一种百香果的脱毒方法技术

本发明专利技术公开了一种百香果的脱毒方法，其包括如下步骤：1、种子热处理；2、种子消毒处理；3、砧木培养；4、茎尖消毒处理；5、茎尖热处理；6、接穗繁殖；7、茎尖嫁接；8、生根培养；9、嫁接苗移栽；10、PCR检测。通过该方法可以全部脱除百香果花叶病毒CMV和木质化病毒PWV，解决了以往百香果种苗脱毒难的问题，经过2年试验，百香果增产率达到50%，值得在生产实际中应用推广。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种经济作物栽培技术，尤其是一种百香果脱毒方法。
技术介绍
百香果（PassifloraedulisSims），学名西番莲，西番莲科，西番莲属，为热带、亚热带多年生常绿藤本浆果类果树，当前百香果病虫害发生严重，表现在：种植后根部腐烂、成株易受病虫害侵染，造成严重减产。据分析，这与百香果幼苗自身携带病毒有关，百香果花叶病毒CMV和木质化病毒PWV为危害百香果幼苗的两种最主要病毒。传统的百香果脱毒方法是：采用药剂病毒灵、黄糖醋等喷洒茎叶，脱毒不完全，环境适合时百香果花叶病毒CMV和木质化病毒PWV仍发生严重，导致该种植方法植株矮小，茎尖和叶片皱缩，产量低，品质差、畸形果较多。目前针对百香果种苗脱毒的研究不少，如中国专利：申请公布号CN105284314A的专利：一种百香果脱毒苗的培育方法，步骤包括：场地选择→构建择育苗棚→构建苗床→安装自动喷雾系统→制备装有轻基质营养土的营养袋→制备离体材料→离体材料脱毒→制备生根液→浸泡生根液→营养袋管理(对基质的湿度进行调整及消毒)→扦插→启动自动喷水系统进行湿度管理→幼苗管理→出圃。还有申请公布号为CN105340744A的专利：公开了一种百香果组织培养育苗的方法，其包括：基本培养基的配制、外植体的消毒、丛生芽诱导培养、继代增殖培养、生根诱导培养以及移栽定植。还有申请公布号为CN105706935A的专利公开了一种百香果脱毒苗的培养方法，通过植株外植体前处理、基础培养、脱毒培养、增殖组培快繁培养、生根培养5个步骤获得百香果脱毒苗。以上三个公开的专利通过对百香果外植器官进行消毒处理后离体培养来获得脱毒种苗，步骤简单，但在获取外植体时难以区分是否已经为病毒携带植株，另外单一的茎尖脱毒难以取得理想的脱毒效果，因此，如何从多方面对百香果种苗进行消毒处理，从而获得百香果的脱毒苗，还值得进一步研究。
技术实现思路
本专利技术的目的是针对现有技术的上述不足，提供一种百香果脱毒方法，使脱毒后百香果苗木生长快，结果期缩短2个月，提高产量和品质。本专利技术的技术方案是这样实现的：一种百香果的种苗脱毒方法，包括以下步骤：（1）种子热处理：将百香果果实中充分发育的种子取出，放进砂布内包好，先在40～46℃左右湿水中浸泡5～10分钟，再放入50～60℃热水中处理50～60min，取出后吸干水分。进一步的，将百香果种子在43～45℃左右湿水中浸泡5～8分钟，再放入50～57℃热水中处理52～58min。更进一步的，将百香果种子在45℃左右湿水中浸泡6分钟，再放入50～57℃热水中处理55min。（2）种子消毒：在无菌条件下，将热处理过的种子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用无菌水冲洗3～5次。（3）砧木培养：剥去种皮，接种于砧木培养基上，每支试管接种2～3粒种子，置于黑暗恒定27±2℃温度下发芽培养，待幼苗生长13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室内散射光下培养1～2t；所述砧木培养基组成为：MS无机盐类+3％蔗糖+1%琼脂，pH5.7。（4）茎尖消毒：从果园中结果母树上选择生长旺盛的新梢，取枝顶端约5cm嫩梢，在室内剪成1～1.5cm长，用自来水冲洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉过滤液中消毒5min，以无菌水冲洗3～5次。（5）茎尖热处理：茎尖热处理先在40～50℃左右湿水中浸泡5～10min，再放入55～56℃热水中处理50～60min。