对肝细胞癌患者进行肝移植术预后情况分组的方法、系统以及试剂盒技术方案

本发明专利技术为对肝细胞癌患者进行肝移植术预后情况分组的方法、系统以及试剂盒，提供一种基于细胞角蛋白19(CK19)和磷脂酰肌醇蛋白聚糖‑3(GPC3)的联合检测和患者血清甲胎蛋白(AFP)浓度为技术指标的对符合“米兰标准”的肝细胞癌患者进行更严格的肝移植术前受体筛选方法和肝移植术后患者肿瘤复发和转移风险的预测方法。依据该方法，可以降低移植后肿瘤复发，也可以指导临床医生对肝移植后具有高转移、复发风险的病例实施重点监测或早期处理。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于精准医学领域，具体为涉及对拟行或已行肝移植术的符合米兰标准的肝细胞癌患者进行预后情况分析的方法、系统与相关产品，通过该方法、系统与相关产品的实施得到的结果可对肝细胞癌患者采取肝移植术后的原发肿瘤的转移、复发风险评估与预测提供中间信息或辅助信息。
技术介绍
原发性肝癌是世界范围内发病率最高的恶性肿瘤之一，每年约有100万以上的人新患此病。我国肝癌发病人数始终居于世界首位，每年约23万人死于肝癌，占全球肝癌病人死亡数的53％，位列我国恶性肿瘤病死率首位。1963年，Starzl进行了世界第一例肝癌的肝移植手术并获得成功，至今肝移植仍为公认的治疗肝癌的有效手段。就肝癌伴肝硬化患者而言，肝移植似乎是唯一可选择的治疗手段。目前移植术前对受体选择的方法有米兰标准、UCSF标准、杭州标准、上海复旦标准等，其中米兰标准被认为是当前最严格的肝移植受体的筛选方法，但遗憾的是，符合米兰标准的肝移植患者3年内的肿瘤复发率仍然达到了10-20％。肿瘤的生物学行为决定了肿瘤的侵袭能力。而米兰标准只依赖于肿瘤的直径和个数，不能很好反映出肿瘤的生物学行为，这是符合米兰标准的肝细胞癌患者移植后发生肿瘤复发和转移的最重要原因。借助于可反映肿瘤细胞恶性生物学行为的标志物，在移植术前对拟行肝细胞癌的肝移植患者的复发风险进行评估，对于筛选适宜受体，提高移植效果，有效利用宝贵肝源，节约社会资源等方面具有重要意义；同时，对肝癌肝移植患者术后肿瘤复发、转移风险的评估，可以使临床医生能够根据复发风险的高低实施监测及采取相应的预防措施。虽然肝细胞癌中细胞角蛋白19(CK19)或磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)的表达与患者术后肿瘤转移、复发的关系可见报道，但联合检测CK19或GPC3对肝细胞癌进行亚分类以及对患者预后进行分层尚未见公开报道。
技术实现思路
针对上述问题，本专利技术的目的是提供对符合米兰标准的拟进行或已进行肝移植术的肝细胞癌患者进行预后情况分组的方法和系统。本专利技术的另一个目的是提供与该方法或系统组合使用的试剂盒。本专利技术的技术方案如下。本专利技术所述预后包括肝移植术后的肿瘤肝内复发或肝外转移以及患者无复发生存。一方面，本专利技术提供一种对符合米兰标准的拟进行或已进行肝移植术的肝细胞癌患者进行预后情况分组的方法，所述方法包括：(1)检测所述患者的肝细胞癌组织样品中细胞的CK19(细胞角蛋白19)和GPC3(磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3)表达情况，并基于表达情况给患者赋值：如为共表达CK19和GPC3的CK19+/GPC3+，赋值2分；如为表达GPC3但不表达CK19的CK19-/GPC3+，赋值1分；如为CK19和GPC3均不表达的CK19-/GPC3-，赋值0分；(2)检测所述患者的血清AFP(甲胎蛋白)浓度，并基于与AFP浓度阈值的比较结果给患者赋值：如患者的血清AFP浓度≤阈值，赋值0分；如患者的血清AFP浓度＞阈值，赋值1分；和(3)将步骤(1)和步骤(2)中得到的赋值进行加和，得到所述患者的总赋值，由此将总赋值为0或1分的患者确定为肝移植术后良好预后组，将总赋值为2或3分的患者确定为肝移植术后差预后组。