一种生物工程领域的基于灵芝菌丝分泌酶的灵芝孢子粉优化破壁方法，通过将灵芝孢子粉和基于灵芝菌丝体接种发酵得到的粗酶液混合配制成悬浮液，经高压均质机破壁处理后浓缩干燥得到破壁孢子粉。本发明专利技术依据生物转化原理利用灵芝菌丝诱导产酶、并利用粗酶液辅助灵芝孢子粉的破壁，灵芝菌丝发酵粗酶液‐孢子粉的复合物中灵芝β‐葡聚糖和三萜类成分的含量明显增加，且安全、易于吸收，可用于保健食品和药物开发等。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及的是一种生物工程领域的技术，具体是一种利用灵芝液体发酵技术诱导菌丝分泌锰过氧化物酶，然后通过粗酶液辅助灵芝孢子粉破壁的应用方法。
技术介绍
灵芝孢子(Ganoderma spore)是灵芝子实体在生长成熟期从菌盖背面菌褶中弹射出来的极其微小的卵形生殖细胞—担孢子，每个灵芝孢子只有4‐6个微米，是活体生物体，双壁结构，外被坚硬的几丁质纤维素所包围。灵芝孢子粉中含有丰富的多糖、生物碱、有机锗及萜类化合物等多种药理活性成份，能明显提高人体的免疫机能，促进IgM和IgG的产生，有抗病毒、防癌变、抑肿瘤等功能(Jin H，Jin F，Jin JX，Xu J，Tao TT，Liu J，Huang HJ.Protective effects of Ganoderma lucidum spore on cadmium hepatotoxicity in mice.Food Chem Toxicol.2013，52:171‐5.Sliva D，Sedlak M，Slivova V，Valachovicova T，Lloyd FP Jr，Ho NW.Biologic activity of spores and dried powder from Ganoderma lucidum for the inhibition of highly invasive human breast and prostate cancer cells.J Altern Complement Med.2003,9(4)：491‐7.)。灵芝孢子细胞壁由葡聚糖、几丁质等不溶于水的多糖类高分子构成，具有耐酸抗碱，耐压抗热，耐酶抗消化等性质，孢子进入肠胃后，有效成分无法被人体吸收利用，影响其功效的发挥(参考文献：陈体强.原木灵芝孢子研究(Ⅳ)—未破壁孢子与破壁孢子的比较.食用菌学报，1999，6(3):21‐26)；据有关试验表明，一个人若直接食用不经破壁处理的灵芝孢子，人体仅能利用12.0％左右的有效成分，而服用破壁后的孢子粉，利用率可达到95.0％以上(Zhang SQ，Zhu JJ，Wang CZ，et al.Development of wall breaking method of Ganoderma lucidum spores.Transact Chin Soci Agricul Machinery，2004，35(2):160‐162)。由此可见，灵芝孢子粉破壁率的大小就是能否最大程度上利用孢子粉有效成分的关键所在。因此，灵芝孢子粉在食用(或药用)时，通常均要进行破壁处理。灵芝孢子粉的破壁工艺大致可分为5类：(1)生物法：主要包括溶菌法、激活孢子、酶解法等。(2)化学法：包括酸或碱降解、溶剂浸泡等。(3)物理法：包括超声波、微波、低温、脆化等方法。(4)机械法。挤压、碾压、气流粉碎、撞击、喷射粉碎等方法。(5)综合法：指结合上述多种方法的新型联用技术(赵洁胜魏联虞燕萍王翔谭荣德敖雷。灵芝孢子粉破壁率的检验方法研究进展。中国医药指南.2013,11(5)：431‐433)。从理论上分析，尽管目前有多种方法对灵芝孢子进行破壁处理，但最常用的还是其中的三类方法：机械、物理、化学和生物方法。其 中机械方法、物理方法主要是利用剪切力破坏细胞壁，化学方法是利用去污剂之类的试剂，而生物学方法主要是应用酶来消化细胞壁结构(夏志兰，王春晖，姜性坚，李元文，熊兴耀.灵芝孢子粉生物酶破壁技术的研究.食用菌学报.2005，12(1)：14‐18)。目前来看，机械法比较快捷，使用该方法研磨配合冷冻干燥的破壁效果是最好的(Zhao D，Chang MW，Li JS，Suen W，Huang J.Investigation of ice‐assisted sonication on the microstructure and chemical quality of Ganoderma lucidum spores.J Food Sci.2014，79(11)：E2253‐65.)，因此，在各类灵芝孢子粉加工中最常用；但这类方法破壁率不高，破壁后的孢子有可能会带入过量的重金属杂质，且有效成分受到严重破坏，以此为原料开发的药品功效不高。化学方法对于破坏细胞膜更有用，而利用商业化生产的纯酶破壁虽然有效，但操作繁琐，价格昂贵，不适合大量在生产上使用。因此，高效能的孢子破壁技术和破壁后有效成分的保护技术已成为灵芝孢子新药开发和利用的重要因素。经过对现有技术的检索发现，中国专利公开号CN1165032公开日1997.11.19，公开了一种灵芝孢子粉的破壁方法，该技术利用溶菌酶，蜗牛酶，纤维素酶或半纤维素酶中的一种或多种复合酶对灵芝孢子粉进行处理，用超声波进行破碎处理完成破壁过程，其破壁率达90％以上。