一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒制造技术

本发明专利技术公开了一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于：包括盒体，所述盒体内设置有预包被化学发光板和试剂，所述试剂包括CLB系列标准品溶液、CLB系列质控品、HRP‑抗CLB抗体、发光液A、发光液B和浓缩洗涤液。本发明专利技术提供的一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，将化学发光和酶联免疫技术相结合，具有灵敏度高、线性范围宽、分析方法更简便快速、稳定性强、高特异性等特点。

Reagent kit for quantitative determination of clenbuterol hydrochloride by chemiluminescence method

The invention discloses a clenbuterol chemiluminescence quantitative assay kit, which comprises a box body, wherein a pre coated plate and chemiluminescence reagent box set, the reagent standard solution, including the CLB series CLB series quality control, HRP anti CLB anti body, light emitting liquid A, B luminescent liquid and condensed washing liquid. A clenbuterol chemiluminescence quantitative assay kit provided by the invention, the chemiluminescence and enzyme-linked immunosorbent assay combined with the characteristics of high sensitivity, wide linear range, simple and fast analytical method, strong stability, high specificity etc..

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，尤其涉及一种用于检测牛、羊、禽、猪等畜禽的肝、肾、肌肉等组织样本、尿液样本中的盐酸克伦特罗含量的化学发光法定量测定试剂盒；属于免疫学检测

技术介绍
盐酸克伦特罗(Clenbuterol，CLB)又称“瘦肉精”，是一种人工合成的肾上腺素受体选择性激动剂，用于治疗支气管哮喘、慢性支气管炎和肺气肿等疾病。CLB能降低胴体脂肪沉积和增加肌肉的合成，曾被用作牛、羊、禽、猪等畜禽的促生长剂，使得瘦肉率提高，带来更多经济价值。但是CLB会对人体造成毒副作用，故被列为禁用药品。但是，由于养殖户的非法使用或不遵守休药期，是造成CLB超标的主要原因。目前最为常用的CLB检测方法包括色谱法和免疫分析法。气相色谱-质谱联用(GC-MS)和液相色谱-质谱联用(LC-MS)等色谱方法操作步骤繁琐，需要贵重仪器，所以一般在对阳性结果做出准确判断时使用。而免疫检测法成本低、操作简单，更适合大规模的普遍检测，但是存在灵敏度低的问题。本专利技术的化学发光酶免疫分析法(CLEIA)将化学发光和酶联免疫技术相结合，具有灵敏度高、线性范围宽、分析方法更简便快速、稳定性强特点。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，提供一种将化学发光法和酶联免疫分析法结合，因此同时具有化学发光法的高灵敏性和免疫分析法的高特异性的盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒。为解决上述技术问题，本专利技术采用的技术方案为：一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，包括盒体，所述盒体内设置有预包被化学发光板和试剂，所述试剂包括CLB系列标准品溶液、CLB系列质控品、HRP-抗CLB抗体、发光液A、发光液B和浓缩洗涤液。所述预包被化学发光板的制备方法包括以下步骤：取乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光板，将CLB-HSA交联复合物置于包被溶液中，混合均匀后吸取适量加入至化学发光板的微孔中，在37℃恒温箱中放置2-2.5小时，完成包被过程，形成固相抗原；用稀释过的所述浓缩洗涤液多次洗涤化学发光板；包被好的化学发光板再用封闭溶液封闭，在37℃恒温箱中放置2-2.5小时，完成封闭过程。所述包被溶液包括pH9.4-9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液；所述包被溶液的浓度为0.95-1.05μg/mL；所述封闭溶液包括其中含BSA、4.8-5.2‰的P300的磷酸盐缓冲液)，所述BSA溶液的浓度为9.8-10.2g/L。所述浓缩洗涤液为20×洗涤液，所述20×洗涤液为含有0.99-1.01％吐温-20的pH7.3-7.5，0.19-0.21mol/L的磷酸盐缓冲液；所述浓缩洗涤液使用时稀释成1×洗涤液，所述1×洗涤液为含有0.045-0.055％吐温-20的pH7.3-7.5，0.009-0.011mol/L的磷酸盐缓冲液。所述HRP-抗CLB抗体的制备方法包括以下步骤：取适量HRP溶解于蒸馏水中，加入适量新配的0.09-0.11M NaIO4溶液，室温下避光搅拌18-22分钟后装入透析袋中，将透析袋置于1mM pH4.3-4.5的醋酸钠缓冲液透析，4℃过夜；将透析袋中的HRP转移至离心管中，取适量HRP加入适量标记液和待标记CLB抗体；标记过程如下：在室温避光条件下轻轻搅拌1.9-2.1小时后加适量新配的3.9-4.1mg/mLNaBH4液，混匀，再3.8-4.2℃条件下放置1.9-2.1小时，而后转移至准备好的透析袋中，置于透析液中，并置在磁力搅拌器上进行透析，透析液需4～6h更换一次，更换5次后即可收HRP-抗CLB抗体。所述标记液包括pH9.4-9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液；所述透析液包括pH7.3-7.5的磷酸二氢钠-磷酸氢二钠-氯化钠-氯化钾溶液。所述发光液A为鲁米诺含量为0.009-0.011M、对甲苯酚含量为0.0009-0.0011M，pH8.7-8.9的三(羟甲基)氨基甲烷溶液。所述发光液B为每100mL溶液含柠檬酸2.05-2.15g，无水Na2HPO4 2.81-2.83g，0.75％的过氧化氢脲0.63-0.65mL的水溶液。CLEIA采用了竞争法，主要原理是将CLB-人血清白蛋白(CLB-HSA)交联复合物包被于微孔板中形成固相抗原，在包被后的微孔中加入标准品、质控品、样品和HRP-抗CLB抗体反应后，弃上清洗涤，最终形成固相抗原-抗CLB抗体复合物-HRP，加入发光液A、发光液B，立刻读数获得RLU值。在整个反应过程中，样品中CLB含量越高，反应体系中发光强度越低；反之，样品中CLB含量越少，发光强度越高。本专利技术提供的CLB的CLEIA检测试剂盒适用于用于检测牛、羊、禽、猪等畜禽的肝、肾、肌肉等组织样本、尿液样本中的CLB含量，以及CLB中毒小鼠模型的肝、肾、肌肉等组织样本中的CLB含量。本专利技术的有益效果：本专利技术的化学发光酶免疫分析法(CLEIA)将化学发光和酶联免疫技术相结合，具有灵敏度高、线性范围宽、分析方法更简便快速、稳定性强、高特异性、准确度高等特点，与传统的ELISA法比较，操作时间大幅度减少。附图说明图1为本专利技术的原理图；图2为本专利技术的工艺流程图；图3为本专利技术的标准曲线图。具体实施方式下面结合附图对本专利技术作更进一步的说明。实施例1如图1～图3所示，一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，包括盒体，所述盒体内设置有预包被化学发光板和试剂，所述试剂包括CLB系列标准品溶液、CLB系列质控品、HRP-抗CLB抗体、发光液A、发光液B和浓缩洗涤液。CLB的CLEIA检测试剂盒的性能考察：用0、0.1、1、5、10、25、50μg/L的CLB标准品溶液建立起标准曲线，根据标准曲线考察该试剂盒性能，检测限是指IC10所对应的浓度值。检测范围是指IC15～IC90所对应的浓度值范围。指灵敏度是指抑制率为50％时(IC50)的浓度。该CLB的CLEIA检测试剂盒的检测范围为0.2145～40.3928μg/L，理论最低检测限为0.2145μg/L，灵敏度IC50为2.1377μg/L。CLB的CLEIA检测试剂盒的交叉反应性考察：分别用系列浓度梯度的盐酸克伦特罗，莱克多巴胺，沙丁胺醇作为样本，用本试剂盒检测，获得抑制率为50％时(IC50)的浓度。交叉反应率％＝IC50(盐酸克伦特罗)/IC50(其他药物)×100。CLB的CLEIA检测试剂盒的交叉反应性如表1所示，与盐酸克伦特罗，莱克多巴胺，沙丁胺醇几乎无交叉反应性。表1CLB的化学发光酶免疫(CLEIA)检测试剂盒的交叉反应性CLB的CLEIA检测试剂盒的准确度考察：根据CLB的CLEIA测定方法的检测步骤，取定值样本进行检测。重复测量3次后，其平均结果记为M，根据公式(1)计算测量浓度的相对偏差。B＝(M-T)/T×100％ 式(1)式(1)中：B代表相对偏差；M代表测量浓度3次结果的平均值；T代表定值样本的浓度。准确度结果如表2所示，其相对偏差为5.67％，小于10％，显示该试剂盒在检测样本时具有较好的准确度：表2：CLB的化学发光酶免疫(CLEIA)检测试剂盒的准确度CLB的CLEIA检测试剂盒的重复性考察：用两个浓度水平的样本各重复检测10次，计算10次测量浓度结果的平均值M和标准差SD，根据公式(2)本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于：包括盒体，所述盒体内设置有预包被化学发光板和试剂，所述试剂包括CLB系列标准品溶液、CLB系列质控品、HRP‑抗CLB抗体、发光液A、发光液B和浓缩洗涤液。

