一种灵芝菌丝体液体发酵培养方法,包括以下步骤:(1)取地龙药材粉碎;(2)称取马铃薯葡萄糖肉汤培养基3‑5g,置于培养瓶中,加入蒸馏水和地龙细粉,煮沸,调整pH为7.0,灭菌;(3)制液体菌丝体;(4)移取步骤(3)所得液体菌丝体0.7‑0.9mL,转接到经步骤(2)处理的马铃薯葡萄糖肉汤培养基上,摇匀,在温度27‑29℃和180‑220r/min摇床振荡的条件下,培养4‑6天,之后转速降为100‑140r/min培养8‑10天,共培养12‑16天;再用4‑6层灭菌纱布过滤收集菌丝体,并用蒸馏水冲洗,真空冷冻干燥,即成。采用本发明专利技术能提高灵芝菌丝体的生物产量和三萜类组分的含量。
Ganoderma lucidum mycelium liquid fermentation culture method
A method for culture of Ganoderma lucidum mycelium liquid fermentation, which comprises the following steps: (1) take Dilong crushing; (2) the potato dextrose broth 3 5g, placed in the culture flask, add distilled water and earthworm powder, boil, adjusted pH 7, sterilization; (3) preparing liquid mycelia take steps; (4) (3) the liquid mycelia of 0.7 0.9mL, transferred to the step (2) processing potato dextrose broth medium, shake, at a temperature of 27 DEG C and 180 220r/min 29 shaking condition, cultured for 4 6 days after the speed is reduced to 100 140r/min 8 training 10 days, training a total of 12 16 days; and 4 6 layers of sterile gauze to filter the mycelium was collected, and rinsed with distilled water, vacuum freeze drying, namely. The invention can improve the biological yield of Ganoderma lucidum mycelium and the content of three terpene components.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种灵芝菌丝体液体发酵培养方法。
技术介绍
蚯蚓蛋白质含量很高,约占鲜蚯蚓的8%~10%,干重的56%~66%,氨基酸以谷氨酸、赖氨酸、精氨酸的含量居多。其冻干粉和体腔内液脂肪酸含量分析表明,不饱和脂肪酸含量高,饱和脂肪酸含量低,这些符合当前人类健康食品结构的要求。近年来已兴起一个开发蚯蚓保健食品热。蚯蚓的年贸易额在20亿美元左右,而每年正以20%-25%的速度递增,尤其是发达国家都在大力发展蚯蚓养殖业,目前已发展到工厂化养殖和商品化生产,养殖蚯蚓成了前景广阔的新兴养殖事业。蚯蚓饼干、罐头、蚯蚓肉和牛肉制成的汉堡包,更是畅销欧洲各地。目前蚯蚓的加工品主要有蚯蚓粉、蚯蚓液等多种形式。蚯蚓粉即将鲜蚯蚓风干或烘干后粉碎即成。蚯蚓粉的蛋白质含量高达70%,与进口鱼粉相当。其中精氨酸含量比鱼粉高2-3倍,色氨酸含量是牛肝的7倍,还含有较多的胡萝卜素和多种维生素及微量元素。蚯蚓不仅是一种理想的保健食品,同时也是一味珍贵的中药。蚯蚓的中药名字为地龙(Geosaurus)。