一种利用血糖仪定量检测生物标识物的方法技术

本发明专利技术提供了一种非疾病诊断目的利用血糖仪定量检测生物标识物的方法，包括以下步骤：1)捕获生物标识物，所述捕获的方法包括竞争捕获法或非竞争捕获法；2)将所述步骤1)捕获到的生物标识物的信号转化为葡萄糖信号；3)利用血糖仪检测转化的葡萄糖信号。本发明专利技术将生物标识物信号转化为葡萄糖信号，并使用血糖仪作为检测仪器，能够简单快速的定量检测目的生物标识物，结果可通过血糖仪数字化输出，耗时短，成本低。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物分子检测领域，尤其涉及一种利用血糖仪定量检测生物标识物的方法。
技术介绍
关于生物标识物的检测方法有电泳法、放射性分析法、传统的荧光光谱法、免疫法、色谱法等，近年来也兴起很多以PCR为基础的分子生物学检测方法，虽然这些方法较传统方法准确度好、灵敏度高，但是这些检测方法需要使用实验室特定的设备，需要专业的技术人员进行检测操作，耗时长且成本高。因此，不适合生物标识物的快速检测和鉴定。
技术实现思路
有鉴于此，本专利技术的目的在于提供一种快速简便的检测生物标识物的方法。为了实现上述专利技术目的，本专利技术提供以下技术方案：本专利技术提供了一种非疾病诊断目的利用血糖仪定量检测生物标识物的方法，包括以下步骤：1)捕获生物标识物，所述捕获的方法包括竞争捕获法或非竞争捕获法；2)将所述步骤1)捕获到的生物标识物的信号转化为葡萄糖信号；3)利用血糖仪检测转化的葡萄糖信号；所述步骤1)中非竞争捕获法具体包括以下步骤：1.1)连接有活性基质的捕获试剂通过非竞争的捕获方法捕获待测样品中的生物标识物，得到基质-捕获试剂-生物标识物复合物；1.2)将活性的识别试剂与所述步骤1.1)得到的基质-捕获试剂-生物标识物复合物在20～30℃混合30～60min，得到基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂复合物；1.3)将所述步骤1.2)得到的基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂复合物与连接物混合连接，得到基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物复合物；所述步骤2)具体包括以下步骤：2.1)将所述步骤1.3)得到的基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物复合物与活性的蔗糖酶混合连接得到基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物-酶复合物；2.2)将蔗糖溶液与基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物-酶复合物在20～30℃混合1～3h后，将生物标识物的信号转化为葡萄糖信号的待测混合液；所述步骤3)为：使用血糖仪检测所述待测混合液中的葡萄糖信号。优选的是，所述步骤1)采用竞争的捕获方法捕获生物标识物具体包括以下步骤：A)将活性基质与捕获试剂连接，得到连接有活性基质的捕获试剂；B)将连接有活性基质的捕获试剂和与连接有蔗糖酶的识别试剂连接得到基质-捕获试剂-连接有蔗糖酶的识别试剂复合物；C)将基质-捕获试剂-连接有蔗糖酶的识别试剂复合物与待测样品混合，待测样品中的生物标识物与连接有蔗糖酶的识别试剂竞争结合捕获试剂，使得连接有蔗糖酶的识别试剂从基质-捕获试剂-连接有蔗糖酶的识别试剂复合物中脱离，得到基质-捕获试剂-生物标识物复合物。优选的是，采用竞争捕获法捕获生物标识物后，所述步骤2)葡萄糖信号的检测对象为脱离的连接有蔗糖酶的识别试剂；所述步骤3)为：由血糖仪检测所述葡萄糖信号。优选的是，所述步骤B)中的连接有蔗糖酶的识别试剂的制备方法包括以下步骤：将蔗糖酶与偶联剂混合连接反应30～60min，得到偶联剂-蔗糖酶复合物；将巯基修饰的识别试剂、PB缓冲液和三(2-羧乙基)膦混合，静置30～60min，得到活化的识别试剂；将所述偶联剂-蔗糖酶复合物与所述活化的识别试剂混合，静置24～48h，得到连接有蔗糖酶的识别试剂。优选的是，所述蔗糖酶与偶联剂混匀连接的反应温度为20～30℃，所述混匀连接是在转速为20～30r/min的条件下进行。优选的是，所述步骤1.1)中非竞争的捕获方法具体包括以下步骤：A)将活性基质与捕获试剂连接，得到连接有活性基质的捕获试剂；B)待测样品与连接有活性基质的捕获试剂连接，得到基质-捕获试剂-生物标识物复合物。