【技术特征摘要】
1.一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于：包括盒体，所述盒体内设置有预包被化学发光板和试剂，所述试剂包括CLB系列标准品溶液、CLB系列质控品、HRP-抗CLB抗体、发光液A、发光液B和浓缩洗涤液。2.根据权利要求1所述的一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于：所述预包被化学发光板的制备方法包括以下步骤：取乳白色不透明聚苯乙烯96孔化学发光板，将CLB-HSA交联复合物置于包被溶液中，混合均匀后吸取适量加入至化学发光板的微孔中，在37℃恒温箱中放置2-2.5小时，完成包被过程，形成固相抗原；用稀释过的所述浓缩洗涤液多次洗涤化学发光板；包被好的化学发光板再用封闭溶液封闭，在37℃恒温箱中放置2-2.5小时，完成封闭过程。3.根据权利要求2所述的一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于：所述包被溶液包括pH9.4-9.6的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲溶液；所述包被溶液的浓度为0.95-1.05μg/mL；所述封闭溶液包括其中含BSA、4.8-5.2‰的P300的磷酸盐缓冲液)，所述BSA溶液的浓度为9.8-10.2g/L。4.根据权利要求1或2所述的一种盐酸克伦特罗化学发光法定量测定试剂盒，其特征在于：所述浓缩洗涤液为20×洗涤液，所述20×洗涤液为含有0.99-1.01％吐温-20的pH7.3-7.5，0.19-0.21mol/L的磷酸盐缓冲液；所述浓缩洗涤液使用时稀释成1×洗涤液，所述1×洗涤液为含有0.045-0.055％吐温-20的pH7.3-7.5，0.009-0.011mol/L的磷酸盐缓冲液。...

【专利技术属性】
技术研发人员：王毅谦，陆慧媛，陈君义，刘蓓一，龙云凤，方云涛，
申请(专利权)人：江苏出入境检验检疫局动植物与食品检测中心，
类型：发明
国别省市：江苏;32