一种基于PDMS芯片的片上细胞检测系统及方法，包括：片上细胞辨别及分选装置以及与之相连的注射泵、气泵、可调谐激光器和功率探测器，片上细胞辨别及分选装置的出样口和进样口分别与注射泵相连，微通道气阀端口与气泵相连，片上细胞辨别及分选装置的光纤Bragg光栅FP谐振腔的输入端和输出端分别与可调谐激光器和功率探测器相连，通过气泵控制片上细胞辨别及分选装置的PDMS薄膜夹层形变并实现闭合/打开。本发明专利技术采用的光检测方法不仅对细胞样品没有损伤，而且可以避免对细胞样本进行染色或荧光标记等预处理。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是一种生物医学领域的检测技术，具体是一种基于PDMS芯片的片上细胞检测系统及方法。
技术介绍
流式细胞术(Flow Cytometry)是一种对单细胞或其他生物微粒子进行快速测定并分选收集和定量分析的检测手段。流式细胞仪作为该种检测技术平台，是一种现代化生物医学仪器。其检测参数可以是光散射或者荧光指标；但这之前需要制备荧光素标记抗体并对细胞进行染色，整个系统复杂而且仪器造价昂贵。光流控是光学和微流控技术的结晶，因此微流体器件也被称为光学芯片或芯片实验室(Lab on a chip)。其微分析系统使用的样品试剂量极少、分辨率和灵敏度高、成本低、分析时间短，可广泛用于化学、生物、医学的检测分析以及光学和信息处理，而且液体环境对这些领域所关心的检测对象来说非常适宜。微流体芯片技术有望将这种细胞分选技术集成于一块芯片上，从而使系统微型化。微流控芯片所采用的PDMS材料，具有透明、易于加工和良好生物兼容性等优点。因此基于PDMS的微流控芯片具有非常好的应用前景。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术存在的上述不足，提出一种基于PDMS芯片的片上细胞辨别及分选系统及方法，利用光学进行细胞(或微颗粒)的探测并可实现两种混合细胞(或微颗粒)溶液的分离。通过基于光纤布拉格(Bragg)光栅法布里‐珀罗谐振腔(FP腔)实现细胞辨别，FP腔的谐振作用可以极大地提高针对透明细胞的辨别能力，可以免去对细胞进行染色等预处理。本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术涉及一种基于PDMS芯片的片上细胞辨别及分选装置，该装置为三层结构，由上而下依次包括：具有液体微通道的芯片层、PDMS薄膜夹层和具有气体微通道的基底层，其中：芯片层上设有火字形结构的液体微通道以及位于微通道中心的光纤Bragg光栅FP谐振腔，PDMS薄膜夹层和基底层之间设有连通的微通道气阀，当对微通道气阀泵入空气时，PDMS薄膜夹层产生形变并闭合/打开芯片层的液体微通道。所述的火字形结构的液体微通道包括：三个进样口以及两个出样口，其中：用于输入待分选的细胞液的第一进样口位于用于输入鞘液的第二和第三进样口之间，第一进样口、第一出样口、第二进样口、第二出样口、第三进样口之间均为连通。所述的微通道宽度为60μm，深度为128μm。所述的微通道长度为15mm，这个长度是为了更好地将细胞液聚焦同时保持稳定的层流。所述的微通道气阀优选为两个且分别用于进气和出气，该微通道气阀设置于三入两出的微通道的出样口。所述的光纤Bragg光栅FP谐振腔的光纤输入端和输出端分别设置于芯片层内，具体通过两端与第一进样口相垂直的光纤槽实现，从而使得光纤的端面与微通道面平齐。所述的光纤的纤芯直径为9μm、外径为125μm的单模光纤，光纤的数值孔径为0.14；所述的Bragg光栅波长为1550nm，带宽为0.2nm。所述的基底层和芯片层采用但不限于聚二甲基硅氧烷(PDMS)制成，具体通过光刻的方法制备出带有微通道凸结构的阳模，将PDMS中的预聚物和固化剂以质量比为10:1配比搅拌混合，浇注于阳模模板上；然后将其置于真空泵中抽走PDMS中的空气泡，再在60摄氏度烘箱两个小时固化后，将固化后的聚合物从模板上剥离，便制得带有微通道结构的聚合物。所述的PDMS薄膜夹层的厚度为30微米，通过在厚度为30微米的液晶盒中灌注液态PDMS，将其放入烘箱2小时，固化后得到。本专利技术涉及一种包含上述片上细胞辨别及分选装置的检测系统，包括：片上细胞辨别及分选装置以及与之相连的注射泵、气泵、可调谐激光器和功率探测器，其中：片上细胞辨别及分选装置的出样口和进样口分别与注射泵相连，微通道气阀端口与气泵相连，片上细胞辨别及分选装置的光纤Bragg光栅FP谐振腔的输入端和输出端分别与可调谐激光器和功率探测器相连，通过气泵控制片上细胞辨别及分选装置的PDMS薄膜夹层形变并实现闭合/打开。所述的可调谐激光器输出的光源为1528‐1573nm波段。本专利技术涉及上述系统的检测方法，通过将检测光的波长调节至FP腔谐振波长，当待测微粒通过FP腔时引起谐振峰漂移，使得FP腔的透过率曲线发生漂移，进而通过功率探测器测得变化程度从而分辨通过FP腔检测区的微粒种类，气泵的作用在于分选细胞。技术效果与现有技术相比，本专利技术对使用的流体类型没有限制而且制备工艺简单，调谐方便。