优选的是，所述活性基质为活化后的玻片、羧基磁珠、Protein A磁珠或链霉亲和素-磁珠。优选的是，所述步骤1.1)中所述的连接有活性基质的捕获试剂由包括以下步骤的方法制备得到：活性基质与捕获试剂在20～30℃、搅拌的条件下偶联1～2h，所述搅拌的转速为20～30r/min。优选的是，所述偶联后还包括静置，所述静置的温度为0～8℃，所述静置的时间为8～12h。优选的是，所述步骤1.3)中的连接物包括为链霉亲和素或偶联剂。优选的是，所述偶联剂包括sulfo-SMCC、琥珀酰亚胺基3-[溴代乙酰基氨基]丙酯、琥珀酰亚胺基4-[p-马来酰亚胺苯基]丁酸盐或琥珀酰亚胺基-6-[(β-马来酰亚胺丙酰胺基)]己酯。优选的是，所述步骤1.2)中的活性的识别试剂为生物素或化学基团修饰的识别试剂。优选的是，所述步骤2.1)中的活性的蔗糖酶包括生物素化的蔗糖酶。优选的是，步骤1.3)中所述的捕获试剂-生物标识物-识别试剂复合物与连接物混合连接的时间为30～60min，所述混合连接在转速为20～30r/min的条件下进行。优选的是，步骤2.1)中所述的捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物复合物与活性的蔗糖酶混合连接的温度为20～30℃，时间为30～60min。优选的是，所述生物标识物为DNA、RNA、蛋白质、生物小分子、癌细胞、细菌和病毒中的一种。本专利技术还提供了一种用于检测生物标识物的试剂盒，包括捕获生物标识物试剂，生物标识物的信号转化试剂和辅助试剂；所述的捕获生物标识物试剂包括连接有活性基质的捕获试剂、活性的识别试剂和连接物；所述生物标识物的信号转化试剂包括活性的蔗糖酶和蔗糖溶液；所述的辅助试剂包括Buffer A溶液和吗啉乙磺酸-吐温20溶液，所述的Buffer A溶液为PBST溶液。本专利技术提供的方法将生物标识物的信号转化为葡萄糖信号，并使用血糖仪作为检测仪器，通过血糖仪检测葡萄糖的量从而得到生物标识物的量，能够实现简单快速的检测目的，且能够得到定量的检测结果，结果可通过血糖仪数字化输出，耗时短，成本低。附图说明：图1为利用血糖仪定量检测生物标识物的示意图；图2为实施例9的当连接物是链霉亲和素时，利用血糖仪定量检测生物标识物的示意图。图3为以猪圆环病毒2型PCV2为例，利用血糖仪定量检测生物标识物的示意图。具体实施方式本专利技术提供了一种非疾病诊断目的利用血糖仪定量检测生物标识物的方法，包括以下步骤：1)捕获生物标识物，所述捕获的方法包括竞争捕获法或非竞争捕获法；2)将所述步骤1)捕获到的生物标识物的信号转化为葡萄糖信号；3)利用血糖仪检测转化的葡萄糖信号；所述步骤1)中非竞争捕获法具体包括以下步骤：1.1)连接有活性基质的捕获试剂通过非竞争的捕获方法捕获待测样品中的生物标识物，得到基质-捕获试剂-生物标识物复合物；1.2)将活性的识别试剂与所述步骤1.1)得到的基质-捕获试剂-生物标识物复合物在20～30℃混合30～60min，得到基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂复合物；1.3)将所述步骤1.2)得到的基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂复合物与连接物混合连接，得到基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物复合物；所述步骤2)具体包括以下步骤：2.1)将所述步骤1.3)得到的基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物复合物与活性的蔗糖酶混合连接得到基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物-酶复合物；2.2)将蔗糖溶液与基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物-酶复合物在20～30℃混合1～3h后，将生物标识物的信号转化为葡萄糖信号的待测混合液；所述步骤3)为：使用血糖仪检测所述待测混合液中的葡萄本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种非疾病诊断目的利用血糖仪定量检测生物标识物的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)捕获生物标识物，所述捕获的方法包括竞争捕获法或非竞争捕获法；2)将所述步骤1)捕获到的