内经过极其复杂的酶促反应,转变成初级胆汁酸,包含胆酸(CA)和鹅去氧胆酸(CDCA)。当肝细胞受损伤,肝有疾病时,就引起甘胆酸代谢和循环紊乱,血清中的肝胆酸量就增加,且较ALT、AST、总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、谷酰转肽酶(GGT)及血清白蛋白(ALB)等常规肝功能指标更为敏感。各种肝脏疾病如:肝癌、肝硬化、急性肝炎、慢性肝炎等患者的甘胆酸水平均显著升高,因此甘胆酸可作为诊断这些疾病的良好指标。同时甘胆酸的检测对孕妇妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)的诊断具有重要的临床意义。目前已知的甘胆酸测定方法有放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附法(ELISA)、胶乳增强比浊法等。放射免疫法步骤繁琐,试剂价格昂贵,需使用配套的仪器且存在放射性污染。酶联免疫吸附法存在检测时间长、操作复杂、重复性差、不适于急诊和临床病人及时诊断的需要。胶乳增强免疫比浊法操作简单、快速,但是灵敏度低、低值重复性差。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是克服现有技术的缺陷,提供一种检测血清中甘胆酸含量的试剂盒,为了解决上述技术问题,本专利技术提供了如下的技术方案:本专利技术的试剂盒包括抗试剂A、抗试剂B、磁微粒试剂、校准品、质控品、发光底物液和浓缩洗液;其中,所述抗试剂A是碱性磷酸酶标记的甘胆酸衍生物,含BSA的抗试剂A缓冲液;所述碱 ...
【技术保护点】
一种检测血清中甘胆酸含量的试剂盒,其特征在于,包括:抗试剂A、抗试剂B、磁微粒试剂、校准品、质控品、发光底物液;其中,所述抗试剂A是碱性磷酸酶标记的甘胆酸衍生物,含BSA的抗试剂A缓冲液;所述碱性磷酸酶标记的甘胆酸衍生物是通过偶联剂将甘胆酸衍生物和碱性磷酸酶偶联后获得,浓度为0.8ug/mL;所述抗试剂A缓冲液为10~100mM的Tris‑HCl溶液,pH值为7‑8,含有浓度为2‑6wt%的PEG‑6000、0.7‑0.9wt%的氯化钠、0.05‑0.1wt%的叠氮钠、0.3wt%的PC‑300、0.1‑1wt%牛血清白蛋白以及20mMEDTA;所述抗试剂B是FITC标记的甘胆酸抗体,含BSA的抗试剂B缓冲液;所述FITC标记的甘胆酸抗体是通过偶联剂将甘胆酸抗体和FITC偶联后获得;所述抗试剂A缓冲液为10~100mM的Tris‑HCl溶液,pH值为7‑8,0.12wt%的ANS、2‑6wt%的PEG‑6000、0.7‑0.9wt%的氯化钠、0.05‑0.1wt%的叠氮钠、0.3wt%的PC‑300、0.1‑1wt%牛血清白蛋白以及20mM EDTA;所述磁微粒试剂是包被有FITC抗体 ...
【技术特征摘要】
1.一种检测血清中甘胆酸含量的试剂盒,其特征在于,包括:抗试剂A、抗试剂B、磁微粒试剂、校准品、质控品、发光底物液;其中,所述抗试剂A是碱性磷酸酶标记的甘胆酸衍生物,含BSA的抗试剂A缓冲液;所述碱性磷酸酶标记的甘胆酸衍生物是通过偶联剂将甘胆酸衍生物和碱性磷酸酶偶联后获得,浓度为0.8ug/mL;所述抗试剂A缓冲液为10~100mM的Tris-HCl溶液,pH值为7-8,含有浓度为2-6wt%的PEG-6000、0.7-0.9wt%的氯化钠、0.05-0.1wt%的叠氮钠、0.3wt%的PC-300、0.1-1wt%牛血清白蛋白以及20mMEDTA;所述抗试剂B是FITC标记的甘胆酸抗体,含BSA的抗试剂B缓冲液;所述FITC标记的甘胆酸抗体是通过偶联剂将甘胆酸抗体和FITC偶联后获得;所述抗试剂A缓冲液为10~100mM的Tris-HCl溶液,pH值为7-8,0.12wt%的ANS、2-6wt%的PEG-6000、0.7-0.9wt%的氯化钠、0.05-0.1wt%的叠氮钠、0.3wt%的PC-300、0.1-1wt%牛血清白蛋白以及20mMEDTA;所述磁微粒试剂是包被有FITC抗体的羧基磁微粒混悬液;所述校准品和质控品由人源性甘胆酸和缓冲液组成,缓冲液为浓度50-200mM的Tris-HCl溶液,含有浓度为0.1~1wt%的牛血清白蛋白、0.05~0.5wt%的PC-300、5~50mM的乙二胺四乙酸二钠;所述发光底物液是含有AMPPD的Tris-HCl溶液,所述Tris-HCl溶液的pH值为8.0~10.0,含有浓度20V%的AMPPD、16wt%的NaCl、0.4wt%的KCl和2.42wt%的Tris。2.根据权利要求1所述的检测血清中甘胆酸含量的试剂盒,其特征在于,所述偶联剂选自碳化二亚胺、戊二醛、二异氰酸化合物或二卤化二硝基苯中的一种或多种。3.根据权利要求3所述的检测血清中甘胆酸含量的试剂盒,其特征在于,所述FITC抗体选自人血清白蛋白、牛血清白蛋白、牛转铁蛋白和血蓝蛋白中的一种或多种。4.根据权利要求1所述的检测血清中甘胆酸含量的试剂盒,其特征在于,所述羧基磁微粒为核壳结构,直径范围为100~4500nm,浓度为1~5mg/mL;所述羧基磁微粒的表面带有由羧基、氨基、羟基、酰肼基或氯甲基的一种或多种修饰的化学基团;所述FITC抗体通过羧基磁微粒携带的基团键合在羧基磁微粒表面。5.根据权利要求1-4任一项所述的检测血清中甘胆酸含量的试剂盒,其特征在于,还包括浓缩洗涤液,所述浓缩洗涤液是含有吐温20的Tris-HCl溶液,pH值为7.4,含有浓度16wt%的NaCl、0.4wt%的KCl、2.42wt%的Tris,使用时用双蒸水15倍稀释。6.如权利要求5所述的检测血清中甘胆酸含量的试剂盒的制备方法,其特征在于,包括如下步...
【专利技术属性】
技术研发人员:季连星,刘振国,王赟,孙裔雷,孔晓凯,丁文健,夏振伟,
申请(专利权)人:泰州泽成生物技术有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏;32
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