一种用于检测鼻咽癌的试剂盒及其检测方法技术

本发明专利技术公开了一种用于检测鼻咽癌的试剂盒。本发明专利技术提供的核酸适体，与人NASG蛋白具有较好的亲和能力。利用本发明专利技术的核酸适体，可以捕获鼻咽中的NASG蛋白，通过其含量的变化来检测鼻咽癌，将其制备成为相应的试剂盒，将用于鼻咽癌的筛查。利用本发明专利技术的试剂盒，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种用于检测鼻咽癌的试剂盒及其检测方法。
技术介绍
鼻咽癌(NPC)是我国南方常见的恶性肿瘤，广东为高发区。鼻咽癌是指鼻咽粘膜上皮发生的癌肿，大多为低分化鳞癌,其恶性度高，发病部位隐蔽，特别是在咽隐窝和鼻咽顶部者，早期症状不明显，因而难以早期发现，误诊误治率较高，可达12.2％,因而在确诊的鼻咽癌中，其5年生存率长期徘徊在50％～60％左右。对鼻咽癌进行早期诊断以便早期治疗，提高患者的生存率一直是NPC临床研究的重要课题之一。目前对鼻咽癌早期的检测方法有多种，包括有：EB病毒血清学标记物如病毒壳抗原一免疫球蛋白A(EBVCA21gA)、EB病毒潜伏膜蛋白、EB病毒早期复合抗原(EBV2-EA)IgG的抗体检测，鼻咽癌相关肿瘤标记物如白细胞介素、肿瘤坏死因子、细胞间黏附分子、CYFRA2121以及端粒酶等的检测。虽然这些指标的单独或联合应用为鼻咽癌的诊断提供了有用的信息，然而它们均缺乏足够的灵敏度与特异性。NASG蛋白是一种分泌性蛋白(基因序列登录号：AF439448.1)，在正常人及鼻咽部慢性炎症患者的鼻咽组织中表达丰富，而在鼻咽癌患者的鼻咽组织中表达显著下调。因而如何通过检测NASG蛋白的含量以及如何无创伤地获取NASG蛋白则是建立早期、无创伤检测鼻咽癌的有效方法。核酸适体(Aptamer,又称适配体,适配子)是能高亲和性、高特异性的结合某种生物革El标的单链寡核酸分子(ssDNA或ssRNA)。核酸适体是通过指数富集配体系统进化技术(Systemat1cEvolut1onofL1gandsbyExponent1alenr1chment,SELEX)从人工合成的DNA/RNA文库中筛选得到的能够高度特异性结合靶标分子的单链DNA/RNA。已报道核酸适体的靶标包括金属离子、有机小分子、多肽、蛋白质、细胞甚至组织等。核酸适体的分子识别功能与抗体类似，具有与抗体分子相当甚至更强的靶标识别能力，但与抗体相比具有很多优良的特性，如分子量小，能批量生产，不易失活，无免疫原性、容易合成与标记、快速的穿透组织、良好的代谢动力学、不同批次之间产品不会存在差异和具有很好化学稳定性，在生物检测、疾病诊断治疗等领域具有重要的应用前景。
技术实现思路
本专利技术的目的是提供一种特异结合NASG的核酸适体及其试剂盒。本专利技术提供的核酸适体，是序列表的序列1-15任一项所示的单链DNA。所述核酸适体与NASG蛋白具有较好的亲和能力。还可将所述核酸适体进行修饰或改造，得到所述核酸适体的衍生物。所述核酸适体的衍生物可为如下任意一种：a)将所述核酸适体删除部分或增加部分互补的核苷酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；b)将所述核酸适体进行核苷酸取代或部分修饰，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；c)将所述核酸适体的骨架改造为硫代磷酸酯骨架，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；d)将核酸适体改造为肽核酸，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物；e)将所述核酸适体连接上荧光、放射性和治疗性物质后，得到的与所述核酸适体具有相同功能的核酸适体的衍生物。所述核酸适体可用于制备检测NASG的试剂盒。利用本专利技术的核酸适体，可以捕获中鼻咽组织中的中的NASG，从而用于相关鼻咽癌筛查。利用本专利技术的核酸适体，具有高灵敏、成本低、易制备、易保存的优点。本专利技术具有很高的应用价值。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本专利技术，但并不限定本专利技术。