生物标识物的信号转化为葡萄糖信号；3)利用血糖仪检测转化的葡萄糖信号；所述步骤1)中非竞争捕获法具体包括以下步骤：1.1)连接有活性基质的捕获试剂通过非竞争的捕获方法捕获待测样品中的生物标识物，得到基质‑捕获试剂‑生物标识物复合物；1.2)将活性的识别试剂与所述步骤1.1)得到的基质‑捕获试剂‑生物标识物复合物在20～30℃混合30～60min，得到基质‑捕获试剂‑生物标识物‑识别试剂复合物；1.3)将所述步骤1.2)得到的基质‑捕获试剂‑生物标识物‑识别试剂复合物与连接物混合连接，得到基质‑捕获试剂‑生物标识物‑识别试剂‑连接物复合物；所述步骤2)具体包括以下步骤：2.1)将所述步骤1.3)得到的基质‑捕获试剂‑生物标识物‑识别试剂‑连接物复合物与活性的蔗糖酶混合连接得到基质‑捕获试剂‑生物标识物‑识别试剂‑连接物‑酶复合物；2.2)将蔗糖溶液与基质‑捕获试剂‑生物标识物‑识别试剂‑连接物‑酶复合物在20～30℃混合1～3h后，将生物标识物的信号转化为葡萄糖信号的待测混合液；所述步骤3)为：使用血糖仪检测所述待测混合液中的葡萄糖信号。...

【技术特征摘要】
1.一种非疾病诊断目的利用血糖仪定量检测生物标识物的方法，其特征在于，包括以下步骤：1)捕获生物标识物，所述捕获的方法包括竞争捕获法或非竞争捕获法；2)将所述步骤1)捕获到的生物标识物的信号转化为葡萄糖信号；3)利用血糖仪检测转化的葡萄糖信号；所述步骤1)中非竞争捕获法具体包括以下步骤：1.1)连接有活性基质的捕获试剂通过非竞争的捕获方法捕获待测样品中的生物标识物，得到基质-捕获试剂-生物标识物复合物；1.2)将活性的识别试剂与所述步骤1.1)得到的基质-捕获试剂-生物标识物复合物在20～30℃混合30～60min，得到基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂复合物；1.3)将所述步骤1.2)得到的基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂复合物与连接物混合连接，得到基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物复合物；所述步骤2)具体包括以下步骤：2.1)将所述步骤1.3)得到的基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物复合物与活性的蔗糖酶混合连接得到基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物-酶复合物；2.2)将蔗糖溶液与基质-捕获试剂-生物标识物-识别试剂-连接物-酶复合物在20～30℃混合1～3h后，将生物标识物的信号转化为葡萄糖信号的待测混合液；所述步骤3)为：使用血糖仪检测所述待测混合液中的葡萄糖信号。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤1)采用竞争的捕获方法捕获生物标识物具体包括以下步骤：A)将活性基质与捕获试剂连接，得到连接有活性基质的捕获试剂；B)将连接有活性基质的捕获试剂和与连接有蔗糖酶的识别试剂连接得到基质-捕获试剂-连接有蔗糖酶的识别试剂复合物；C)将基质-捕获试剂-连接有蔗糖酶的识别试剂复合物与待测样品混合，待测样品中的生物标识物与连接有蔗糖酶的识别试剂竞争结合捕获试剂，使得连接有蔗糖酶的识别试剂从基质-捕获试剂-连接有蔗糖酶的识别试剂复合物中脱离，得到基质-捕获试剂-生物标识物复合物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，采用竞争捕获法捕获生物标识物后，所述步骤2)葡萄糖信号的检测对象为脱离的连接有蔗糖酶的识别试剂；所述步骤3)为：由血糖仪检测所述葡萄糖信号。4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述步骤B)中的连接有蔗糖酶的识别试剂的制备方法包括以下步骤：将蔗糖酶与偶联剂混合连接反应30～60min，得到偶联剂-蔗糖酶复合物；将巯基修饰的识别试剂、PB缓冲液和三(2-羧乙基)膦混合，静置30～60min，得到活化的识别试剂；将所述偶联剂-蔗糖酶复合物与所述活化的识别试剂混合，静置24～48h，得到连接有蔗糖酶的识别试剂。5...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘斐，张艳，
申请(专利权)人：南京农业大学，
类型：发明
国别省市：江苏;32