吖啶标记结合物及其制备方法、化学发光免疫检测试剂盒技术

本发明专利技术公开了一种吖啶标记结合物及其制备方法、化学发光免疫检测试剂盒。吖啶标记结合物包括依次连接的吖啶取代物、连接载体、双功能交联剂和待标记物。吖啶取代物与连接载体上的氨基反应形成‑CO‑NH‑结构从而将吖啶取代物与连接载体连接。通过连接载体以及含有马来酰亚胺基及酰肼基的双功能交联剂，吖啶取代物与待标记物不直接发生化学键连接，避免了吖啶取代物对待标记物上的活性位点形成干扰，使得吖啶标记结合物的活性相对较高，提高免疫分析的灵敏度。

Acridine tag conjugates, preparation method thereof, and chemiluminescent immunoassay kit

The invention discloses an acridine labeled conjugate and a preparation method thereof. The present invention relates to a acridine labeled conjugate, which comprises an acridine substitute, a connecting carrier, a bifunctional crosslinking agent and a marker to be labeled. Acridine substituents connected with amino reaction on carrier formation CO NH structure which will substitute in connection with the carrier connecting acridine. Through the dual function of connecting carrier and crosslinking agent containing maleimide group and hydrazide group, acridine substitute and markers to be not directly linked with chemical bond, to avoid the substitution to the active site of acridine markers on the formation of interference, the acridine conjugates of relatively high activity, improve the sensitivity of immunoassay.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及体外检测领域，尤其涉及一种吖啶标记结合物及其制备方法、化学发光免疫检测试剂盒。
技术介绍
化学发光标记免疫分析又称化学发光免疫分析(CLIA)，是用化学发光剂直接标记抗原、半抗原、抗体或碳水化合物的免疫分析方法。常用于标记的化学发光物质有吖啶类化合物(acridinium ester，AE)。其通过起动发光试剂(NaOH、H2O2)作用而发光，强烈的直接发光在一秒钟内完成，为快速的闪烁发光。吖啶类化合物作为标记物用于免疫分析，其化学反应简单、快速、无须催化剂，检测小分子抗原采用竞争法，大分子抗原或者抗体则采用夹心法，非特异性结合少，本底低，与大分子的结合不会减小所产生的光量，从而增加灵敏度。吖啶类化合物可标记抗原抗体等形成吖啶标记结合物。吖啶标记结合物质量的好坏直接关系到化学发光免疫技术的成功与否，因此是试剂盒中一个很关键的试剂。吖啶标记结合物一般通过吖啶类化合物与特异性抗体经适当方法连接而成，吖啶类化合物和抗体将直接影响吖啶标记结合物的发光产率、背景干扰及亲和力等能力。目前常用的吖啶标记结合物的制备方法是碳二亚胺交联法，以碳二亚胺双功能交联剂为桥，使吖啶取代物与待标记物结合。然而，传统方法制得的吖啶标记结合物中，由于吖啶取代物与待标记物需要通过碳二亚胺直接结合，吖啶取代物往往会对待标记蛋白上的活性位点形成干扰，待标记物上可选择结合的活性位点少，造成吖啶标记结合物的活性降低，影响免疫分析的灵敏度。
技术实现思路
基于此，有必要提供一种活性相对较高的吖啶标记结合物及其制备方法、化学发光免疫检测试剂盒。一种吖啶标记结合物，包括依次连接的吖啶取代物、连接载体、双功能交联剂和待标记物；所述双功能交联剂为含有马来酰亚胺基及酰肼基的交联剂；所述待标记物为含有巯基、羰基或羧基的蛋白、改性蛋白、多肽、改性多肽或碳水化合物；所述连接载体含有氨基和羧基，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的羧基与所述双功能交联剂上的酰肼基反应形成-CO-NH-NH-结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基与所述待标记物上的巯基反应形成结构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接；或者，所述连接载体含有氨基及二硫键，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的二硫键与所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基反应形成结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的酰肼基与所述待标记物上的羰基或羧基反应形成-NH-NH-CO-构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接。在一个实施方式中，所述吖啶取代物为吖啶酯、吖啶酸、吖啶酰胺或吖啶磺酰胺。在一个实施方式中，所述连接载体为含有氨基、羧基及二硫键的血蓝蛋白。在一个实施方式中，所述待标记物为抗原、半抗原或抗体。