一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法技术

本发明专利技术公开了一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法，包括以下步骤：步骤一、溶剂浸提：采用浓度为65‑85%的乙醇溶液，浸提海洋球石藻粉，液料比5:1至10:1（mL/g），浸提温度25‑45℃，浸提时间60‑120min；步骤二、离心：离心取上清，离心条件：4℃，6000rpm离心10分钟；步骤三、吹干：上清液用氮气吹干至恒重，制得所述海洋球石藻细胞总脂。同时本发明专利技术通过单因素和正交试验确定海洋球石藻中总脂提取的最佳工艺条件为：乙醇浓度75%，液料比10:1（mL/g），浸提温度35℃，浸提时间120 min，在该条件下海洋球石藻细胞总脂提取率是细胞干重的26.38%，且实验重复性好。

Method for efficiently extracting total lipid of marine algae cell

The invention discloses a method for efficiently extracting marine coccolithophorid cells of the total lipid, which comprises the following steps: Step 1, solvent extraction: the ethanol concentration was 65 85%, extraction of emiliania huxleyi powder, liquid material ratio of 5:1 to 10:1 (mL/g), extraction temperature of 25 DEG C 45 the extraction time of 60 120min,; step two, centrifugal centrifugal supernatant, centrifugal conditions: 4 degrees, 6000rpm centrifugal 10 minutes; step three: dry, dried by nitrogen to constant weight was prepared by the marine coccolithophorid cell total fat. At the same time, the invention by single factor and orthogonal test to determine the optimum extraction conditions of total lipid of emiliania huxleyi in: ethanol concentration 75%, solid-liquid ratio 10:1 (mL/g), extraction temperature of 35 DEG C, extraction time 120 min, in emiliania huxleyi cells under these conditions, the extraction rate of total fat cell 26.38% dry weight and good repeatability.

