一种多肽在制备治疗脑梗死的药物中的应用制造技术

本发明专利技术公开了一种多肽在制备治疗脑梗死的药物中的应用。SEQ ID NO.1所示的多肽在制备治疗脑梗死的药物中的应用，本发明专利技术通过实验发现，SEQ ID NO.1所示的多肽能够改善脑梗死后的并发症，包括减少血脑屏障的破坏，降低神经元的死亡和凋亡，进而对脑组织起到保护作用，可用于制备治疗脑梗死的药物，特别是制备治疗脑梗死后血脑屏障破坏的药物。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于药物制备领域，具体涉及一种多肽在制备治疗脑梗死的药物中的应用。
技术介绍
脑梗死又称缺血性脑卒中，是指各种原因所致脑部血液供应障碍，从而导致脑组织缺血、缺氧性坏死，出现相应神经功能损伤。脑梗死是脑血管疾病最常见的类型，约占全部脑血管疾病的70％。当脑缺血后，ATP、磷酸肌酸、葡萄糖、糖原等均在短时间内减少，乳酸在短时间内明显增加，钾离子通道传导受阻，神经细胞膜电位进行性较低，细胞内钙离子浓度升高从而激活一氧化氮合酶(NOS)，使得大量NO生成。大量NO生成将导致细胞内活性氧自由基生成增多，线粒体产生ATP功能障碍。综合效应的结果是神经细胞水肿，细胞器溶解，细胞膜破裂，产生炎症性反应，导致细胞的破坏。同时由于局部血流中断，血管内皮细胞缺血缺氧，血管内皮细胞大量凋亡，导致血脑屏障严重破坏。血液中有害物质通过破坏后的血脑屏障进入脑实质进一步加重脑损伤。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种多肽的新应用。本专利技术的目的可通过以下技术方案实现：SEQ ID NO.1所示的多肽在制备治疗脑梗死的药物中的应用。SEQ ID NO.1所示的多肽优选在制备治疗脑梗死后血脑屏障破坏的药物中的应用。一种用于治疗脑梗死的药物，包含SEQ ID NO.1所示的多肽以及药理学可接受的载体。所述的载体描述了对有机体不造成明显刺激并且不消弱SEQ ID NO.1所示的多肽生物活性和性能的物质。载体必须有足够的纯度和足够低的毒性，以使其适合施用至正在治疗的对象。载体可以是惰性的，或它可以具有药学益处，比如脂质体或纳米材料。SEQ ID NO.1所示的多肽和所述的载体可被制备成微乳液、微球、凝胶或囊泡等剂型。这些剂型的制备方法和所用的辅料均为现有技术。有益效果：本专利技术通过实验发现，SEQ ID NO.1所示的多肽能够改善脑梗死后的并发症，包括减少血管内皮损伤，维持血管内皮细胞间紧密连接的完整性，减少血脑屏障的破坏，改善脑缺血及再灌注后脑损伤，降低神经元的死亡和凋亡，进而对脑组织起到保护作用，最终改善脑梗死预后；因此，可用于制备治疗脑梗死的药物，特别是制备治疗脑梗死后血脑屏障破坏的药物。相对于其他的多肽化合物，本专利技术提供的多肽酸具有分子量小，毒性小，稳定性及细胞摄取率高等优点，可用于脑梗死的实验治疗研究，有一定的药物开发前景。说明书附图图1为不同剂量本专利技术多肽对血管内皮细胞生存率的影响。图2为正常组、空白对照组、试验组血管内皮细胞糖氧剥夺后凋亡情况的比较。图3为假手术组、空白对照组、多肽治疗组构建MCAO模型后24h脑左右半球水肿程度的比较。图4为假手术组、空白对照组、多肽治疗组建模后24h血脑屏障破坏程度比较结果。图5为假手术组、空白对照组、多肽治疗组建模后1，3，7，14，28天的行为学的比较。具体实施方式实施例11实验方法细胞实验血管内皮细胞的培养小鼠的血管内皮细胞(bEND3)在37℃，5％CO2培养箱中贴壁生长。培养基中混有15％的太牛血清(FBS)，100U/ml盘尼西林，100g/ml链霉素。血管内皮细胞糖氧剥夺弃正常培养液，PBS清洗细胞2遍，加入无糖的DMEM培养液，培养皿放入厌氧罐中，将厌氧罐放入37℃培养箱中对细胞进行6h缺糖缺氧损伤，换正常培养液，继续在37℃培养箱中培养24h，模拟再灌注。对照组常规处理。细胞生存及凋亡实验细胞生存及凋亡实验在血管内皮细胞糖氧剥夺后24h进行。在糖氧剥夺前血管内皮细胞经过0.1μM,1μM,10μM多肽预处理，细胞生存情况通过CCK-8来检测。