进一步的，将茎尖在42～48℃左右湿水中浸泡5～8min，再放入50～57℃热水中处理52～58min。更进一步的，将茎尖在45℃左右湿水中浸泡6min，再放入50～57℃热水中处理55min。（6）接穗繁殖：切取1～2mm茎尖，带2～3个叶原基，接种在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培养基上。（7）茎尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：将砧木苗从试管内取出，切去过长的根，缩短至4～6cm，切去茎的上部使上胚轴剩下约l～1.5cm，把子叶和腋芽去掉，在上胚轴前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剥好的带2～3个叶原基，高约0.2～0.4mm的茎尖切下，立即转接到制备好的倒“T”形缺口上；得无毒苗。（8）生根培养：嫁接培养后的百香果脱毒苗接种至生根培养基中，进行生根培养30d～40d；所述生根培养基配方，按质量百分数计，蔗糖2%～3%、琼脂0.8%～1.0%、MS+6-BA0.08%～0.12%、γ-PGA0.1%～0.15%、余量为水。（9）嫁接苗移栽培养：当植株根长至2～3cm时，进行驯化移栽，移栽于营养钵中，10～15d后可移栽到果园，然后按照防虫网室标准建立基地管理，防治蚜虫、红蜘蛛和介壳虫的为害。（10）PCR检测：经PCR检测，确认苗木无病毒可以出圃。本专利技术的有益效果为：采用本专利技术方法对百香果进行脱毒处理，可以有效脱除百香果花叶病毒CMV和木质化病毒PWV，脱毒苗无花叶、斑驳、皱缩，生长快，结果早，产量高，脱毒率高，成活率高。具体实施方式实施例1：（1）种子热处理：将百香果果实中充分发育的种子取出，放进砂布内包好，先在40℃左右湿水中浸泡6分钟，再放入50℃热水中处理55min，取出后吸干水分。（2）种子消毒：在无菌条件下，将热处理过的种子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用无菌水冲洗3～5次。（3）砧木培养：剥去种皮，接种于砧木培养基上，每支试管接种2～3粒种子，置于黑暗恒定27±2℃温度下发芽培养，待幼苗生长13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室内散射光下培养1～2t；所述砧木培养基组成为：MS无机盐类+3％蔗糖+1%琼脂，pH5.7。（4）茎尖消毒：从果园中结果母树上选择生长旺盛的新梢，取枝顶端约5cm嫩梢，在室内剪成1～1.5cm长，用自来水冲洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉过滤液中消毒5min，以无菌水冲洗3～5次。（5）茎尖热处理：茎尖热处理先在40℃左右湿水中浸泡6min，再放入50℃热水中处理55min。（6）接穗繁殖：切取1～2mm茎尖，带2～3个叶原基，接种在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培养基上。（7）茎尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：将砧木苗从试管内取出，切去过长的根，缩短至4～6cm，切去茎的上部使上胚轴剩下约l～1.5cm，把子叶和腋芽去掉，在上胚轴前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剥好的带2～3个叶原基，高约0.2～0.4mm的茎尖切下，立即转接到制备好的倒“T”形缺口上；获得无毒苗18.5%，成活率85.8%。（8）生根培养：嫁接培养后的百香果脱毒苗接种至生根培养基中，进行生根培养30d～40d；所述生根培养基配方，按质量百分数计，蔗糖2%～3%、琼脂0.8%～1.0%、MS+6-BA0.08%～0.12%、γ-PGA0.1%～0.15%、余量为水。