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。实施例1NASG蛋白的获得将AF439448.1所示的NASG基因通过本领域常规的真核表达方式进行表达，获得了相应的目的多肽蛋白。实施例2核酸适体的筛选和制备设计两端包含大约20个核苷酸、中间包括40个核苷酸的随机核酸文库如下：5‘-TAGCATGCAATGCCAGTATAG(N40)AACGTGCATGAACTATGAGT-3’；N40代表40个随机核苷酸。将单链DNA文库扩增为双链DNA,产物经2％琼脂糖凝胶电泳并切胶回收纯化；以回收的双链DNA为模板，体外转录出单链RNA随机文库，转录产物经PAGE纯化。75μgRNA文库经硝酸纤维素膜反筛去除与膜结合的RNA分子，然后与2ugNASG蛋白，37℃孵育30min，反应液经硝酸纤维素膜滤过，洗涤滤膜；然后将滤膜剪碎，置于洗脱缓冲液(6mol/L尿素，0.55mol/L醋酸铵，l.5mmol/LEDTA,0.15％SDS)中煮沸5min，离心，取上清，无水乙醇沉淀RNA，并重新溶解于20μ1DEPC水中；以RNA为模板RT-PCR扩增双链DNA，体外转录出RNA文库用于下一轮筛选；每轮筛选过程中RT-PCR得到双链DNA文库，以该双链DNA为模板体外转录出RNA适配子库，筛选共进行10轮。得到了15个适配子，其序列分别为SEQIDNO:1-15所示。具体序列如下所示：NASG-1：TAGCATGCAATGCCAGTATAGAATATTCAAGATTTCTATAACACATTCAGATTCCAACATTAACGTGCATGAACTATGAGT(SEQIDNO:1)NASG-2：TAGCATGCAATGCCAGTATAGATCGCAACTCCATCACGCATCCCTACTCTTATAGATCACCAACGTGCATGAACTATGAGT(SEQIDNO:2)NASG-3：TAGCATGCAATGCCAGTATAGCCTCGAACGCACATTACATACATCTTAGTAATTATCTTTAAACGTGCATGAACTATGAGT(SEQIDNO:3)NASG-4：TAGCATGCAATGCCAGTATAGTTTCTTTCACATATTCGCAATACAACAAACCTCTGCCACAAACGTGCATGAACTATGAGT(SEQIDNO:4)NASG-5：TAGCATGCAATGCCAGTATAGCATTATATTCTTATCCACGCCTCTATCTACACTCAAAGAAAACGTGCATGAACTATGAGT(SEQIDNO:5)NASG-6：TAGCATGCAATGCCAGTATAGAATCCTTACGCTCGCTCATTAATCACCACCTATAAATTCCAACGTGCATGAACTATGAGT(SEQIDNO:6)NASG-7：TAGCATGCAATGCCAGTATAGCCAAACAACTCAAGATAATCACTATTACAGAACAACAACTAACGTGCATGAACTATGAGT(SEQIDNO:7)NASG-8：TAGCATGCAATGCCAGTATAGATATAGATCATACAAATATATTATTCCGCCTACAATTCCAAACGTGCATGAACTATGAGT(SEQIDNO:8)NASG-9：TAGCATGCAATGCCAGTATAGTATCTTAATCAACGCATTACAAGACCTATAATTAACATACAACGTGCATGAACTATGAGT(SEQIDNO:9)NASG-10：TAGCATGCAATGCCAGTATAGTTACTCATCGCCTCTCCACCTACCGCCTATA本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用于鼻咽癌检测的试剂盒，其含有特异结合NASG蛋白的核酸适体。

【技术特征摘要】
1.一种用于鼻咽癌检测的试剂盒，其含有特异结合NASG蛋白的核酸适体。2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所...

【专利技术属性】
技术研发人员：张玲，
申请(专利权)人：张玲，
类型：发明
国别省市：广东;44