本发明专利技术提供一株具有抗氧化活性的类球红细菌及其菌剂的制备方法和用途，该类球红细菌菌种分类名称为：类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)WLC11，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2013年11月27日，保藏编号：CGMCC No.8513。该类球红细菌活菌菌剂具有强抗氧化性，可用于制成保健食品。
Preparation method and application of antioxidant activity of Rhodobacter sphaeroides and its microbial agent
The invention provides a strain of Rhodobacter sphaeroides has antioxidant activity and inoculum preparation method and application thereof, the Rhodobacter sphaeroides species name: Rhodobacter sphaeroides (Rhodobacter WLC11, sphaeroides) preservation unit China microbe preservation Management Committee General Microbiology Center Address: Beijing Chaoyang District City, Beichen No. 1 West Road No. 3 hospital, preservation China Sciences Institute of microbiology, date: November 27, 2013, the accession number: CGMCC No.8513. This kind of Rhodobacter sphaeroides bacteria has strong antioxidant ability and can be used to make health food.
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于微生物领域，涉及类球红细菌制剂及其制备方法，具体涉及一种具有抗氧化活性的类球红细菌活菌及其菌剂的制备方法和用途。
技术介绍
光合细菌是自然界重要的一类微生物类群，因其含有丰富营养药用成分及独特生物转化功能而日益受到国内外学者广泛关注，其在保健食品领域中应用是普遍关注的焦点之一。当前国外，光合细菌已在保健食品中应用，可见光合细菌在保健食品中应用已有一定基础。类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)属于紫色无硫光合细菌，是革兰氏阴性细菌，能够进行好氧、厌氧和黑暗中发酵等多种代谢途径，生存范围广，能产生超氧化物歧化酶(SOD)、辅酶Q10和类胡萝卜素等多种生物活性物质，已成为保健食品领域中一种非常有工业化开发潜力的微生物。类胡萝卜素是(carotenoids)是自然界中广泛存在的一种天然色素。类胡萝卜素是维生素A原，具有清除自由基、抗氧化、增强免疫力、防癌等功能，作为着色剂和功能成分广泛应用于食品、医药和化妆品等，然而化学合成类胡萝卜素因毒性其应用受到限制。动物和人不能自身合成类胡萝卜素，只能从外界摄取才能满足身体需求。微生物生物合成商业化生物活性色素类胡萝卜素因其高效和易于操控受到广泛关注。辅酶Q10作为有氧呼吸电子传递系统中的一种重要的电子载体，不仅是细胞呼吸和细胞代谢的激活剂，也是重要的抗氧化剂和非特异性免疫增强剂，对清除体内自由基及稳定生物膜功能有重要作用。辅酶Q10可以用来治疗心血管疾病、癌症(尤其是乳腺癌)、牙周病，并且有助于预防药物的不良影响。辅酶Q10在神经系统疾病方面有很多应用，其中包括肌肉萎缩症、神经原性肌萎缩症和线粒体脑肌肉病变等。在最近几年，辅酶Q10也作为抗氧化剂应用于化妆品来延缓衰老。超氧化物歧化酶(SOD)能催化超氧阴离子自由基发生歧化反应，从而能有效清除机体内超氧阴离子自由基，是生物体重要的细胞防御系统之一，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗辐射和消炎作用，广泛应用于医药、保健食品和化妆品等领域。目前已有文献报道了类球红细菌产类胡萝卜素、辅酶Q10、SOD这3种生物活性物质的发酵条件优化、提取纯化和鉴定。但是类胡萝卜素、辅酶Q10、SOD在提取中活性必然会收到损失，如何直接利用类球红细菌活菌同时获得这3种生物活性物质的研究不多，尤其是类球红细菌是否适于作为食品或保健食品供人食用还未见报道。
技术实现思路
为了解决上述问题，本专利技术的目的是提供一株类球红细菌，该菌含有超氧化物歧化酶(SOD)、辅酶Q10和类胡萝卜素，具有强抗氧化活性，可作为保健食品使用。本专利技术的另一个目的是提供一种含有上述类球红细菌的活菌制剂。本专利技术的又一个目的是提供上述类球红细菌的活菌制剂的制备方法。本专利技术的还提供一个目的是上述类球红细菌的应用。为了实现上述目的，本专利技术提供一株类球红细菌，菌种分类名称为：类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)WLC11，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2013年11月27日，保藏编号：CGMCC No.8513。后述类球红细菌、类球红细菌8513、类球红细菌8513菌株均指本专利技术的菌株。本专利技术还提供一种活菌菌剂，含有上述的类球红细菌的活菌，其含菌量为106cfu/mL-1010cfu/mL。