细胞凋亡情况由脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记染色(TUNEL染色)检测，染色方法根据罗氏试剂盒说明书进行染色，显色使用NBT/BCIP试剂盒。2统计学分析本实验所有数据均使用均数±标准差表示，采用SPSS 16.0统计软件，行单因素方差分析或t检验，P<0.05为差异有统计学意义。3结果3.1血管内皮细胞糖氧剥夺后细胞存活情况的比较血管内皮细胞经过不同浓度的多肽预处理后进行糖氧剥夺实验。如图1所示空白对照组、0.1μM及1μM多肽试验组细胞糖氧剥夺后存活情况并没有明显变化。相对于空白对照组，10μM试验组细胞糖氧剥夺后存活率明显上升(P<0.05)。3.2血管内皮细胞糖氧剥夺后细胞凋亡情况的比较。如图2所示多肽试验组多肽相对于空白对照组，血管内皮细胞在糖氧剥夺后凋亡明显减少。实施例21实验方法1.1实验动物成年健康雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠300-350g，由南京军区南京总医院动物实验中心提供，术前单笼饲养3天，以避免非特异性因素的影响，饲养于室温20±2℃，12小时光照/12小时黑暗环境中，保证自由饮食饮水。1.2动物分组将SD大鼠随机分为假手术组、阴性对照组、多肽治疗组。(1)假手术组：线栓插入颅内，但并不阻断血管。(2)空白对照组：MCAo建模后即刻，按照5ml/kg经尾静脉给予生理盐水。(3)多肽治疗组：MCAo建模后即刻，按照10μM(共1ml)经尾静脉给予多肽分子。1.3MCAo模型制备用10％水合氯醛将大鼠麻醉达适宜状态后，仰卧位固定于鼠板，颈正中切口，暴露右侧颈总动脉(CCA)、颈外动脉(ECA)和颈内动脉(ICA)，结扎CCA和ECA，于CCA分叉下方剪一小口，将预先用酒精灯烧成圆头的尼龙线置入ICA约18-20mm，至有轻微阻力感为止。阻断2h后抽出尼龙线，形成再灌注，并缝合皮肤结束手术。术后以出现对侧轻偏瘫(行走时向左侧跌倒或转圈)为手术成功的标志。术后每只动物腹腔注射生理盐水5ml，单笼饲养。假手术组动物实验操作同上但不将尼龙线插入ICA。1.4大鼠脑水肿测定各组大鼠造模后24h取脑，将脑组织分为左右大脑半球，放在预先称好的铁片上称重，所得重量减去铁片重量即为湿重。随后放入烘箱中，105℃，24h后再称重，得到干重，脑水肿计算公式为：脑水肿(％)＝[(湿重-干重)/湿重]×100％。1.5Evans Blue法检测血脑屏障通透性各组大鼠建模后24h，按5ml/kg的剂量经尾静脉注射2％Evans blue(EB)生理盐水溶液，循环60分钟后，进行心脏灌注，取脑后将脑组织分为左右半球，并分别称量左右半球的重量(g)，分别加入3ml甲酰胺，然后置于60℃水浴箱中24h后取出，在620nm下测吸光度值，计算出左右半球的EB含量(μg)，EB的含量/脑组织重量(μg/g)即代表血脑屏障被破坏程度。1.6大鼠神经功能评分在建模1，3，7，14，28天后进行大鼠运动感觉功能评分(如表1)。表1大鼠运动感觉神经功能评分标准2统计学分析本实验所有数据均使用均数±标准差表示，采用SPSS 16.0统计软件，行单因素方差分析或t检验，P<0.05为差异有统计学意义。3结果3.1脑水肿严重程度的比较假手术组并未出现脑水肿，而空白对照组、多肽治疗组脑水肿严重程度之间有显著差异(P<0.05)(如图3)，多肽分子可明显减轻脑梗死后脑水肿。3.1血脑屏障通透性改变伊文思蓝染料渗透试验可显示血脑屏障的通透性，伊文思蓝渗出越多说明血脑屏障损伤越严重。相对于假手术组，空白对照组和多肽治疗组血脑屏障的均有不同程度的破坏，但是相比于空白对照组，多肽治疗组伊文思本文档来自技高网...

【技术保护点】
SEQ ID NO.1所示的多肽在制备治疗脑梗死的药物中的应用。

【技术特征摘要】
1.SEQ ID NO.1所示的多肽在制备治疗脑梗死的药物中的应用。2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于SEQ ID NO.1所示的多肽在制备治疗脑梗死后血脑屏障破坏的药物中的应用。3.一种用于治疗脑梗死的药物，其...

【专利技术属性】
技术研发人员：叶瑞东，王刘敏，刘新峰，
申请(专利权)人：叶瑞东，
类型：发明
国别省市：江苏;32