特效干细胞体外诱导技术制造技术

本发明专利技术公开了一种特效干细胞体外诱导技术，包括如下步骤：人脐带干细胞的分离和培养：采用人脐带干细胞，无菌取人脐带华通氏胶,收集细胞悬浮液，原代培养24h和48h各换液1次；再原代培养7d，如果观察到细胞成片，则用胰酶消化后传代到新瓶中，丢弃悬浮细胞，而人脐带干细胞大多数牢固贴壁；加入全培养基开始传代培养，以后每3 d更换1次培养液，连续传3代；体外人脐带干细胞诱导：选取传代时间合适的3代以内干细胞，换液后添加诱导分化剂5‑氮杂胞苷，再添加肝细胞生长因子HGF、基础生长因子EGF+bFGF和干细胞因子SGF，体外诱导24h。本发明专利技术使用最新一代的体外诱导技术，让体内干细胞的靶向归巢率为100%。

In vitro induction of specific stem cells

The invention discloses a specific stem cells, which comprises the following steps: separating and culturing cells of human umbilical cord by human umbilical cord stem cells harvested from human umbilical cord Wharton's jelly, collected cell suspension, the primary culture of 24h and 48h was changed 1 times; then the original Daipei raises 7d, if observed cell groups, by trypsin digestion and passage into new bottles, discarded suspension cells, and human umbilical cord stem cells most firmly adherent; join the whole culture medium began subcultured every 3 D to replace the 1 medium, 3 generations; in vitro human umbilical cord stem cells: select the appropriate time passage the 3 generations of stem cells for liquid added after differentiation agent 5 5-azacytidine, add hepatocyte growth factor HGF and basic growth factor EGF+bFGF and stem cell factor SGF, induced by 24h in vitro. The present invention uses the latest generation of in vitro induction technology to achieve the target homing rate of 100%.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物工程
，具体的说是涉及一种特效干细胞体外诱导技术。
技术介绍
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞；根据干细胞的发育潜能分为三类:全能干细胞、多能干细胞和专能干细胞。干细胞是一种未充分分化，尚不成熟的细胞，具有再生各种组织器官和人体的潜在功能，医学界称为“万用细胞”。人脐带干细胞来自新生儿，取材方便，易于体外扩增，使用安全，无病毒感染风险，而且不受伦理和法律限制，所以人脐带干细胞是干细胞体外诱导技术的首选材料。目前国内现有的干细胞体外诱导技术中，体内干细胞的靶向归巢率不是很理想，所以使得干细胞的利用率不是很高，如果能够提供一种新型的特效干细胞体外诱导技术，该技术能够使体内干细胞的靶向归巢率达到100%，将成为干细胞体外诱导技术的一个重大突破。
技术实现思路