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及生物制药的
，尤其涉及一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法。
技术介绍
作为海洋生物资源中最主要的浮游植物兼初级生产者，海洋微藻不仅在种类和数量繁多、易于人工培养、繁殖较快等方面有着自身的优势，而且在海洋生态系统的物质能量及全球地化循环中有着举足轻重的作用。同时又拥有海洋这一独特的生态系统作为温床，因此其代谢产物的化学组成和陆生生物大不相同，它们可以通过代谢途径产生一些新结构。海洋微藻作为高光合生物有其颖的生物活性物质，如色素、甾醇、蛋白质、生物碱等具有较高的抗肿瘤、抗氧化、抗菌及免疫调节等生物活性。从海洋微藻中分离的β-胡萝卜素、虾青素、藻蓝素、叶黄素以及多酚类物质具有良好的抗氧化、抗衰老、预防癌症等作用，可以作为新型保健食品和新药来源特殊的原料成本优势，而且海洋微藻细胞中脂类含量可高达细胞干重的80％。部分海洋微藻中含有丰富的EPA、DHA和AA等活性物质，可用于保健、食品、化妆品和医药等领域，对维持人体多不饱和脂肪酸的平衡、防止某些疾病、维护与调理生理健康等方面具有显著功效。海洋球石藻(Coccolithophores)是一类单细胞海洋微型浮游植物(直径3～10μm)，广泛分布于世界范围的近海和大洋水域中。海洋球石藻细胞中营养成分丰富，含有二十二碳六烯酸(DHA)，聚酮类化合物等活性物质，有良好的抗菌、抗虫、抗肿瘤等生物学活性，在生物、食品、医药等技术研究领域有广阔的应用前景。研究发现海洋球石藻总脂含量为细胞干重的31.83％。因此，海洋球石藻在医药、食品、农业及环保等领域的应用潜力亟待开发。本专利技术以海洋球石藻为材料，通过比较和优化其总脂的提取条件，建立一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法。
技术实现思路
本专利技术针对现有技术的不足，提供一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法。为了实现上述目的，本专利技术解决其技术问题所采取的技术方案是：一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法，包括以下步骤：步骤一、溶剂浸提：采用浓度为65-85％的乙醇溶液，浸提海洋球石藻粉，液料比5:1至10:1(mL/g)，浸提温度25-45℃，浸提时间60-120min；步骤二、离心：离心取上清，离心条件：4℃，6000rpm离心10分钟；步骤三、吹干：上清液用氮气吹干至恒重，制得所述海洋球石藻细胞总脂。作为实施例的优选方式，采用浓度为75％的乙醇溶液，浸提海洋球石藻粉，液料比10:1(mL/g)，浸提温度35℃，浸提时间120min。作为实施例的优选方式，所述海洋球石藻粉的制备方法为：采收处于稳定生长期的海洋球石藻细胞悬浮液，使用圆盘过滤器经2.0μm滤膜过滤，从滤膜上轻轻刮取藻细胞；藻泥经超纯水除盐后，冷冻干燥获得藻粉，保存于干燥器中备用。作为实施例的优选方式，所述海洋球石藻细胞的培养方法为：采用0.45μm滤膜后的海水为基础介质，采用f/2培养基培养，其中所述培养基培养中含有体积分数为70％的海水，121℃灭菌；藻株生长于光照强度是40-50E/(m2·s)环境中，光暗时间比为14h:10h，温度18℃，每天手动摇瓶3～5次。本专利技术以海洋球石藻细胞为材料，通过比较和优化其总脂的提取条件，建立了一种高效提取球石藻细胞总脂的工艺，采用乙醇浓度75％，液料比10:1(mL/g)，浸提温度35℃，浸提时间120min，在该条件下海洋球石藻细胞总脂提取率是细胞干重的26.38％，且实验重复性好。附图说明图1为本专利技术不同提取溶剂的总脂提取率；图2为本专利技术不同前处理方法对球石藻总脂提取率的影响；图3为本专利技术不同乙醇浓度对海洋球石藻总脂粗提物的影响；图4为本专利技术不同液料比对海洋球石藻中总脂粗提物的影响；图5为本专利技术不同提取温度对海洋球石藻中总脂粗提物的影响；图6为本专利技术不同提取时间对海洋球石藻中总脂粗提物的影响。具体实施方式以下结合附图和具体实施方式以对本专利技术作进一步说明。实施例1海洋球石藻细胞总脂的提取1.1球石藻的培养藻株生长于光照强度是40-50E/(m2·s)环境中，光周期是14h:10h(光：暗)，温度18℃，每天手动摇瓶3～5次。培养用海水取自厦门市集美龙舟池砂滤海水，0.45μm滤膜后的海水为基础介质。采用f/2培养基(70％海水)培养，121℃灭菌。1.2球石藻藻粉的获得采收处于稳定生长期的球石藻细胞悬浮液，使用圆盘过滤器经2.0μm滤膜过滤，从滤膜上轻轻刮取藻细胞。藻泥经超纯水除盐后，冷冻干燥获得藻粉，保存于干燥器中备用。1.3总脂的提取方法一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法，包括以下步骤：步骤一、溶剂浸提；步骤二、离心：离心取上清，离心条件：4℃，6000rpm离心10分钟；步骤三、吹干：上清液用氮气吹干至恒重，制得所述海洋球石藻细胞总脂。1.4总脂粗提物的提取率1.5提取溶剂的选择准确称取200mg藻粉，分别加入石油醚，乙酸乙酯，丙酮，乙醇，氯仿:甲醇(2:1)，石油醚：乙醚(2:1)，在液料比5:1(mL/g)，温度35℃，提取时间30min的条件下进行萃取，为了保证实验数据的准确性，每组实验设置三个平行组，计算总脂粗提物得率，从而确定提取溶剂。1.6不同前处理方法的选择准确称取200mg藻粉，以无水乙醇为提取剂，在液料比5:1(mL/g)，温度35℃，提取时间为30min的条件下，分别用超声法、破碎法、酸热法和普通溶剂浸提法对藻粉中的总脂类物质进行抽提，比较总脂粗提物得率，从而确定前处理方法。1.7单因素试验通过以上实验确定了前处理方法和合适的提取溶剂后，选择乙醇浓度、提取时间、提取温度及液料比等4个对总脂粗提物得率有较大影响的因素进行单因素实验。准确称取200mg的藻粉，按一定的液料比加入不同浓度的乙醇溶液，在一定的温度下提取一定时间，离心收集上清液，在氮气保护下吹干至恒重。在测定另一因素时，固定其他因素即可。每组实验做三个平行，计算总脂粗提物得率。1.8正交试验在单因素实验基础上，选择影响较大的时间、温度、乙醇浓度、液料比为主要因素，以总脂粗提物得率为指标，设计L9(34)正交试验对提取工艺进行优化，结果进行极差分析确定优化的条件。表1L9(34)正交因素水平表1.9最佳提取条件下重现性考察在最佳提取条件下，设置5个平行试验，通过计算5次实验的相对标准差考察实验重现性。实施例2实验结果2.1提取溶剂的选择本实验按照溶剂极性的不同选用了6种有机溶剂提取球石藻细胞中的总脂类，其中包括4种单一溶剂和2种混合溶剂。在液料比5:1(mL/g)，温度35℃，提取时间30min的条件下，分别用石油醚、乙酸乙酯、丙酮及乙醇等4种单一溶剂和氯仿:甲醇(2:1)，石油醚：乙醚(2:1)两种混合溶剂进行提取，总脂提取率计算结果如图1。结果表明，石油醚对海洋球石藻中总脂的提取率最低，是11.3％，乙酸乙酯和丙酮的提取率差异不大，氯仿甲醇体系对球石藻中总脂的提取率最大，可达到24.67％，但是由于这一体系剧毒，不利于工业化生产。而乙醇作为溶剂的提取率可达20.33％，且此溶剂安全，并且与氯仿甲醇体系相比差异不显著(P＞0.05)，因此后续实验选择乙醇作为提取溶剂。2.2不同前处理方法的选择分别采用超声法、破碎法、酸热法和普通溶剂浸提法提取球石藻中总脂，结果如图2所示。从图2可以看出，4种方本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、溶剂浸提：采用浓度为65‑85%的乙醇溶液，浸提海洋球石藻粉，液料比5:1至10:1（mL/g），浸提温度25‑45℃，浸提时间60‑120min；步骤二、离心：离心取上清，离心条件：4℃，6000rpm离心10分钟；步骤三、吹干：上清液用氮气吹干至恒重，制得所述海洋球石藻细胞总脂。

【技术特征摘要】
1.一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法，其特征在于：包括以下步骤：步骤一、溶剂浸提：采用浓度为65-85%的乙醇溶液，浸提海洋球石藻粉，液料比5:1至10:1（mL/g），浸提温度25-45℃，浸提时间60-120min；步骤二、离心：离心取上清，离心条件：4℃，6000rpm离心10分钟；步骤三、吹干：上清液用氮气吹干至恒重，制得所述海洋球石藻细胞总脂。2.如权利要求1所述的一种高效提取海洋球石藻细胞总脂的方法，其特征在于：采用浓度为75%的乙醇溶液，浸提海洋球石藻粉，液料比10:1（mL/g），浸提温度35℃，浸提时间120 min。3.如权利要求1所述的一种高效提取...

【专利技术属性】
技术研发人员：刘静雯，李健，马亚瑞，
申请(专利权)人：集美大学，
类型：发明
国别省市：福建;35