一种上述吖啶标记结合物的制备方法，包括如下步骤：用活化后的吖啶取代物与连接载体反应得到中间产物B，其中，所述中间产物B为吖啶取代物-连接载体结合物；以及将所述中间产物B、双功能交联剂以及待标记物交联反应后得到吖啶标记结合物，其中，所述吖啶标记结合物包括依次连接的吖啶取代物、连接载体、双功能交联剂和待标记物，所述连接载体含有氨基和羧基，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的羧基与所述双功能交联剂上的酰肼基反应形成-CO-NH-NH-结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基与所述待标记物上的巯基反应形成结构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接；或者，所述连接载体含有氨基及二硫键，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的二硫键与所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基反应形成结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的酰肼基与所述待标记物上的羰基或羧基反应形成-NH-NH-CO-构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接。在一个实施方式中，将所述中间产物B、双功能交联剂以及待标记物交联反应后得到吖啶标记结合物的操作具体包括以下步骤：用中间产物B与双功能交联剂反应生成中间产物D，其中，所述中间产物D为吖啶取代物-连接载体-双功能交联剂结合物，所述双功能交联剂为含有马来酰亚胺基及酰肼基的交联剂，所述中间产物B中的连接载体上的羧基与所述双功能交联剂上的酰肼基反应形成-CO-NH-NH-结构从而将所述中间产物B与所述双功能交联剂连接；以及将所述中间产物D与待标记物结合得到吖啶标记结合物，其中，所述待标记物为含有巯基、羰基或羧基的蛋白、改性蛋白、多肽、改性多肽或碳水化合物，所述中间产物D中的双功能交联剂上的马来酰亚胺基与所述待标记物上的巯基反应形成结构从而将所述中间产物D与所述待标记物连接。在一个实施方式中，将所述中间产物B、双功能交联剂以及待标记物交联反应后得到吖啶标记结合物的操作具体包括以下步骤：将中间产物B进行活化处理，使得所述中间产物B中的连接载体上的二硫键活化形成巯基，得到中间产物F，其中，所述中间产物F为含有巯基的吖啶取代物-连接载体结合物；将待标记物与双功能交联剂反应生成中间产物I，其中，所述中间产物I为待标记物-双功能交联剂结合物，所述待标记物为含有巯基、羰基或羧基的蛋白、改性蛋白、多肽、改性多肽或碳水化合物，所述双功能交联剂为含有马来酰亚胺基及酰肼基的交联剂，所述双功能交联剂上的酰肼基与所述待标记物上的羰基或羧基反应形成-NH-NH-CO-构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接；以及将所述中间产物I与所述中间产物F结合得到吖啶标记结合物，其中，所述中间产物I中的双功能交联剂上马来酰亚胺基与所述中间产物F上的巯基反应形成结构从而将所述中间产物I与所述中间产物F连接。在一个实施方式中，用活化后的吖啶取代物与连接载体反应得到中间产物B的操作中，所述活化后的吖啶取代物与所述连接载体的摩尔比为1～5000：1。在一个实施方式中，用中间产物B与双功能交联剂反应生成中间产物D的操作中，所述双功能交联剂与所述中间产物B的摩尔比为1～10000：1。一种化学发光免疫检测试剂盒，包括上述任一项所述的吖啶标记结合物。这种吖啶标记结合物包括依次连接的吖啶取代物、连接载体、双功能交联剂和待标记物。吖啶取代物与连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将吖啶取代物与连接载体连接。连接载体上的羧基与双功能交联剂上的酰肼基反应形成-CO-NH-NH-结构从而将连接载体与双功能交联剂连接，双功能交联剂上的马来酰亚胺基与待标记物上的巯基反应形成结构从而将双功能交联剂与待标记物连接。或者另一种方式，连接载体上的二硫键与双功能交联剂上的马来酰亚胺基反应形成结构从而将连接载体与双功能交联剂连接，双功能交联剂上的酰肼基与待标记物上的羰基或羧基反应形成-NH-NH-CO-构从而将双功能交联剂与待标记物连接。通过含有连接载体以及含有马来酰亚胺基及酰肼基的双功能交联剂，吖啶取代物与待标记物没有直接通过本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种吖啶标记结合物，其特征在于，包括依次连接的吖啶取代物、连接载体、双功能交联剂和待标记物；所述双功能交联剂为含有马来酰亚胺基及酰肼基的交联剂；所述待标记物为含有巯基、羰基或羧基的蛋白、改性蛋白、多肽、改性多肽或碳水化合物；所述连接载体含有氨基和羧基，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成‑CO‑NH‑结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的羧基与所述双功能交联剂上的酰肼基反应形成‑CO‑NH‑NH‑结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基与所述待标记物上的巯基反应形成结构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接；或者，所述连接载体含有氨基及二硫键，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成‑CO‑NH‑结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的二硫键与所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基反应形成结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的酰肼基与所述待标记物上的羰基或羧基反应形成‑NH‑NH‑CO‑构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接。