所采用的光检测方法不仅对细胞样品没有损伤，而且可以避免对细胞样本进行染色或荧光标记等预处理。芯片的微通有三个注样口和两个出样口，在直通道的中间部分有一个Bragg光纤光栅组成的FP腔，末端的两个出样通道各有微气阀开关，利用鞘液的包裹挤压作用，使得待分选的细胞液聚焦经过检测部，同时并保证细胞(或微颗粒)是一个一个地排列开。由FP腔的透过率变化分辨通过的细胞(或微颗粒)种类，并控制出样通道微气阀开关实现分拣收集的功能。附图说明图1为本专利技术所用微流体芯片细胞辨别及分选部分示意图；图中：1‐1第一进样口、1‐2第二进样口、1‐3第三进样口、1‐4入射端光纤、1‐5出射端光纤、1‐6光纤Bragg光栅FP谐振腔、1‐7微气阀、1‐8微气阀、1‐9第一出样口、1‐10第一出样口。图2为本专利技术所用微流体芯片细胞分选部分微气阀实现原理图；图中：2‐1芯片层，其中的微通道为液体微通道；2‐2PDMS薄膜夹层；2‐3基底层，其中的微通道为气体微通道。图3为本专利技术整体装置示意图；图中：3‐1注射泵、3‐2Peek管、3‐3一分二转接头、3‐4片上细胞辨别及分选装置、3‐5可调谐激光器、3‐6和3‐7末端带Bragg光栅的光纤、3‐8功率探测器、3‐9注射泵、3‐10和3‐11样品收集器、3‐12控制计算机。图4a为不同细胞经过FP腔时其透射谱漂移变化示意图；图4b为不同细胞依次经过FP腔时透射强度的变化示意图；图中：不同细胞种类对应的变化量不同。具体实施方式实施例1如图1和图2所示，本实施例涉及的基于PDMS芯片的片上细胞辨别及分选装置中，第一进样口1‐1为待分选的细胞液，第二和第三进样口1‐2和1‐3为鞘液通道。截面为矩形结构的第一进样口1‐1位于第二进样口1‐2和第三进样口1‐3之间且其矩形结构的边长从第二进样口和第三进样口的合并端至第一出样口1‐9和第一出样口1‐10的合并端逐渐减小。试样装在注射器内并由注册泵注入PDMS芯片，并控制注射速度。鞘液对样品流形成包裹挤压作用，使得待分选的细胞液聚焦经过检测区，同时并保证细胞(或微颗粒)是一个一个地依次通过FP腔。检测区的FP腔一端的光纤1‐4与可调谐激光器相连，其波长范围为1528nm‐1573nm；FP腔另一端的光纤1‐5与功率探测器相连。FP腔的间距与微通道的宽度一致，为60μm。激光由光纤1‐4导入并在FP腔内谐振，当有细胞(或微颗粒)经过FP腔时，光场受到微扰，谐振条件发生改变，透过光纤1‐5的强度也发生相应变化。FP腔内的共振波长满足:其中：n为细胞周围液体的折射率，lFP为谐振腔的腔长，nc和lc为细胞的有效折射率和有效尺寸，m为正整数，可变量ξ＝0代表腔内无细胞通过的情况，ξ＝1代表腔内有细胞通过的情况。从上述表达式可以看出，FP腔透光率曲线变化与腔内有无细胞相关。主通道末端一分为二，分别由两个微气阀控制微通道的开启闭合。控制微本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于PDMS芯片的片上细胞辨别及分选装置，其特征在于，该装置为三层结构，由上而下依次包括：具有液体微通道的芯片层、PDMS薄膜夹层和具有气体微通道的基底层，其中：芯片层上设有火字形结构的液体微通道以及位于微通道中心的光纤Bragg光栅FP谐振腔，PDMS薄膜夹层和基底层之间设有连通的微通道气阀，当对微通道气阀泵入空气时，PDMS薄膜夹层产生形变并闭合/打开芯片层的液体微通道。
【技术特征摘要】
1.一种基于PDMS芯片的片上细胞辨别及分选装置，其特征在于，该装置为三层结构，由上而下依次包括：具有液体微通道的芯片层、PDMS薄膜夹层和具有气体微通道的基底层，其中：芯片层上设有火字形结构的液体微通道以及位于微通道中心的光纤Bragg光栅FP谐振腔，PDMS薄膜夹层和基底层之间设有连通的微通道气阀，当对微通道气阀泵入空气时，PDMS薄膜夹层产生形变并闭合/打开芯片层的液体微通道。2.根据权利要求1所述的片上细胞辨别及分选装置，其特征是，所述的火字形结构的液体微通道包括：三个进样口以及两个出样口，其中：用于输入待分选的细胞液的第一进样口位于用于输入鞘液的第二和第三进样口之间，第一出样口、第二进样口、第二出样口、第三进样口之间均为连通。3.根据权利要求2所述的片上细胞辨别及分选装置，其特征是，所述的第一进样口位于第二进样口和第三进样口之间且截面为矩形结构，该矩形结构的边长从第二进样口和第三进样口的合并端至第一出样口和第一出样口的合并端逐渐减小。4.根据权利要求1所述的片上细胞辨别及分选装置，其特征是，所述的微通道宽度为60μm，深度为128μm；所述的微通道长度为15mm。5.根据权利要求1所述的片上细胞辨别及分选装置，其特征是，所述的微通道气阀为两个且分别用于进气和出气，该微通道气阀设置于三入两出的微通道的出样口。6.根据权利要求1所述的...
【专利技术属性】
技术研发人员：邹芸，刘文斌，杨飞宇，江蓓，梁培斯，陈险峰，
申请(专利权)人：上海市刑事科学技术研究院，
类型：发明
国别省市：上海;31
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