在本专利技术中，步骤(1)中的所述肝细胞癌组织样品获取自所述患者的移植前肝穿活检或肝移植术；优选地，步骤(1)中通过对所述肝细胞癌组织样品进行免疫组织化学染色来检测CK19和GPC3表达情况；更优选地，所述免疫组织化学染色利用分别针对CK19和GPC3的单克隆抗体进行；更优选地，所述免疫组织化学染色利用不同颜色荧光素标记的分别针对CK19和GPC3的单克隆抗体进行。CK19和GPC3的表达为阴性还是阳性根据本领域的一般标准进行判断。根据本申请的具体实施方式，所述免疫组织化学染色利用兔抗人CK19单克隆抗体(ab52625，Abcam公司)和小鼠抗人GPC3单克隆抗体(ab129381，Abcam公司)进行；或者所述免疫组织化学染色利用针对CK19的单克隆抗体(FITC标记，ab87014，Abcam公司)和针对GPC3的单克隆抗体(Alexa647标记，ab199813，Abcam公司)进行。优选地，步骤(2)中的血清获自所述患者的肝移植术前；优选地，步骤(2)中AFP浓度阈值为200ng/mL至410ng/mL之间的任何值，优选为200ng/mL至330ng/mL之间的任何值，更优选为300ng/mL至330ng/mL之间的任何值，例如320ng/mL至330ng/mL之间的任何值；根据本专利技术的具体实施方式，AFP浓度阈值为321ng/mL。优选地，步骤(2)中通过电化学发光法来检测AFP浓度。根据本专利技术的具体实施方式，所述电化学发光法采用罗氏诊断产品上海有限公司的人血清AFP浓度检测试剂盒(注册证号：国食药监械(进)字2014第3404874号)。优选地，所述AFP浓度是所述患者的肝移植术前的多次检测的最高值，并且检测前一个月内所述患者不伴有急性活动性肝炎和肝坏死，并且未进行介入消融或栓塞治疗；更优选地，当检测到CK19+/GPC3+患者、CK19-/GPC3+患者的血清中的AFP浓度≤阈值时，检查所述患者是否具有肿瘤内部典型坏死，并将具有肿瘤内部典型坏死的患者排除；其中优选地，通过肝移植术前的影像学结果，或回顾大体标本及病理切片检查结果来判断肿瘤内部典型坏死；更优选地，所述影像学结果获取自增强CT或增强核磁扫描成像。另一方面，本专利技术提供一种对符合米兰标准的拟进行或已进行肝移植术的肝细胞癌患者进行预后情况分组的系统，所述系统包括：(1)生物分析模块：(1-A)CK19和GPC3表达分析模块，所述模块设置为基于所述患者的肝细胞癌组织样品中细胞的CK19和GPC3表达情况给患者赋值：如为共表达CK19和GPC3的CK19+/GPC3+，赋值2分；如为表达GPC3但不表达CK19的CK19-/GPC3+，赋值1分；如为CK19和GPC3均不表达的CK19-/GPC3-，赋值0分；和(1-B)血清AFP浓度分析模块，所述模块设置为基于所述患者血清中AFP浓度与AFP浓度阈值的比较结果给患者赋值：如患者的血清AFP浓度≤阈值，赋值0分；如患者的血清AFP浓度＞阈值，赋值1分；以及(2)数据处理模块：所述模块设置为对来自(1-A)中模块和(1-B)中模块的赋值进行加和，得到所述患者的总赋值，并将总赋值为0或1分的患者确定为肝移植术后良好预后组，或将总赋值为2或3分的患者确定为肝移植术后差预后组。在本专利技术中，所述(1-A)中的肝细胞癌组织样品获取自所述患者的移植前肝穿活检或肝移植术。在本专利技术提供的系统中，优选地，(1-A)中的模块还设置为检测CK19和GPC3表达情况；优选地，通过对所述肝细胞癌组织样品进行免疫组织化学染色来检测CK19和GPC3表达情况；更优选地，所述免疫组织化学染色利用分别针对CK19和GPC3的单克隆抗体进行；更优选地，所述免疫组织化学染色利用不同颜色荧光素标记的分别针对CK19和GPC3的单克隆抗体进行。