中国专利公开号CN102960731A公开日2013.03.13，公开了一种抗氧化的破壁灵芝孢子粉的制备方法及产品，该技术将破壁灵芝孢子粉与几丁聚糖食醋胶体溶液充分混合，使破壁灵芝孢子粉充分吸附几丁聚糖食醋胶体溶液；再将吸附有几丁聚糖食醋胶体溶液的破壁灵芝孢子粉进行干燥，得到抗氧化的破壁灵芝孢子粉；这种方法在破壁灵芝孢子粉表面附上ー层壳聚糖保护膜，有效隔绝破壁灵芝孢子粉与外部环境空气的接触，因此提高了破壁灵芝孢子粉的抗氧化能力，有效地防止产品过氧化值升高，延长了保存期限，且提高了产品质量。上述现有技术利用生物酶对灵芝孢子粉破壁，提高了破壁率，利用破壁灵芝孢子粉与几丁聚糖食醋胶体溶液充分混合，解决了破壁灵芝孢子粉氧化的问题，有效保护了破壁孢子粉中的有效成分。前者在破壁率提高的同时，增加了成本，超声波破壁有可能引起部分有效成分的降解；后者仅注重了破壁后有效成分的保护，并未涉及在破壁过程中如何保护有效成分；且两者在生产的过程中有增加破壁的成本的问题。因此，有必要寻找一种简单经济的方法，在破壁的过程中保护孢子原有的活性成分，甚至增加孢子粉中活性成分的含量，并把这种方法用于生产，服务健康事业。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术存在的上述不足，提出一种基于灵芝菌丝分泌酶的灵芝孢子粉优化破壁方法，依据生物转化原理利用灵芝菌丝诱导产酶、并利用粗酶液辅助灵芝孢子粉的破壁，灵芝菌丝发酵粗酶液‐孢子粉的复合物中灵芝β‐葡聚糖和三萜类成分的含量明显增加，且安全、 易于吸收，可用于保健食品和药物开发等本专利技术是通过以下技术方案实现的：本专利技术通过将灵芝孢子粉和基于灵芝菌丝体接种发酵得到的粗酶液混合配制成悬浮液，经破壁均质处理后浓缩干燥得到破壁孢子粉。所述的粗酶液是指：采用灵芝菌丝体依次在诱导产酶培养基、灵芝预培养培养基和产酶培养基中培养后得到的上清液，其MnP酶活力为：灵芝Ganoderma lucidum51562酶活大于232.38(U/g)，灵芝Ganoderma lucidum00679酶活大于871.44(U/g)。所述的接种发酵包括：①预培养，是指在无菌条件下，将灵芝液体菌种按照5％‐10％的量(v/v)接入诱导产酶培养基中诱导培养；所述的诱导产酶培养基，即PDA固体培养基，通过以下方式制备得到：去皮马铃薯200g用700‐800mL蒸馏水煮30‐40min至烂，本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种基于灵芝菌丝分泌酶的灵芝孢子粉优化破壁方法，其特征在于，通过将灵芝孢子粉和基于灵芝菌丝体接种发酵得到的粗酶液混合配制成悬浮液，经破壁均质处理后浓缩干燥得到破壁孢子粉，所述的粗酶液是指：采用灵芝菌丝体依次在诱导产酶培养基、灵芝预培养培养基和产酶培养基中培养后得到的上清液。
【技术特征摘要】
1.一种基于灵芝菌丝分泌酶的灵芝孢子粉优化破壁方法，其特征在于，通过将灵芝孢子粉和基于灵芝菌丝体接种发酵得到的粗酶液混合配制成悬浮液，经破壁均质处理后浓缩干燥得到破壁孢子粉，所述的粗酶液是指：采用灵芝菌丝体依次在诱导产酶培养基、灵芝预培养培养基和产酶培养基中培养后得到的上清液。2.根据权利要求1所述的方法，其特征是，所述的接种发酵包括：①预培养，是指在无菌条件下，将灵芝菌丝体按照5‐10％的量(v/v)接入诱导产酶培养基中诱导培养；②扩大培养，是指将预培养后的菌种接入含有液态的灵芝预培养培养基的容器中，经两阶段旋转培养后取上清液得到；③发酵，是指将步骤②得到的上清液加入产酶培养基进行旋转培养后离心处理得到上清液。3.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的诱导产酶培养基，即PDA固体培养基，通过以下方式制备得到：去皮马铃薯200g用700‐800mL蒸馏水煮30‐40min至烂，用4层纱布过滤后溶入葡萄糖20g，KH2PO45g，MgSO4·7H2O 3g，维生素B10.01g，定容至1000mL，调pH值至6.5‐7.0，加入琼脂粉16～18g，121℃、1.034×105Pa、20min高压灭菌，冷至60℃时倒平板。4.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的灵芝预培养培养基通过以下方式制备得到：称取蔗糖35g，蛋白胨5g；酵母粉25g；KH2PO4·H2O 1g；MgSO4·7H2O 0.5g；维生素B10.05g于烧杯中，加入800mL去离子水，充分搅拌溶解，再补水至1000mL；调pH值到5.5，121℃、1.034×105Pa、20min高压灭菌。5.根据权利要求2所述的方法，其特征是，所述的两阶段旋转培养是指：用...
【专利技术属性】
技术研发人员：汪新，周选围，
申请(专利权)人：西藏圣龙实业有限公司，
类型：发明
国别省市：西藏;54
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