【技术特征摘要】
1.一种吖啶标记结合物，其特征在于，包括依次连接的吖啶取代物、连接载体、双功能交联剂和待标记物；所述双功能交联剂为含有马来酰亚胺基及酰肼基的交联剂；所述待标记物为含有巯基、羰基或羧基的蛋白、改性蛋白、多肽、改性多肽或碳水化合物；所述连接载体含有氨基和羧基，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的羧基与所述双功能交联剂上的酰肼基反应形成-CO-NH-NH-结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基与所述待标记物上的巯基反应形成结构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接；或者，所述连接载体含有氨基及二硫键，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的二硫键与所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基反应形成结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的酰肼基与所述待标记物上的羰基或羧基反应形成-NH-NH-CO-构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接。2.根据权利要求1所述的吖啶标记结合物，其特征在于，所述吖啶取代物为吖啶酯、吖啶酸、吖啶酰胺或吖啶磺酰胺。3.根据权利要求1所述的吖啶标记结合物，其特征在于，所述连接载体为含有氨基、羧基及二硫键的血蓝蛋白。4.根据权利要求1所述的吖啶标记结合物，其特征在于，所述待标记物为抗原、半抗原或抗体。5.一种权利要求1～4中任一项所述的吖啶标记结合物的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：用活化后的吖啶取代物与连接载体反应得到中间产物B，其中，所述中间产物B为吖啶取代物-连接载体结合物；以及将所述中间产物B、双功能交联剂以及待标记物交联反应后得到吖啶标记结合物，其中，所述吖啶标记结合物包括依次连接的吖啶取代物、连接载体、双功能交联剂和待标记物，所述连接载体含有氨基和羧基，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的羧基与所述双功能交联剂上的酰肼基反应形成-CO-NH-NH-结构从而将所述连接载体与所述双功能交联剂连接，所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基与所述待标记物上的巯基反应形成结构从而将所述双功能交联剂与所述待标记物连接；或者，所述连接载体含有氨基及二硫键，所述吖啶取代物与所述连接载体上的氨基反应形成-CO-NH-结构从而将所述吖啶取代物与所述连接载体连接，所述连接载体上的二硫键与所述双功能交联剂上的马来酰亚胺基反应形成结构从而将所述连...

【专利技术属性】
技术研发人员：钱纯亘，刘陶旭，肖成勇，祝亮，夏福臻，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44