（9）嫁接苗移栽培养：当植株根长至2～3cm时，进行驯化移栽，移栽于营养钵中，10～15d后可移栽到果园，然后按照防虫网室标准建立基地管理，防治蚜虫、红蜘蛛和介壳虫的为害。（10）PCR检测：经PCR检测，确认苗木无本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种百香果的种苗脱毒方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）种子热处理：将百香果果实中充分发育的种子取出，放进砂布内包好，先在40～46℃左右湿水中浸泡5～10分钟，再放入50～60℃热水中处理50～60min，取出后吸干水分；（2）种子消毒：在无菌条件下，将热处理过的种子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用无菌水冲洗3～5次；（3）砧木培养：剥去种皮，接种于砧木培养基上，每支试管接种2～3粒种子，置于黑暗恒定27±2℃温度下发芽培养，待幼苗生长13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室内散射光下培养1～2t；所述砧木培养基组成为：MS无机盐类+3%蔗糖+1%琼脂，pH5.7；（4）茎尖消毒：从果园中结果母树上选择生长旺盛的新梢，取枝顶端约5cm嫩梢，在室内剪成1～1.5cm长，用自来水冲洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉过滤液中消毒5min，以无菌水冲洗3～5次；（5）茎尖热处理：茎尖热处理先在40～50℃左右湿水中浸泡5～10min，再放入50～60℃热水中处理50～60min；（6）接穗繁殖：切取1～2mm茎尖，带2～3个叶原基，接种在MS+BA0.25毫克/升+NAA0.1毫克/升的培养基上；（7）茎尖嫁接：采用倒“T”形切接和嵌芽腹接，倒“T”形切接法：将砧木苗从试管内取出，切去过长的根，缩短至4～6cm，切去茎的上部使上胚轴剩下约l～1.5cm，把子叶和腋芽去掉，在上胚轴前端切出倒“T”形缺口，然后把事先剥好的带2～3个叶原基，高约0.2～0.4mm的茎尖切下，立即转接到制备好的倒“T”形缺口上；得无毒苗；（8）生根培养：嫁接培养后的百香果脱毒苗接种至生根培养基中，进行生根培养30d～40d；所述生根培养基配方，按质量百分数计，蔗糖2%～3%、琼脂0.8%～1.0%、MS+6‑BA 0 .08%～0 .12%、γ‑PGA0.1%～0 .15%、余量为水；（9）嫁接苗移栽培养：当植株根长至 2～3cm 时，进行驯化移栽，移栽于营养钵中，10～15d 后可移栽到果园，然后按照防虫网室标准建立基地管理，防治蚜虫、红蜘蛛和介壳虫的为害；（10）PCR检测：经PCR检测，确认苗木无病毒可以出圃。...

【技术特征摘要】
1.一种百香果的种苗脱毒方法，其特征在于：包括以下步骤：（1）种子热处理：将百香果果实中充分发育的种子取出，放进砂布内包好，先在40～46℃左右湿水中浸泡5～10分钟，再放入50～60℃热水中处理50～60min，取出后吸干水分；（2）种子消毒：在无菌条件下，将热处理过的种子浸泡在70%酒精溶液中3～10min，再放人8%漂白粉澄清液或0.1%升汞中消毒5～10min，然后用无菌水冲洗3～5次；（3）砧木培养：剥去种皮，接种于砧木培养基上，每支试管接种2～3粒种子，置于黑暗恒定27±2℃温度下发芽培养，待幼苗生长13～14天可作嫁接砧木，嫁接前置于室内散射光下培养1～2t；所述砧木培养基组成为：MS无机盐类+3%蔗糖+1%琼脂，pH5.7；（4）茎尖消毒：从果园中结果母树上选择生长旺盛的新梢，取枝顶端约5cm嫩梢，在室内剪成1～1.5cm长，用自来水冲洗后在75%酒精中消毒10s，再用8%漂白粉过滤液中消毒5min，以无菌水冲洗3～5次；（5）茎尖热处理：茎尖热处理先在40～50℃左右湿水中浸泡5～10min，再放入50～60℃热水...

【专利技术属性】
技术研发人员：韦中定，
申请(专利权)人：韦中定，
类型：发明
国别省市：广西;45