进一步地上述活菌菌剂为类球红细菌活菌的发酵液或活菌混悬液冻干粉剂。本专利技术还提供上述活菌菌剂的制备方法，包括如下步骤：1)将上述述的类球红细菌菌株接种于平板固体培养基中培养37℃培养，3-5d，然后挑取单菌落接种到斜面固体培养基中37℃培养，3-5d；2)挑取斜面培养基中单菌落接种于种子培养中进行32℃，180r/min摇床振荡培养24h得到一次种子液，然后取5％进行再次进行培养获得二次种子液；3)按照10％的接种量将摇床活化的液体种子接种到液体发酵培养基中32℃，180r/min摇床振荡培养48h，得到发酵液；或更进一步4)将发酵液8000r/min，4℃离心10min，用蒸馏水洗涤1次，a.将菌泥重悬于磷酸盐缓冲液中获得菌体混悬液，或b.采用冷冻干燥方法制成冻干粉剂。优选地，所述固体培养基配方为：葡萄糖2％，胰蛋白胨1％，酵母浸粉1％，氯化钠0.5％，琼脂2％，余量为水，pH8.5。优选地，所述种子培养基配方为：葡萄糖2％，胰蛋白胨1％，酵母浸粉1％，氯化钠0.5％，余量为水，pH7.2。优选地，所述液体发酵培养基配方为：苹果酸0.4％，葡萄糖2％，胰蛋白胨0.7％，磷酸氢二钾0.09％，磷酸二氢钾0.06％，硫酸铵0.7％，生长因子溶液1％，余量为水，pH8.0。其中生长因子溶液配方：维生素B1 0.1％，烟酰胺(VPP)0.1％，生物素0.0016％，对氨基苯甲酸0.1％，余量为水，pH8.0。上述培养基除生长因子溶液经过滤灭菌外，均在121℃高压蒸汽灭菌20min。本专利技术还提供上述的类球红细菌或活菌菌剂作为保健食品的应用。本专利技术的类球红细菌8513菌株是将类球红细菌3757菌株进行紫外线诱变育种而得到的突变菌株。类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)3757菌株，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，编号CGMCC NO.3757。将类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)3757菌株紫外线诱变育种筛选类球红细菌3757菌株的主要步骤如下：在无菌操作条件下，将类球红细菌3757菌株的平板菌落采用稀释法，以85％NaCl溶液进行梯度稀释，稀释梯度为10-1、10-2、10-3、10-4、10-5、10-6、10-7。随后暗室操作，将平板培养基置于紫外灯下照射，同批次分别用0s、30s，40s，50s进行诱变。随后放入不透光恒温培养箱中培养，培养温度为28℃，培养时间3-5d，以菌株长成为宜。当菌株长成后，根据菌株的生长情况进行筛选。同未处理的菌株作为对照，将长得比原始菌株较大的菌株挑出，标上号码，接种到固体平板培养基上，进行划线培养，培养温度28℃，培养时间3-5d，直到菌落长成；然后将长成的单菌落保存于4℃冰箱中，半年转接1次，获得初筛菌株。再将保藏的初筛菌株经过接种和液态发酵复筛出产类胡萝卜素产率较高的类球红细菌8513菌株，经测定其产率较原始菌株类球红细菌3757菌株提高了21.7％。本专利技术的有益效果在于：本专利技术提供一株类球红细菌及其活菌制剂，该类球红细菌及其活菌制剂具有强抗氧化性，可通过制成保健食品供使用者一次性获得类胡萝卜素、辅酶Q10和SOD的抗氧化活性，实现抗衰老等目的，无需担心分别服用抗氧化物质的提取环节的有机溶剂污染问题，减少了生产环节，降低了生产成本。具体实施方式下面以具体实施例来说明本专利技术所要表达的核心思想。实施例1制备类球红细菌活菌菌剂1菌种活化配置固体培养基(质量百分含量，以下同)：葡萄糖2％，胰蛋白胨1％，酵母浸粉1％，氯化钠0.5％，琼脂2％，余量为水，pH8.5；并将其与培养皿置于121℃高压蒸汽灭菌20min；然后无菌条件下，倒平板，挑类球红细菌进行平板划线；将平板置于37℃培养，3-5d；配置斜面培养基，斜面培养基与上述固体培养基一样本文档来自技高网...
【技术保护点】
一株类球红细菌，其特征在于，菌种分类名称为：类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)WLC11，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2013年11月27日，保藏编号：CGMCC No.8513。
【技术特征摘要】
1.一株类球红细菌，其特征在于，菌种分类名称为：类球红细菌(Rhodobacter sphaeroides)WLC11，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期：2013年11月27日，保藏编号：CGMCC No.8513。2.一种活菌菌剂，其特征在于，含有权利要求1所述的类球红细菌的活菌。3.如权利要求2所述的活菌菌剂，其特征在于，所述类球红细菌的活菌含菌量为106cfu/mL-1010cfu/mL。4.如权利要求2或3所述的活菌菌剂，其特征在于，所述活菌菌剂为类球红细菌活菌的发酵液或活菌混悬液或冻干粉剂。5.一种如权利要求2至4任一项所述活菌菌剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：1)将权利要求1所述的类球红细菌菌株接种于平板固体培养基中培养37℃培养，3-5d，然后挑取单菌落接种到斜面固体培养基中37℃培养，3-5d；2)挑取斜面培养基中单菌落接种于种子培养中进行32℃，180r/min摇床振荡培养24h得到一次种子液，然后取5％进行再次进行培养获得二次种子液；3)按照10％的接种量将摇床活化的液体种子接种到液体发酵培养...
【专利技术属性】
技术研发人员：李祖明，
申请(专利权)人：北京联合大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
还没有人留言评论。发表了对其他浏览者有用的留言会获得科技券。