根据本申请的具体实施方式，所述免疫组织化学染色利用兔抗人CK19单克隆抗体(ab52625，Abcam公司)和小鼠抗人GPC3单克隆抗体(ab129381，Abcam公司)进行；或者所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种对符合米兰标准的拟进行或已进行肝移植术的肝细胞癌患者进行预后情况分组的方法，所述方法包括：(1)检测所述患者的肝细胞癌组织样品中细胞的CK19和GPC3表达情况，并基于表达情况给患者赋值：如为共表达CK19和GPC3的CK19+/GPC3+，赋值2分；如为表达GPC3但不表达CK19的CK19‑/GPC3+，赋值1分；如为CK19和GPC3均不表达的CK19‑/GPC3‑，赋值0分；(2)检测所述患者的血清AFP浓度，并基于与AFP浓度阈值的比较结果给患者赋值：如患者的血清AFP浓度≤阈值，赋值0分；如患者的血清AFP浓度>阈值，赋值1分；和(3)将步骤(1)和步骤(2)中得到的赋值进行加和，得到所述患者的总赋值，由此将总赋值为0或1分的患者确定为肝移植术后良好预后组，将总赋值为2或3分的患者确定为肝移植术后差预后组。

【技术特征摘要】
1.一种对符合米兰标准的拟进行或已进行肝移植术的肝细胞癌患者进行预后情况分组的方法，所述方法包括：(1)检测所述患者的肝细胞癌组织样品中细胞的CK19和GPC3表达情况，并基于表达情况给患者赋值：如为共表达CK19和GPC3的CK19+/GPC3+，赋值2分；如为表达GPC3但不表达CK19的CK19-/GPC3+，赋值1分；如为CK19和GPC3均不表达的CK19-/GPC3-，赋值0分；(2)检测所述患者的血清AFP浓度，并基于与AFP浓度阈值的比较结果给患者赋值：如患者的血清AFP浓度≤阈值，赋值0分；如患者的血清AFP浓度>阈值，赋值1分；和(3)将步骤(1)和步骤(2)中得到的赋值进行加和，得到所述患者的总赋值，由此将总赋值为0或1分的患者确定为肝移植术后良好预后组，将总赋值为2或3分的患者确定为肝移植术后差预后组。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中的所述肝细胞癌组织样品获取自所述患者的移植前肝穿活检或肝移植术；优选地，步骤(1)中通过对所述肝细胞癌组织样品进行免疫组织化学染色来检测CK19和GPC3表达情况；更优选地，所述免疫组织化学染色利用分别针对CK19和GPC3的单克隆抗体进行；更优选地，所述免疫组织化学染色利用不同颜色荧光素标记的分别针对CK19和GPC3的单克隆抗体进行。3.根据权利要求1或2所述的方法，步骤(2)中的血清获自所述患者的肝移植术前；优选地，步骤(2)中AFP浓度阈值为200ng/mL至410ng/mL之间的任何值，优选为200ng/mL至330ng/mL之间的任何值，更优选为300ng/mL至330ng/mL之间的任何值，例如320ng/mL至330ng/mL之间的任何值；更优选地，AFP浓度阈值为321ng/mL。4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，步骤(2)中通过电化学发光法来检测AFP浓度；优选地，所述AFP浓度是所述患者的肝移植术前的多次检测的最高值，并且检测前一个月内所述患者不伴有急性活动性肝炎和肝坏死，并且未进行介入消融或栓塞治疗；更优选地，当检测到CK19+/GPC3+患者、CK19-/GPC3+患者的血清中的AFP浓度≤阈值时，检查所述患者是否具有肿瘤内部典型坏死，并将具有肿瘤内部典型坏死的患者排除；其中优选地，通过肝移植术前的影像学结果，或回顾大体标本及病理切片检查结果来判断肿瘤内部典型坏死；更优选地，所述影像学结果获取自增强CT或增强核磁扫描成像。5.一种对符合米兰标准的拟进行或已进行肝移植术的肝细胞癌患者进行预后情况分组的系统，所述系统包括：(1)生物分析模块：(1-A)CK19和GPC3表达分析模块，所述模块设置为基于所述患者的肝细胞癌组织样品中细胞的CK19和GPC3表达情况给患者赋值：如为共表达CK19和GPC3的CK19+/GPC3+，赋值2分；如为表达GPC3但不表达CK19的CK19-/GPC3+，赋值1分；如为CK19和GPC3...

【专利技术属性】
技术研发人员：冯骥良，
申请(专利权)人：冯骥良，
类型：发明
国别省市：北京;11