本专利技术为了克服现有技术存在的不足，提供一种能够使体内干细胞的靶向归巢率达到100%的特效干细胞体外诱导技术。本专利技术是通过以下技术方案实现的：一种特效干细胞体外诱导技术，其具体包括如下步骤：1）人脐带干细胞的分离和培养：首先采用人脐带干细胞，无菌取人脐带华通氏胶,用含12% FBS的DMEM培养液反复冲洗华通氏胶，收集细胞悬浮液，原代培养24h和48h各换液1次；再原代培养7d，如果观察到细胞成片，则用质量百分数为0.3%的胰酶消化后传代到新瓶中，孵箱静置40min后，瓶底朝上，轻轻吹打，丢弃悬浮细胞，而人脐带干细胞大多数牢固贴壁；最后加入全培养基开始传代培养，以后每3 d更换1次培养液，连续传3代；2）体外人脐带干细胞诱导：选取传代时间合适的3代以内干细胞，换液后添加诱导分化剂5-氮杂胞苷，再添加肝细胞生长因子HGF、基础生长因子EGF+bFGF和干细胞因子SGF，体外诱导24h，其中各因子的浓度分别为：肝细胞生长因子15μg/L、5-氮杂胞苷20～30μmol/L、干细胞因子12～20μg/L、EGF 20μg/L、bFGF 50μg/L。本专利技术干细胞体外诱导技术用到的材料有：Ⅱ型胶原酶、低糖DMEM培养基、兔抗人HCN 4多克隆抗体、优质胎牛血清、胰蛋白酶、5-氮杂胞苷(5AZA)、大鼠抗人心肌肌钙蛋白T(cTnT)单克隆抗体、兔抗人连接蛋白43(connexin 43)多克隆抗体、重组人肝细胞生长因子(HGF)、重组人内皮细胞生长因子(EGF)、重组人碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)和重组人干细胞因子(SCF)。本专利技术的有益效果是：本专利技术中的特效干细胞体外诱导技术使用最新一代的体外诱导技术invitrol，让体内干细胞的靶向归巢率为100%，属于特效干细胞信息靶向技术（The target of the homing）的最新体外诱导方法。具体实施方式以下结合具体实施方式对本专利技术作详细描述。一种特效干细胞体外诱导技术，具体包括如下步骤：1）人脐带干细胞的分离和培养：本实验采用人脐带干细胞，无菌取人脐带华通氏胶，用含12% FBS的DMEM培养液反复冲洗华通氏胶，收集细胞悬浮液，原代培养24h和48h各换液1次；再原代培养7d左右，如果观察到细胞成片，则用0.3%胰酶消化后传代到新瓶中，孵箱静置40min后，瓶底朝上，轻轻吹打，丢弃悬浮细胞(主要是上皮细胞)，而人脐带干细胞大多牢固贴壁；加入全培养基开始传代培养，以后每3d更换1次培养液，连续传3代左右；2）体外人脐带干细胞诱导：选取传代时间合适的干细胞(3代以内)，换液后添加诱导分化剂5-氮杂胞苷(5AZA)、肝细胞生长因子(HGF)、基础生长因子(EGF+bFGF)和干细胞因子(SGF)。其中各因子的浓度分别为：肝细胞生长因子15μg/L、5AZA 20～30μmol/L、干细胞因子12～20μg/L、EGF 20μg/L、bFGF 50μg/L，体外诱导24h。最后应当说明的是，以上内容仅用以说明本专利技术的技术方案，而非对本专利技术保护范围的限制，本领域的普通技术人员对本专利技术的技术方案进行的简单修改或者等同替换，均不脱离本专利技术技术方案的实质和范围。本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种特效干细胞体外诱导技术，其特征在于：所述特效干细胞体外诱导技术具体包括如下步骤：1）人脐带干细胞的分离和培养：首先采用人脐带干细胞，无菌取人脐带华通氏胶,用含12% FBS的DMEM培养液反复冲洗华通氏胶，收集细胞悬浮液，原代培养24h和48h各换液1次；再原代培养7d，如果观察到细胞成片，则用质量百分数为0.3%的胰酶消化后传代到新瓶中，孵箱静置40min后，瓶底朝上，轻轻吹打，丢弃悬浮细胞，而人脐带干细胞大多数牢固贴壁；最后加入全培养基开始传代培养，以后每3 d更换1次培养液，连续传3代；2）体外人脐带干细胞诱导：选取传代时间合适的3代以内干细胞，换液后添加诱导分化剂5‑氮杂胞苷，再添加肝细胞生长因子HGF、基础生长因子EGF+bFGF和干细胞因子SGF，体外诱导24h。

【技术特征摘要】
1.一种特效干细胞体外诱导技术，其特征在于：所述特效干细胞体外诱导技术具体包括如下步骤：1）人脐带干细胞的分离和培养：首先采用人脐带干细胞，无菌取人脐带华通氏胶,用含12% FBS的DMEM培养液反复冲洗华通氏胶，收集细胞悬浮液，原代培养24h和48h各换液1次；再原代培养7d，如果观察到细胞成片，则用质量百分数为0.3%的胰酶消化后传代到新瓶中，孵箱静置40min后，瓶底朝上，轻轻吹打，丢弃悬浮细胞，而人脐带干细胞大多数牢固贴壁；最后加入全培养基开始传代培养，...

【专利技术属性】
技术研发人员：王浩，
申请(专利权)人：上海俏佳人医疗美容门诊部股份有限公司，
类型：发明
国别省市：上海;31