地龙为环节动物门钜蚓科动物参环毛蚓Pheretimaas pergilum(E Perrier)等的干燥体,习称“广地龙”,其性寒、味咸,具有清热定惊,痛经活络、平喘利尿等功效,可用于关节麻痹,肢体麻木,半身不遂,高血压症等病症。灵芝Ganoderma lucidum为担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌,属我国名贵的药用真菌之一,具有悠久的临床用药历史。现代药理和营养学研究证明,灵芝子实体和菌丝体中含有多种相同的生物活性成分,如多糖、灵芝三萜、甾醇等,其中多糖和三萜是灵芝中关键的生物活性物质或有效成分。生产实际中多采用人工栽培的方法来获得灵芝子实体,但栽培的周期较长,约3个月左右。
技术实现思路
本专利技术要解决的技术问题是,克服现有技术的不足,提供一种灵芝菌丝体液体发酵培养方法,以缩短培养时间并提高灵芝菌丝体生物产量及单位重量干菌丝体中总三萜组分含量。本专利技术解决其技术问题采用的技术方案是,一种灵芝菌丝体液体发酵培养方法,具体包括以下步骤:(1)取地龙药材粉碎,过7号药典筛,得地龙细粉;(2)称取马铃薯葡萄糖肉汤培养基(Potato Dextrose Broth, PDB培养基)3-5g,置于培养瓶(培养瓶的大小根据试剂的多少来确定,此处优选250 mL培养瓶)中,加入75-125 mL蒸馏水和步骤(1)所得地龙细粉0.05-0.15g,煮沸,调整pH为7.0,灭菌,备用;调整pH值,优选用氢氧化钠溶液,更优选用0.1 mol/L的氢氧化钠溶液;所述灭菌,优选在121-126℃下高压灭菌15-30 min;(3)将灵芝斜面菌种转接成液体菌种,获得灵芝种子培养液,在无菌条件下4-6层纱布过滤,获得菌丝体,称取菌丝体2-3克,加入无菌水9-11mL,用组织匀浆器研匀成浆液,得液体菌丝体;(4)移取步骤(3)所得液体菌丝体0.7-0.9mL,转接到经步骤(2)处理的马铃薯葡萄糖肉汤培养基上,摇匀,在温度27-29℃和180-220r/min摇床振荡的条件下,培养4-6天,之后转速降为100-140r/min培养8-10天,共培养12-16天;再用4-6层灭菌纱布过滤收集菌丝体,并用蒸馏水冲洗(优选冲洗5~6次),真空冷冻干燥,即成。研究证明,由于蚯蚓粉(地龙粉)主要成分与灵芝液体培养基的成分近似,蚯蚓粉的加入或许对灵芝液体发酵菌丝体的生物产量和有效组分含量带来一定的影响。本专利技术添加少量蚯蚓粉与马铃薯葡萄糖肉汤培养基(Potato Dextrose Broth, PDB)联合培养灵芝液体菌种。采用液体发酵技术来获取灵芝菌丝体可以极大地缩短培养时间并获得相同活性的有效成分,而蚯蚓粉的添加将进一步提高灵芝菌丝体的生物产量和有效组分的含量。本专利技术得到的灵芝菌丝体生物产量(即干重)较对照组(现有技术,不添加地龙粉)提高1.78倍左右,单位重量干菌丝体中总三萜组分含量提高约1.58倍,由此可见添加少量蚯蚓粉与PDB培养基来联合培养灵芝液体菌种,与经典的液体培养相比,能进一步提高灵芝菌丝体的生物产量和三萜类组分的含量。具体实施方式以下结合具体实施例对本专利技术作进一步详细说明。实施例1本实施例之灵芝菌丝体液体发酵培养方法,具体包括以下步骤:(1)取地龙药材粉碎,过7号药典筛,得地龙细粉;(2)称取马铃薯葡萄糖肉汤培养基(Potato Dextrose Broth, PDB培养基)3g,置于250 mL培养瓶中,加入100 mL蒸馏水和步骤(1)所得地龙细粉0.05g,煮沸,调整pH为7.0,灭菌,备用;调整pH值,用0.1 mol/L的氢氧化钠溶液;所述灭菌,在121℃下高压灭菌20 min;(3)将灵芝斜面菌种(市售)转接成液体菌种,获得灵芝种子培养液,在无菌条件下4层纱布过滤,获得菌丝体,称取菌丝体2克,加入无菌水9mL,用组织匀浆器研匀成浆液,得液体菌丝体;(4)移取步骤(3)所得液体菌丝体0.7mL,转接到经步骤(2)处理的马铃薯葡萄糖肉汤培养基上,摇匀,在温度27℃和180r/min摇床振荡的条件下,培养4天,之后转速降为100r/min培养8天,共培养12天;再用4层灭菌纱布过滤收集菌丝体,并用蒸馏水冲洗5次,真空冷冻干燥,即成。实施例2本实施例之灵芝菌丝体液体发酵培养方法,具体包括以下步骤:(1)取地龙药材粉碎,过7号药典筛,得地龙细粉;(2)称取马铃薯葡萄糖肉汤培养基(Potato Dextrose Broth, PDB培养基)5g,置于250 mL培养瓶中,加入125 mL蒸馏水和步骤(1)所得地龙细粉0.15g,煮沸,调整pH为7.0,灭菌,备用;调整pH值,用0.1 mol/L的氢氧化钠溶液;所述灭菌,在121℃下高压灭菌20 min;(3)将灵芝斜面菌种(市售)转接成液体菌种,获得灵芝种子培养液,在无菌条件下6层纱布过滤,获得菌丝体,称取菌丝体3克,加入无菌水11mL,用组织匀浆器研匀成浆液,得液体菌丝体;(4)移取步骤(3)所得液体菌丝体0.9mL,转接到经步骤(2)处理的马铃薯葡萄糖肉汤培养基上,摇匀,在温度29℃和220r/min摇床振荡的条件下,培养6天,之后转速降为140r/min培养10天,共培养16天;再用6层灭菌纱布过滤收集菌丝体,并用蒸馏水冲洗6次,真空冷冻干燥,即成。方法评价灵芝菌丝体液体发酵共做3个处理:空白组(不添加蚯蚓粉)、试验组(添加蚯蚓粉,即实施例1)和对照组(添加与实施例1相同量的大米粉),空白组、试验组和对照组其他条件都相同,每组各5个重复。为了考察是否由于固体小颗粒(如大米粉、蚯蚓粉)作为母核能促进菌丝球的形成,设置了过7号筛的等量大米粉对照组。将各组所得菌丝体经冷冻干燥后测定生物产量和三萜类组分的含量,并采用PASW Statistics 18对数据结果进行统计分析,结果如下。1、生物产量:采用干重法。将培养的菌液用多层纱布过滤后,真空冷冻干燥,精确称重,计算每100 mL培养基菌丝粉质量。表1为不同处理方法与生物产量的结果。2、三萜组分含量测定:参考2015年中国药典第一部中关于灵芝有效成分含量检测方法,如下。(1)对照品溶液的制备。取齐墩果酸对照品适量,精密称定,加甲醇制成每l 本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种灵芝菌丝体液体发酵培养方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取地龙药材粉碎,过7号药典筛,得地龙细粉;(2)称取马铃薯葡萄糖肉汤培养基3‑5g,置于培养瓶中,加入75‑125 mL蒸馏水和步骤(1)所得地龙细粉0.05‑0.15g,煮沸,调整pH为7.0,灭菌,备用;(3)将灵芝斜面菌种转接成液体菌种,获得灵芝种子培养液,在无菌条件下4‑6层纱布过滤,获得菌丝体,称取菌丝体2‑3克,加入无菌水9‑11mL,用组织匀浆器研匀成浆液,得液体菌丝体;(4)移取步骤(3)所得液体菌丝体0.7‑0.9mL,转接到经步骤(2)处理的马铃薯葡萄糖肉汤培养基上,摇匀,在温度27‑29℃和180‑220r/min摇床振荡的条件下,培养4‑6天,之后转速降为100‑140r/min培养8‑10天,共培养12‑16天;再用4‑6层灭菌纱布过滤收集菌丝体,并用蒸馏水冲洗,真空冷冻干燥,即成。
【技术特征摘要】
1.一种灵芝菌丝体液体发酵培养方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)取地龙药材粉碎,过7号药典筛,得地龙细粉;(2)称取马铃薯葡萄糖肉汤培养基3-5g,置于培养瓶中,加入75-125 mL蒸馏水和步骤(1)所得地龙细粉0.05-0.15g,煮沸,调整pH为7.0,灭菌,备用;(3)将灵芝斜面菌种转接成液体菌种,获得灵芝种子培养液,在无菌条件下4-6层纱布过滤,获得菌丝体,称取菌丝体2-3克,加入无菌水9-11mL,用组织匀浆器研匀成浆液,得液体菌丝体;(4)移取步骤(3)所得液体菌丝体0.7-0.9mL,转接到经步骤(2)处理的马铃薯葡萄糖肉汤培养基上,摇匀,在温度27-29℃和180-220r/min摇床振荡的条件下,培养4-6天,之后转速降为100-140r/min培养8-10天,...
【专利技术属性】
技术研发人员:谢玲,夏志兰,
申请(专利权)人:湖南农业大学,
类型:发明
国别省市:湖南;43
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